艾滋病梅毒丙肝检测与解释课件

1、HIV、TP、HCV的检验及意义HIV实验室检测检测样本 HIV抗体 酶免-血清/血浆，尿液 快速检测-血清/血浆/全血，唾液CD4：抗凝全血病载、基因型、耐药：血浆 样本保存抗体检测：短期（1周）内进行检测的可存放于28， 一周以上应存放于-20以下。 筛查阴性样品，建议至少保存12个月； 筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年 核酸检测：血浆4天内进行检测的可存放于4，3个月以内应存放于-20以下，3个月以上应置于-70以下。CD4：室温（1825）保存和运输。要求48小时内染色，染色后6小时内分析；如采血后24小时内染色，可在染色后24小时内分析。 HIV抗体检测

2、 筛查试验 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验 快速检测（RT） 确证试验 免疫印迹试验（WB） 条带免疫试验 放射免疫沉淀试验（RIPA） 免疫荧光试验（IFA） 初筛和复检流程 样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性图1 HIV抗体筛查检测流程确证流程 质量控制 试剂盒内部对照 ：按照试剂盒要求设置使用室内质控品：外购、阳性对照/样本稀释ELISA检测 20次内即刻法质控 20次后， Levey-Jennings质控图 更换试剂厂家必须重新制作质控图，

3、同种试剂不同批号可继续使用（注明批号） 发现失控、位移及时查找原因，必要时重新开始质控快速检测 更换批号进行质量验证 注意反应时间、温度、数量控制设备检定、维护强检设备 酶标仪、移液器、高压锅、温度计（可自行比对）自行维护 生物安全柜、洗板机、洗眼器、水平（梅毒）旋转仪温度控制 冰箱、温箱/水浴箱内放置经检定（比对）的温度计高压灭菌放置指示卡洗眼器定期进行维护SOP文件（1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2）检测方法和步骤；（3）试剂使用和保存；（4）仪器的使用维护和校准；（5）质量控制要求及程序；（6）结果解释与报告；（7）保密程序；（8）实验室数据、相关文件记录与保存；（9）不确定

4、样品追踪和处理；（10）实验室安全防护及实验室的清理和消毒。 实验室记录检测登记表试验原始记录（ ELISA、快速、RPR/TURST ）报告单/化验单 复检化验单筛查阳性填写，信息收集完整仪器使用、维护保养记录质控资料消毒记录废弃物处理登记冰箱温度记录人员健康档案（体检、疫苗接种记录，化验单、体检报告） 实验室生物安全 实验室：级生物安全实验室（BSL-2） 建立安全制度：S-SOP、意外事故处理预案、信息安全及保密制度培训和管理：全员培训、标准防护原则个人防护：防护用品与设施、健康监护安全操作：样品采集与管理、仪器设备使用、利器使用消费与污物处理 梅毒实验室检测技术梅毒螺旋体-梅毒的病原体

5、分类：螺旋体目（Spirochaetales）螺旋体科（Spirochaetaceae）密螺旋体属（Treponema）苍白螺旋体种（Treponema pallidum）分几个亚种梅毒螺旋体（TP）小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细4年虽已无性传播，但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小; 常用梅毒实验室检测方法病原学检测血清学检测病原学检查原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（1）暗视显微镜检查 （2）镀银

6、染色法 （3）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。 病原学检查的临床意义螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。梅毒血清学检测方法(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。问题： 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异

7、性抗体）。未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。问题： 临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么需要做定性和定量两种检测方法？ 非梅毒螺旋体抗原血清学原理方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？ 2、定性试验加

8、样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29 ） ，亮光下观察结果？滴/mL，1滴=？ul非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅 2、定性试验加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29 ） ，亮光下观察结果60滴/mL，1滴=17ul100r/min约18mm非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水

9、（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512定量试验结果判断血清稀释度结果？1:21:41:81:16+-？+-？+-？问题：定量试验原倍血清滴度是多少？问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。1:11:21:41:81:161:321:641

10、:2561:1281:512定量试验结果判断血清稀释度结果1:11:21:41:81:16+-1:1+-1:2+-1:8TRUST 1:16非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断RPR 1:2561:11:21:41:81:161:11:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:321:641:1281:2561:512非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清

11、试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。梅毒病期敏感性(%)特异性(%)一期86（77-99）-二期100隐性98(95-100)（一般滴度1:8，但不排除95%补充试验阳性）。 b.所有筛查试验阳性标本，均进行RIBA；或先作HCV RNA检测，阴性标本再测RIBA补充实验： 免疫印迹试验 HCV RNA检测HCV抗体的检测方法筛查试验 酶联免疫吸附试验 胶体金快速试验 化学发光试验 免疫荧光试验临床诊断相关的监测策略和结果报告 1.筛查试验 初筛试验呈阳性反应，不能出具阳性报告，必须进入复检程序

12、，用原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂进行复检筛查试剂样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂报告阴性HCV临床诊断筛查检测流程样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性HIV抗体筛查检测流程复检阳性反应样品阳性反应免疫印迹试验阴性反应报告阴性HCV补充试验检测流程（1）、（3）不确定核酸检测阳性反应阴性反应报告不确定报告阳性2.复检呈阳性反应的样品，进行补充试验。临床诊断补充试验

13、检测流程（2） 仅限于检测方法/试剂给出了特定的阈值（与免疫印迹法比较，其阳性预测值不低于95%）时使用。一般采用S/CO比值。说明书中会给出此值。检测结果的解释（1）检测结果的解释（2）Se %Sp %PPV %NPV %漏检率%误诊率%不做补充试验85.6988.5792.4579.4914.0411.43做补充实验96.4910093.2293.943.510补充试验策略检测指标的价值为了出具真实可靠的临床诊断报告，补充实验还是非常有必要进行的。关于HCV抗原HCV抗原检测是近几年快速发展起来的一种新的检测HCV指标，与HCV RNA检测相平行。 定量检测可用于疗效评价与预后判断HCV感染窗口期免疫功能受损或缺陷的群体未发生HCV血清阳转（如HIV感染者、长期透析的肾病患者