临床免疫学和免疫检验2015讲义感染性疾病

1、第二十二章性疾病与免疫检测第一节 细菌性疾病的免疫检测临最为常用的是病原体抗原检测和宿主抗体检测。患者样本中若有病原体抗原检出，即可表明有该病原体的存在；病原体机体时可诱导产生相应的抗体，特异性抗体的检出是临床据。的重要依一、链球菌（一）链球菌链球菌最常用的免疫学检查是抗链球菌溶血素“O”（ASO）检测。临常采用胶乳凝集试验、免疫散射比浊法检测 ASO。ASO 增高常见于急性咽炎等上呼吸道（二）猪链球菌、风湿性心肌炎、心包炎、风湿性关节炎和急性肾小球肾炎。猪链球菌的检查有细菌培养、鉴定和免疫学检测等方法。分子应用患者技术是鉴定分型学鉴定。方法，常用于猪链球菌的快速以及流行病学。免疫学技术主要二

2、、伤寒沙门菌沙门菌可致多种，轻者为自愈性胃肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤寒沙门菌1.肥达反应的主要依赖于免疫学检测方法。伤寒沙门菌有菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原，三者的抗体均非保护性抗体。由于（O）与（H）抗原的抗原性较强，故常用凝集试验（肥达反应）辅助临床。产生凝集时抗体。效价1:80 为阳性，或双份效价呈 4 倍以上增长，结合流行病学资料可以作出2.酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于检测伤寒沙门菌的抗原和抗体。目前有：以伤寒沙门菌脂多糖（内毒素的主要成分）为抗原，用间接 ELISA 法检测伤寒患者中特异性 IgM 抗体，该方法有助于伤寒的早期。以高纯度的伤寒沙门菌 V

3、i 抗原反应板，采用 ELISA法测定患者中的 Vi 抗体，有助于检出伤寒带菌者及慢性带菌者。三、结核分枝杆菌结核分枝杆菌的免疫学方法有：1.结核菌素试验（tuberculest）包括针对旧结核菌素（old tuberculin，OT）与结核菌素纯蛋白衍生物（purified protein derivative， PPD）两种菌体蛋白。2.分枝杆菌抗体检测以分枝杆菌外膜抗原为已知抗原，检测待测中的分枝杆菌抗体。可采用胶体金方法进行。需注意的是，其他分枝杆菌3.全血干扰素测定法、麻风病也可呈阳性。当全血与 PPD 和对照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴细胞可IFN-，通过检测 IFN-

4、的含量来鉴定菌种。本试验所得结果与结核菌素试验相当，且具有受 BCU 接种史影响小、又能与非结核分枝杆菌进行区分的优点，同时还可避免结核菌素试验在操作上与结果判断上存在的多种影响。或人为的第二节 真菌性疾病的免疫检测一、深部真菌（一）念珠菌（二）隐球菌（三）（四）真菌的免疫学检测二、类真菌卡氏肺孢菌，又称卡氏肺孢子虫，为类真菌。目前病原主要依靠形态学检查，呼吸道物或肺活检组织切片染色见肺泡内状嗜物质中富含本病原体。支气管术和支气管肺活检时本病原体发现率可达 90%。近年来，ELISA 和胶乳微粒凝集试验被用于检测抗原抗体和相应抗原，同时分子生物学技术（如 PCR）也被用于快速早期。第三节性疾病

5、的免疫检测一、流感（一）流感免疫学检测主要包括：1.的抗原检测常采用免疫荧光或酶标记技术，以标记的特异性抗体检测鼻咽物中的流感抗原。2.的抗体检测血凝抑制试验或补体结合试验可以检测急性期和恢复期患者总抗体效价，效价 4 倍升高有助于回顾性和流行病学，但不能用于早期。时间分辨免疫荧光技术检测流感（二）抗原。AIV的免疫学主要包括对 AIV 特异性 IgM 和 IgG 抗体的检测。检测方法包括：血凝抑制试验、神经氨酸抑制试验、琼脂免疫扩散试验、ELISA 法及抗体斑点。ELISA（DoISA）法等。二、轮状1.RV 抗原检测免疫学包括：用 ELISA 或者免疫酶斑点试验从粪便标本中检测 RV 抗原

6、，如果结果阳性则可为 RV。如用单克隆抗 RV 抗体检测，灵敏度可大大提高，可用于患者2.抗体检测和。可采用 ELISA 法检测中特异性 IgM、IgG 抗体，通常 RV5 天后患者中即可测出 IgM 抗体水平的升高，因此可用于临床轮状的早期意义。IgG 抗体的检测常采用发病早期和恢复期双份进行，4 倍以上的增长则有三、肝炎（一）甲型肝炎甲型肝炎的主要依赖对中特异性抗体的检测，抗原检测、分离及分子技术未作为常规方法。通常采用 ELISA 和化学发光技术对 HAV IgG 及 IgM 进行检测。HAV IgM 是的特异性标志,有助于区分现症间短（24和既往。HAV-IgM 在急染时出现较早（发病

7、后 14 周，上升快，效价高，持续时36 个月后转），是急性 HAV或者复发的可靠指标。HAV-IgG-般于后 4 周出现，可维持多年，甚至终生。（二）乙型肝炎1.乙型肝炎表面抗原HBsAg 的检测可采用固相放射免疫法、ELISA、反向间接血凝试验等方法，是乙型肝炎患者早期诊断的重要指标。目前可以采用化学发光法对有价值。中的 HBsAg 进行定量检测，这对肝炎患者动态疗效观察很2.乙型肝炎表面抗体目前常用的检测方法是固相放射免疫法和 ELISA 法（1）抗-HBs 阳性提示急染后的康复。（2）衡量预防接种效果的最主要指标。3.乙型肝炎e 抗原HBeAg 阳性是乙型肝炎传染性的标志，在急性乙型肝

8、炎早期常有 HBeAg 的检出。早期，HBeAg 与 HBsAg 同时阳性可能性较大；HBeAg 阳性尚和 HBVDNA、肝脏损害程度相关。HBeAg 阳性标志着患者有较强的传染性。4.乙型肝炎e 抗体（1）抗-HBe 多出现于急性肝炎恢复期的患者。（2）乙型肝炎e 抗原的学转换，即 HBeAg 含量同时伴抗-HBe 的出现，是目前临慢性乙型肝炎治疗的近期目标（最初目标是减少乙型肝炎义。的 DNA，对临床化治疗有重要的指导意5.乙型肝炎（1）作为抗原传染性、活动变的标志 HBsAg、HBeAg、抗-HBc 等指标是体内存在乙型肝炎颗粒的间接标志，而 HBcAg 则是乙型肝炎存在的直接标志，HB

9、cAg 与 HBV呈正相关，可反映 HBV 的活动性及程度。（2）有助于病情、疗效和预后的判断。（3）有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎。6.乙型肝炎（1）急性抗体-IgM：抗-HBe-IgM 是早期 HBV的的特异性学标志。（2）预后判断。（4）急性重型乙型肝炎。乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎它与 HBV 的抗体-IgG前 S1 抗原乙型肝炎（HBV）外膜蛋白包括 S、前 S2 和前 S1 三种成分。前 S2 抗原 pre-S2 抗原上具有一个高免疫性的抗原决定簇和多聚蛋白受体（PHSA-Re），和有密切的关系，并对临床早期、了解预后及高效有重要意义。（三）丙型肝炎丙型肝炎的检查主要包括免疫学及分

10、子生物学检测。针对特异性抗体 HCV-IgG 和HCV-IgM 的免疫学检测是临床常用的HCV-IgM 阳性可作为 HCV 活动性（四）丁型肝炎方法。的学标志，且常与慢性丙肝患者的急性发作有关。1.抗 HDV-IgM 的检测 常用捕获法 ELISA。在 HDV 急一可检出的 HDV染时，抗 HDV-IgM 是首先可以检出的抗体，尤其是在同步的学标志物。时，抗 HDV-IgM 往往是唯2.抗 HDV-IgG 的检测 常采用竞争抑。抗 HDV-IgG 出现在抗 HDV-IgM 下降之际。在慢性 HDV终止后仍可存在数年。（五）戊型肝炎中，其 IgG 抗体保持高滴度，即使 HDVHEV-Ab 检测：

11、HEV-IgM 出现和均较早，持续时间短，是 HEV 急染的指标。HEV-IgG 也可作为 HEV 急染的一项辅助指标。四、冠状1.免疫荧光技术用于检测于 IgG 抗体的测定。中的 IgM 抗体，大疾病开始后的 10 天出现阳性结果。该方法也可用2.ELISA 技术 可用于 SARS 患者中 IgM 和 IgG 抗体混合物的测定，大疾病开始后的 21 天出现。急性期到恢复期可靠的阳性结果。早期，上述抗体有可能无法测出。检测阳性提示既往的的阳转或者是抗体效价的 4 倍增长，提示有近期。TORCH：弓形虫、巨细胞、风疹、单纯疱疹。第四节染的免疫检测一、弓形虫循环抗原（CAg）检测特异性抗体检测 T

12、OX IgM 主要用于急染的，TOX IgG 则用于既往的。二、风疹RUV 总抗体效价常采用血凝抑制试验、中和试验或补体RUV IgG 检测RUV IgM 检测 常采用 ELISA 方法。来进行。三、巨细胞1.HCMV 抗原检测早期抗原免疫荧光检查（DEAFF）：是在传统的细胞培养的基础上发展起来的早期快速技术。HCMV 抗原血症：可帮助早期免疫抑制或免疫缺陷患者的活动性 HCMV。该方法直接定性或定量检测外周血白细胞中 HCMV 抗原的表达，一般在活动2.HCMV 抗体检测染前 1出现阳性。通过检测中特异性 IgG 和 IgM 抗体，HCMV 的。HCMV IgM 阳性提示有活动染。常用的检

13、测方法包括：补体结合试验、间接血凝试验、免疫荧光试验、免疫印迹试验 、ELISA 及放射性免疫试验。四、单纯疱疹单纯疱疹是由单纯疱疹（HSV）所致。HSV 可分为 HsV-1 和 HSV-2 两个亚型。1 型主要引起以外的皮肤、黏膜（如口腔黏膜）和（如脑）的。2 型主要引起部位皮肤黏膜的感染。HSV的检查主要依赖免疫学方法，包括 HSV Ag、HSV IgM 和 HSV IgG。1.HSV 抗原检测采用 HSV 特异性单克隆抗体，以免疫荧光或 ELISA 方法直接检测患者组织或物中的 HSV 抗原。若为阳性则提示为近期2.HSV 抗体检测。是临和 IgG 抗体。用来检测HSV的一种最常见。主要

14、采用间接免疫荧光法和ELISA 法检测特异性HSV IgMHSV-IgM 抗体阳性以及急性期和恢复期双份HSV-IgG 抗体效价增高 4 倍以上，提示近期有 HSV。HSVIgM 是早期的指标。第五节的免疫检测一、疟原虫确诊疟疾有赖于显微镜检疟原虫抗原的检测抗体检测间接荧光抗体试验：是目前国内外应用最为广泛的一种检测方法。ELISA 法.斑点免疫结合试验：抗原为恶性疟原虫可溶性抗原。间接红细胞凝集试验：这种方法测定的抗体只有属特异性，因此一般多采用诺氏疟原虫作为抗原。效价大于 1:16 时具意义。二、血吸虫环卵沉淀反应（COPT）间接红细胞凝集试验（IHA）乳胶凝集试验（LA）4.ELISA5.酶联免疫