砷盐检查法操作规程

1、文件名称神盐检查法操作规程文件编码版本号制订人审核人批准人制订日期审核日期批准日期颁发部门GMP办公室实施日期分发部门质量部变更记录变更原因及目的：1.中国药典版本的更新；2.生产能力的扩容；3.为了更好的执行药品生产质量管理规范。目的：制订神盐检查法操作规程，明确其检查法的操作。依据：中华人民共和国药典2010年版；中国药品检验标准操作规范2010年版。范围：神盐检查法的操作。责任：质检室主任、化验员。内容：1简述1.1神盐检查法（中国药典2010年版二部附录伽J）适用于药品中微 量神盐（以As计）的限量检查。1.2神盐检查法中的第一法（古蔡氏法）用作药品中砷盐的限量检查；第 二法（二乙基二

2、硫代氨基甲酸银法）既可检查药品中砷盐的限量，又可以作 砷盐的含量测定；两法并列，应根据中国药典品种项下规定的方法选用。1.3古蔡氏法是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚神 酸盐反应生成具有挥发性的神化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的神斑， 与同一条件下定量标准神溶液所产生的神斑比较，以判定神盐的限量。1.4二乙基二硫代氨基甲酸银法是将生成的神化氢气体导入盛有二乙基 二硫代氨基甲酸银试液的管中，使之还原为红色胶态银，与同一条件下定量 的标准神溶液所制成的对照液比较，或在510nm的波长处测定吸光度，以判 定含神盐的限度或测定含量。2仪器与用具见下图。.单 Ki: mm图1第一法仪器装

3、置图2第二法仪器装置（古蔡氏法）（二乙基二硫代氨基甲酸银法）第一法仪器装置说明：A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口 塞；上连导气管C （外径8.0mm，内径6mm），全长约180mm； D为具孔的有机 玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致， 其下部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套入旋塞下部孔内， 并使管壁与旋塞的圆孔相吻合，黏合固定；E为中央具有圆孔（孔径6.0mm） 的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。第二法仪器装置说明：A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口 塞，上连导气管C （一端外径为8mm，内径为6mm；另一端长为180

4、mm，外径 为4mm，K径为1.6mm，尖端内径为1mm）。D为平底玻璃管（长为180mm，内 径为10mm， 于 5.0ml处有一刻度）。2.1第一法（古蔡氏法）按中国药典规定：有机玻璃旋塞0和的孔 径应与导气管C内径一致，以免生成的色斑直径不同，影响比色的准确度；B 磨口瓶，C管顶端与D、E有机玻璃旋塞塞盖间应紧密吻合，以防神化氢泄漏。2.2第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）按中国药典规定：B磨口 塞应密闭，以防神化氢泄漏；与标准磨口塞B相连的导气管C 一端长度应不 低于80mm，便于装醋酸铅棉花达80mm，另一端长度应不低于180mm，尖端的 内径不可超过1mm,以保证产生的神化氢吸收完

5、全；D管的标准管与样品管要 一致，管内径，色泽，刻线要相同。3试药与试液3.1标准神溶液 精密量取105C干燥至恒重的三氧化二神0.132g，置 1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用稀硫酸适量中和，再加 稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用 水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1g的As）。3.2碘化钾试液 按试液配制标准操作规程规定，应临用新制。3.3酸性氯化亚锡试液 按试液配制标准操作规程规定，配成后3个 月即不适用。3.4乙醇制溴化汞试液 按试液配制标准操作规程规定，应置棕色磨

6、 口塞玻璃瓶内，在暗处保存。3.5溴化汞试纸取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试 液中，1h后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。3.6锌粒 以能通过1号筛的细粒无神锌粒为宜，如使用锌粒较大时，用 量酌情增加，反应时间亦应延长为1h。3.7醋酸铅棉花 取脱脂棉，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中，湿透 后，沥去过多的溶液，并使之疏松，在100C以下干燥后，贮于磨口塞玻璃瓶 中备用。3.8二乙基二硫代氨基甲酸银试液 按试液配制标准操作规程规定。 本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。4操作方法4.1第一法（古蔡氏法）4.1.1标准神斑的制备4.1.1.1装置的准

7、备 取醋酸铅棉花适量（60100mg）撕成疏松状，每 次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度6080mm。用玻璃棒夹取溴化汞试纸1片（其大小以覆盖D端口径而不露出平面外为宜）， 置旋塞D顶端平面上，盖住孔径，盖上旋盖E并旋紧。4.1.1.2精密量取标准神溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再 加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒 2g，立即将准备好的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540C水浴中反 应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。若供试品需经有机破坏后再行检神，则应精密量取标准神溶液2ml代替 供试品，照该品种项下规定的方

8、法处理后，依法制备标准神斑。4.1.2检查法 取按各品种项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标 准神斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成的神斑与标准 神斑比较，即得。4.2第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）4.2.1标准神对照液的制备4.2.1.1装置的准备 取醋酸铅棉花适量（80100mg），撕成疏松状，每 次少量，用玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度约80mm。 精密量取二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml，置D管中。4.2.1.2精密量取标准神溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml,再 加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10min后

9、，加锌粒 2g，立即将准备好的导气管C与A瓶密塞，使生成的神化氢气体导入D管中， 并将A瓶置2540C水浴中反应45min，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀， 即得。若供试品需经有机破坏后再行检神，则应精密量取标准神溶液2ml代替 供试品，照该品种项下规定的方法同法处理后，依法制备标准神对照液。4.2.2检查法 准备好C管装置，取照该品种项下规定方法制成的供试液， 置A瓶中，照标准神对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。 将所得溶液与标准神对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察，比较， 即得。必要时，可将所得溶液与标准神对照液分别转移至1cm吸收池中，用 分光光度计，在510nm

10、的波长处，以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，分别测定吸光度。5注意事项5.1使用仪器和试液等照本法检查，均不应生成神斑，或经空白试验至多 生成仅可辨认的斑痕。5.2新购置的仪器装置，在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪 器装置依法制备标准神斑，所得神斑应呈色一致。同一套仪器应能辨别出标 准神溶液1.5ml与2.0ml所呈神斑的深浅。5.3制备标准神斑或标准神对照液，应与供试品检查同时进行。因神斑不 稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。标准神溶液应于实验当天配 制，标准神贮备液存放时间一般不宜超过一年。5.4第一法（古蔡氏法）反应灵敏度约为0.75p g （以As计），神斑色泽 的

11、深度随神化氢的量而定，中国药典规定标准神斑为2ml标准神溶液（相 当于2p g的As）所形成的色斑，此浓度得到的神斑色度适中，清晰，便于分 辨。供试品规定含神限量不同时，采用改变供试品取用量的方法来适应要求， 而不采用改变标准神溶液取量的办法。5.5药品中存在的微量神常以三价的亚神酸盐或五价的砷酸盐存在，五价 状态的神生成神化氢比三价神慢，故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使 五价神还原为三价神。5.6如供试品中存在锑盐，将干扰神盐检查，所以本法不适用供试品为锑 盐的砷盐检查。但在中国药典规定的实验条件下，100p g的锑存在不至 于干扰测定。实验中加入氯化亚锡不仅有效的抑制锑的干扰，防止锑化

12、氢与 溴化汞试纸作用生成锑斑或二乙基二硫代氨基甲酸银试液反应，干扰神盐检 查，还可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢能均 匀连续地发生，有利于神斑的形成。5.7供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生H2S气体， 干扰实验，故用醋酸铅棉花吸收除去H2S，因此，导气管中的醋酸铅棉花，要 保持疏松、干燥，不要塞入近下端。5.8制备溴化汞试纸所用滤纸的质量，对生成神斑的色泽有影响，用定性 滤纸，所显神斑色调较暗，深浅梯度无规律；用定量滤纸质地疏松者，所显 神斑色调鲜明，梯度规律，因此必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤 纸；溴化汞纸质一般宜新鲜制备。5.9锌粒大小影响

13、反应速度，为使反应速度及产生神化氢气体适宜，需选 用粒径2mm左右的锌粒。反应温度一般控制在30C左右，冬季可置水浴中。 如反应太快，宜适当降低反应温度，使神化氢气体能被均匀吸收。5.10如供试品为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将高铁离子还原为低 价铁而除去干扰。如枸橼酸铁铉的砷盐检查。5.11有机药物中的砷盐检查可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸 及其盐类，氨基已酸与葡萄糖酸钙等，一般可不经有机破坏而直接依法检查 神盐；多数环状结构的有机药物，因神与杂环分子可能以共价键键合，需先 行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。有机破坏时，所用试剂的含神 量如超过1p g，除另有规定外，应取同量的

14、试剂加入神标准液一定量，按供 试品同样处理，制备标准神斑，再与供试品所生成神斑的颜色比较。5.12如供试品为硫化物、亚硫酸盐或硫代磷酸盐等，则在酸性溶液中可 生成大量硫化氢或二氧化硫气体，干扰检查；可加硝酸使氧化成磷酸盐以除 去干扰，如硫代硫酸钠的砷盐检查。5.13在二乙基二硫代氨基甲酸银法中，需要加入一定量的有机碱以中和 反应中的二乙基二硫代氨基甲酸；USP配制成0.5%二乙基二硫代氨基甲酸银 的毗啶溶液，其缺点是毗啶有恶臭；中国药典2010年版采用含1.8%三乙 胺和0.25%二乙基二硫代氨基甲酸银的三氯甲烷溶液，呈色稳定性及试剂稳定 性均好，低毒，无臭，与神化氢产生的颜色在510nm的波

15、长处有最大吸收。 如遇室温低，按法操作，标准神对照液不显色，可将D管置2540C水浴加 温使显色。5.14二乙基二硫代氨基甲酸银试液在配制后两周内稳定。当供试液中含 神（As）0.757.5p g时显色反应的线性关系良好，2h内稳定，重现性好。 本法操作时由于神化氢气体导入盛有准确5ml的二乙基二硫代氨基甲酸银试 液中，在2540C水浴中反应45min后，有部分三氯甲烷挥发，比色前应添 加三氯甲烷至5.00ml，摇匀，因二乙基二硫代氨基甲酸银试液带浅黄绿色， 测吸光度时要用此试液作空白。6记录与计算6.1记录 必须记录采用的方法，供试品取样量，标准神溶液取用量，操 作过程，使用特殊试剂、试液的

16、名称和用量，实验过程中出现的现象及实验 结果等。6.2计算6.2.1标准神溶液浓度的计算1mol的三氧化二神质量为197.82g，含神（） 2X74.92g，称取三氧化 二神0.132g溶于1000ml溶液中配成的贮备液，每1ml含A量为： S2 x 74.92 x 0.132 x 1000 =0 10mg197.8 x 1000.贮备液定量稀释100倍后所得标准神溶液，每1ml含A量为1.0m g。S6.2.2神限量计算 进行限量检查时，取标准神溶液2.0ml制成对照液， 与供试品溶液在相同条件下处理比较神斑或吸收液的深浅，从而确定神含量 是否超过规定，神限量可用下式计算：神限量%=标准神溶液体积（ml）x标准神溶液浓度（g /ml） X 100% 供试品量（g）如取标准神溶液2.0ml，标准神溶液浓度0.000001g/ml，供试品取样1.0g； 则神限量%= 2x0.000001 X 100