认识荧光显微镜的光立方

1、认识荧光显微镜的光立方什么是荧光？荧光即为物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低 能状态时释放出的光，是非温度辐射光一一冷光。即：物质吸收短波光，进入激 发态，发射出的长波光。无论是物质的自发荧光、荧光染料还是融合表达的荧光蛋白，均需经过特定 波长的光激发（激发光Excitation），电子发生迁移后，能量损失后，发出特定长 波长的光（发射光Emision），可通过检测系统采集，达到识别特定荧光的作用。Forbidde-nTran-sHkin to Triplet StaleHtg-her Energy ancfVibratlcHi State Lowest Singlet

2、 Excited State什么是荧光光立方？在荧光显微镜观察和成像中，通过荧光光立方提供特定波长的激发光和对应 的长波长发射光，从而通过肉眼、显示屏或相机采集荧光信号，因此，荧光光立 方是决定可以检测到何种荧光信号的关键器件，其特性包含EX：激发波长滤光 片参数，EM:发射波长滤光片参数和DM：二分镜参数。以Revolve正倒置一体 荧光显微镜的DAPI光立方为例，EX： 385/30，EM： 450/50，DM： 425。光源发出的光经过DAPI EX，得到特定波长范围的激发光，即得到38515nm 的光，特异性地激发在此范围内才能被激发的荧光物质；DM二分镜是将激发光与 荧光分离的光学元

3、件，作为特殊的反射镜，只反射特定波长的光，允许所有其它波长通过， 因此只有425nm的光能被传输到EM； EM发射滤光片是将荧光基团发出的荧光与其 它背景光分离开来的光学元件。发射滤光片通过二向色镜传输荧光波长的光，同时阻挡从激 发光源（从样品或光学元件反射）泄漏的所有其它光。发射光波长大于EM才能被观察到， 即只有45025nm范围内的光进入检测系统。选择适当的EX，EM滤光片和DM二 分镜能够帮助研究人员获得更高的信噪比（S / N）。Excitation filter （EX）激发滤光片工作示意:Excitation rilter example: EX37O OCDichroic mi

4、rror (DM)二分镜工作示意:Wavdlangch (mn)Emission (EM) filters发射滤光片工作示意：(参考激发波长示意)脸如自ngm rirnjRevolve正倒置一体荧光显微镜提供6种光立方选择和个性化定制服务，而且通过iPad Pro 和Echo app实现完全自动化切换，光源为高能LED，寿命长，光漂白小，且无汞污染风险， 滤光片均为Chroma喷镀膜滤光片，具有超高透光率，6种光立方的光学特性如下：EXEMDMDAPI385/30450/50425FITC470/40525/50495TRITC530/40590/50560TxRed560/40635/60600ALEXA 594580/30635/60594Cy5640/30690/50660Revolve提供多达4个EPI荧光通道和1个