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文档简介
1、关于菌落总数的测定第一张,PPT共二十一页,创作于2022年6月一、菌落总数食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。 第二张,PPT共二十一页,创作于2022年6月二、菌落总数测定的意义1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。2、预测食品存用的期限长短。3、了解细菌在食品中的繁殖动态。第三张,PPT共二十一页,创作于2022年6月三、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:恒温培养箱:36 1 ,30 1 。冰箱:2 5 。恒温水浴箱:46 1 。天平:感量为0.1 g。均质器。振荡器。无菌
2、吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶:容量250 mL、500 mL。无菌培养皿:直径90 mm。pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。放大镜或/和菌落计数器。第四张,PPT共二十一页,创作于2022年6月四、平板倾注法测定菌落总数检验步骤(程序): 检样稀释处理做平板培养菌落计数报告结果第五张,PPT共二十一页,创作于2022年6月(一)、样品的稀释及做平板1、固体和半固体样品:称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min
3、,或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min2 min,制成1:10 的样品匀液。第六张,PPT共二十一页,创作于2022年6月2、液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10 的样品匀液。(一)、样品的稀释及做平板第七张,PPT共二十一页,创作于2022年6月3、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合
4、均匀,制成1:100 的样品匀液。4、上述 操作程序,制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。(一)、样品的稀释及做平板(一)、样品的稀释及做平板第八张,PPT共二十一页,创作于2022年6月5、根据对样品污染状况的估计,选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10 倍递增稀释时,吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。(一)、样品的稀释及做平板(一)、样品的稀释及做平板第九张,PPT共二十一页,创作于2022年6月6、及时将15 mL20 mL
5、 冷却至46 的平板计数琼脂培养基(可放置于46 1 恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。(一)、样品的稀释及做平板(一)、样品的稀释及做平板第十张,PPT共二十一页,创作于2022年6月1ml1ml1ml1:101:10001:1001:100001ml1ml1ml1ml加入46营养琼脂1215ml25g/ml样品生理盐水第十一张,PPT共二十一页,创作于2022年6月 注意:检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止细菌有所死亡或繁殖。 第十二张,PPT共二十一页,创作于2022年6月(二)培养1、待琼脂凝固后,将平板翻转,36 1 培养48 h2
6、h。水产品30 1 培养72 h3 h。2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层3、琼脂培养基(约4 mL),凝固后翻转平板,按1、条件进行培养。第十三张,PPT共二十一页,创作于2022年6月(三)计数和报告 到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于04,但不得超过24h。第十四张,PPT共二十一页,创作于2022年6月1、菌落的选择(1)、单个菌做一个菌落计(2)、呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,作为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算。(3)、如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀,则
7、可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。第十五张,PPT共二十一页,创作于2022年6月2、平板菌落计数的选择 (1)、选取菌落数在30300之间的平板,若有二个稀释度均在30300之间时,比值小于或等于2取平均数,比值大于2则其较小数字。第十六张,PPT共二十一页,创作于2022年6月(2)、如均大于300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告(3)、如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告(4)、如菌落数有的大于300,有的又小于30,不在30300之间,以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告(5)、如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报
8、告。 第十七张,PPT共二十一页,创作于2022年6月3、菌落数的报告菌落数在1100时,按实有数字报告,如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算。固体检样以克(g)为单位报告,液体检样以毫升(ml)为单位报告,表面涂擦则以平方厘米(cm2)报告。 第十八张,PPT共二十一页,创作于2022年6月(四)、检验注意事项1、对照平板出现几个菌落时,要追加对照平板;2、吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分;3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴;4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;第十九张,PPT共二十一页,创作于2022年6月5、检样从开始稀
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