制种技术2参考

1、 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 当开始加热灭菌时，先关闭排气阀，当压力升到5kPa左右时，打开排气阀，集中排出空气，让压力降到零，然后关闭排气阀进行升压灭菌。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 高压蒸

2、汽灭菌法 在高压灭菌过程中，其压力、温度、时间对营养成分有影响，可采用提高温度、压力和缩短灭菌时间的办法减少对营养成分的破坏。虽然温度升高了，破坏增加，但受热时间缩短，则总的破坏量减少。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 常压蒸汽灭菌法 采用自然压力的蒸汽进行灭菌的方法。有蒸笼灭菌、流通蒸汽灭菌灶等。常见的是用钢筋水泥砌成大型的流通蒸汽灭菌灶，一般流通蒸汽温度为1OO，杀菌时间为6-8H。其灭菌容量大，可充分杀死微生物，有的一次可灭菌几千瓶菌种。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭

3、菌方法热力灭菌 湿热灭菌 常压蒸汽灭菌法 灭菌灶结构简单，成本低廉，可自行建造，使用普遍，但是灭菌时间长，储耗大且常有灭菌不彻底的现象。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 间歇灭菌法 指间歇一定时间，连续消毒几次而灭菌的方法，适合于不耐高温的培养基的灭菌，此法是在常压下加热到100，保持20-30分钟，以杀死其中的营养体细胞，然后将培养基在常温下或保温箱中(2837)培养，使芽孢发芽长成营养体，再用同法杀死新长成的营养体细胞，如此反复三次，即可杀死培养基中的全部芽孢和营养体，达到灭菌的目的。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、

4、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 煮沸消毒法 将物品放入水中煮沸一定时间进行消毒的方法。可杀死微生物的营养体，但对细菌的芽孢、真菌休眠体效果差。若在水中加入25的石炭酸或1的碳酸氢钠，可提高消毒效果。此法适于制种及栽培过程中所需的一些物品、器具、器材的消毒。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法热力灭菌 湿热灭菌 巴氏消毒法 将物品在60-70度的温度下经一定时间消毒，杀死有害微生物的方法。适合于不耐高温的培养基以及一些食品如牛奶、酒类、饮料的消毒，既可杀死有害微生物，又不破坏营养成分。如在蘑菇培养的发酵期间

5、，通常采用60-62度的巴氏消毒法，消毒47h，可杀死培养料中的病虫杂菌。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法辐射灭菌 利用辐射所产生的能量进行杀菌的方法，称为辐射灭菌。它可分为电离辐射和非电离辐射。a射线、b射线、r射线、X射线等属电离辐射；紫外线等为非电离辐射。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法辐射灭菌 紫外线辐射 在200300nm范围内紫外线的杀菌作用最好。紫外线的杀菌作用是因为它可以被蛋白质(约280nm)和核酸(约260nm)吸收，造成变性失活,引起致死。紫外线的另一杀菌机制是因辐

6、射空气产生臭氧，臭氧遇水又化合成双氧水，这两种物质都能杀菌。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法辐射灭菌 紫外线辐射 无菌室、接种箱、超净工作台内安装的紫外线灯管，一般照射20-30min，可杀死空气中的微生物。但紫外线穿透力很弱，一层普通玻璃或水均能滤去大量的紫外线，它也不能穿过衣物、纸张等大多数物体。因此，紫外线只适用于空气和物体表面的消毒。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法辐射灭菌 紫外线辐射 我国蘑菇生产中使用的覆土，在日光下曝晒，就是利用日光及其中的紫外线进行杀菌。但必须注意，经紫外

7、线照射致死或损伤的微生物，通过自然光照又能复活，称为光复活作用。因此，经紫外线杀菌后，不要立即开启日光灯。如白天灭菌，无菌室、接种室需用黑窗帘或黑布套遮光半小时，以防止光复活作用，提高灭菌效果。紫外线对人体有害，特别对眼睛有损伤，因此，不能在开启的紫外灯下工作 。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法辐射灭菌 将被照射物质的原子核周围的电子击出，使其变为阳离子，击出的电子可附着在其它原子上，使其变成阴离子，也可以再冲击其它原子，引起继发电离。在液体中，射线使水电离成H+和OH一 ，可直接作用于微生物细胞本身而致死。 电离辐射 第四章 食用菌菌种的

8、生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 重金属盐类 微生物浸在O1-05硝酸银、升汞溶液中，几分钟就会死亡。食用菌组织分离及菇木分离菌种时，常用01升汞溶液进行表面消毒。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 氧化剂 常用于消毒的氧化剂有：1高锰酸钾、1过氧化氢、02-05过氧乙酸、051漂白粉等。其杀菌机制是通过强烈的氧化作用，破坏微生物的原生质或酶蛋白质结构。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消

9、毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 还原剂 甲醛是常用的杀菌还原剂。市售的福尔马林含37一40的甲醛溶液。5的甲醛溶液常用于防腐。培养室、无菌室消毒常以lOmLm3福尔马林原液加5g高锰酸钾氧化熏蒸。甲醛能与微生物细胞蛋白质的氨基结合，引起蛋白质变性，使原生质失去正常活动能力。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 还原剂 喷雾消毒时甲醛溶液体积分数为5。甲醛还有防腐作用，以1：9稀释液可浸制食用菌标本。但甲醛有毒，对人的眼睛、呼吸道、皮肤

10、等有强烈刺激，应注意防护。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 表面活性剂 表面活性剂主要破坏菌体细胞膜结构，造成胞内物质泄漏；蛋白变性，菌体死亡。025肥皂溶液是一种阴离于表面活性剂，它对链球菌作用比01升汞或07来苏尔还要强。常用的025新洁尔灭液用于皮肤消毒，它是人工合成的季胺盐阳离子表面活性剂。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 酚 类 常用的苯酚又称石炭酸，其0.5可用于皮肤消

11、毒，25%可用于器皿消毒，5可用于空气喷雾消毒。来苏尔是甲酚与肥皂的混合液，常用其35%消毒皮肤、用具；接种箱表面以及器皿。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法药剂消毒 利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒 醇 类 醇类可使膜受伤，同时能使蛋白质变性：通常使用乙醇。无水乙醇与菌体接触后使细胞迅速脱水、表面蛋白凝固，在菌体表面形成保护膜，阻止乙醇分子进一步渗入，影响杀菌力。在实际工作中常使用75的乙醇，杀菌效果最好。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法过滤除菌 对含有加热不稳定物质的培养基

12、，如含有维生素、酶、抗菌素及某些化学药品的培养液进行除菌时，通常采用过滤除菌。膜滤器采用微孔滤膜作材料，当含有微生物的液体通过微孔滤膜时，大于滤膜孔径的微生物不能穿过滤膜而被阻拦在膜上，与通过的滤液分离开来；微孔滤膜具有孔径小、价格低、可高压灭菌、不易阻塞、滤速快及可处理大容量的液体等优点。 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法过滤除菌 第四章 食用菌菌种的生产 一 、菌种的制作 6、消毒与灭菌 (2)常用消毒和灭菌方法渗透压消毒 利用高渗透压杀菌或抑菌的方法，称为渗透压消毒。在高渗溶液中，水从细胞中流出使细胞脱水，也因脱水发生质壁分离，微生物不

13、能进行正常新陈代谢而死亡。盐水菇就是利用高渗透压的食盐溶液来杀菌。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 将子实体的局部组织或孢子移接在斜面试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为菌种分离，菌种分离主要指一级种(母种)的分离。 有些与高等植物共生的菌根菌，如红菇、松菇以及有些要在动物（如白蚁）存在下才产生子实体的菌类，因营养条件复杂，在目前实验条件下，较难在简单的培养基上获得纯菌种。 菌 种 分 离孢子分离法 组织分离法 菇木分离法 孢子弹射分离法 整菇插种法 钩悬法 贴附法 菌褶上涂抹法 孢子印分离法 单孢子分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 平板稀释法 连续稀释法 子实

14、体组织分离法 菌核组织分离法 菌索分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 在无菌操作条件下使孢子在适宜的培养基上萌发，长成菌丝体而获得纯菌种的方法称为 孢子分离法。 特 点 菌丝菌龄短，因是有性繁殖产物，其菌丝生命力强。 侵染病毒的菌类可用孢子分离法脱毒。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 种菇的选择 在生产中必须选择优良品系中的优良个体作分离材料。 选取八、九分成熟的，健壮无杂的第一或第二茬的子实体。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 孢子弹射分离法 它是利用孢子能自动弹射出子实体层的特性来

15、收集孢子。 整菇插种法 孢子收集器来收集孢子 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 整菇插种法 将钟罩上的孔加上棉塞或包上6-8层纱布，放在垫有46层纱布(浸过01升汞液)的塘瓷盘上，纱布上放一培养器，内放一个不锈钢支架。 把收集器包装好，灭菌备用。 将菌幕未破裂的成熟子实体洗干净，用01升汞溶液或025的新沽尔灭浸泡2-3min，以杀死表面的杂菌。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 整菇插种法 对于菌幕破裂、子实层已外露的子实体或无菌幕包裹的子实体，可用棉花蘸75酒精涂擦子实体表面消毒。 按无菌操作要

16、求移人孢子收集器，插在支架上，在适宜的温度中培养。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 整菇插种法 2-3天后孢子散落在培养皿中，加入无菌水，用针筒吸取孢子液，接种在斜面培养基中央，置于22-26恒温箱中培养即可。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 钩 悬 法 在生产上，采集木耳、银耳孢子常用此法，伞菌也可采用此法。 先将新鲜成熟的耳片用无菌水冲洗，然后用无菌纱布将水吸干，取一小片挂在灭菌的钩子上(伞菌则消毒后挂上，钩子的另一端挂在三角瓶口。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法

17、 (1)孢子弹射分离法 瓶内装有培养基，在25下，培养24H。孢子落到培养基上后，取出耳片，塞上棉塞继续培养，然后再转入试管中培养。 钩 悬 法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 取一小块成熟的菌褶或小块菌盖，用溶化的琼脂或胶水、浆糊(需先灭菌)贴附在试管斜面的上方或培养皿皿盖上，经612h，待孢子落下后，立即将试管或培养皿中的培养基移到另一消毒过的空试管或培养皿中进行培养。 贴 附 法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (2)菌褶上涂抹法 将伞菌子实体用75酒精表面消毒，按无菌操作用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹

18、过褶片表面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。 (3)孢子印分离法 取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸上，在20-24静置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在试管培养基上培养。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (4)单孢子分离法 进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品系的单孢于进行杂交，从而培育出新品种。 挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几滴涂于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经48-72h后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到lcm左右时进行镜检，观察有无锁状联

19、合；初步确定是否是单核菌丝。 平 板 稀 释 法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 1、孢子分离法 (4)单孢子分离法 挑取一定量孢子，经连续稀释后，直到每滴稀释液中只有一个孢子，然后滴人试管中保温培养。当发现单个菌落时，转到新试管中继续培养，并通过镜检以确定是否为单孢菌落。 连续稀释法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 2、 组织分离法 组织分离法 是利用子实体内部菌肉组织来获得菌种的一种最简便的方法，是生产上常用的一种分离菌种的方法。 组织分离是一种无性繁殖过程，所得到的菌种是营养后代，后代不易变异，菌株可保持原品种的优良品质。但如采用感染病毒的子实体进行组织分离时，常

20、得到带病毒的菌丝体。 （1）子实体组织分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 2、 组织分离法 选择优良的种菇作为分离材料，用无菌水冲洗后，用75%的酒精溶液表面消毒。取消毒过的刀片从菌柄或菌盖中部纵切、撕开，挑取菌盖与菌柄交界处的一小块组织(火柴头大小)，接种到PDA培养基上3-5天后，接种块上产生白色绒毛状菌丝。 （1）子实体组织分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 2、 组织分离法 （2）菌核组织分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 2、 组织分离法 茯苓、猪苓等的子实体不易采集，而它们的菌核却易获得，利用菌核分离，能得到该菌的纯菌种。 将菌核表面

21、洗净，用75酒精溶液消毒，切开菌核，取中间一小块组织接种在PDA斜面培养基上，塞上棉塞，在25下培养。 在挑取组织块时，应取大一点，因菌核是贮藏器官，其大 部分是由贮藏物质一多糖物质构成，仅有少量菌丝。若挑得过小，只挑到贮藏物质而没有挑到菌丝，分离就不成功。 （3）菌索分离法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 2、 组织分离法 蜜环菌、假蜜环菌等子实体难得，也无菌核，可用菌索来分离获得其菌种。 操作方 法为： 用沾有75酒精溶液的棉花将菌索表面黑色皮层轻轻揩擦23次，在无菌操作条件下去掉黑色外皮层(菌鞘)，抽出其中白色菌髓部分，用无菌剪刀将菌髓剪下一小段，移植在培养基上，保温培养，即

22、可获得菌种。 菌索比较细小，在分离时极易污染，因此在培养基中应加入适量的抑菌的青霉素或链霉素。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 利用菇木中菌丝的分离而获得纯菌种的方法。 这种方法污染较大 菇木分离法 能用孢子分离或组织分离的菌类，一般不用这种方法。 在自然界，银耳菌丝与香灰菌丝在一起才能产生银耳子实体，而用长有菌丝的段木来分离，能同时得到银耳菌丝及香灰菌丝，因此，生产上用的银耳菌种常采取菇木分离法，香菇、木耳等菌类也可采用菇木分离 法 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 （ l）菇木的选择与处理 菇木应在子实体发生季节采集，由于菇木含有很多水

23、分，细菌繁殖较快，分离易受污染，需将分离材料风干，则分离成功率较高。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 （ l）菇木的选择与处理 分离时仅需取1cm厚的一片或一块菇木，一般选取菇木的中间部位，不取两端，因两端裸露在外，污染率高。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 （ 2）菇木表面消毒 将菇木切成2-2.5cm3的小块，用01的升汞水浸泡0.25lmin，然后用无菌水冲洗，无菌纱布吸干。或用75的酒精溶液揩擦表面进行消毒。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 （ 3）接种块的选择 取米粒大小一块接入PDA试管培养基上，接

24、种块小，污染的机会小。接种后把试管放到25下培养,长出白色菌丝后，挑其尖端部位转接到新培养基上，即得到纯化的菌种。 第四章 食用菌菌种的生产 二 、菌种的分离 3、菇木分离法 菇 木 分 离 法 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 将试管中的菌种移接至另外的试管培养基上称为转管 。1、一级种的扩大培养步 骤 将待接的斜面试管以及一级种接种针等放人已消毒的接种箱内。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养步 骤 用75的酒精溶液棉球擦双手消毒。 左手持住空白斜面试管和一级种，右手夹持棉塞，火焰封口。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 1、一

25、级种的扩大培养步 骤 将接种针顶端烧红，并将整支接种棒在火焰上过火。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养步 骤 挑取黄豆大小的菌丝琼脂块，迅速移接到空白斜面中央，将棉塞塞回试管。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养步 骤 将已接种好的试管放人恒温培养箱，在2428下培养，长满试管即可使用。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养 改进扩接法（左手拿一支试管） 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 2二级种的扩大培养 二级种培养基灭菌后应及时送人接种室(箱)或超净工作台内；待冷却至30以下

26、后，按无菌接种操作要求接种，每瓶接入一块稍带培养基的母种(如蚕豆大小)，接入瓶中的小洞口，并塞好棉塞，操作步骤与转管相似 。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 2二级种的扩大培养 每支斜面母种一般可接原种6-8瓶。灭菌的原种培养基不宜久放，最迟在第二天必须接种完毕。接种后的菌种瓶应移人温度适宜的培养室内培养，待菌丝长满即成原种。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 2二级种的扩大培养 菌种瓶口先向上直立放于培养架，待菌丝已吃料后可重叠卧放。培养过程中应经常检查，如有污染应及时去除污染瓶。 第四章 食用菌菌种的生产 三 、菌种的接种培养 3三级种的扩大培养 二级种进一步

27、扩大培养即成三级种 三级种培养料常用耐高温的聚丙烯塑料袋装；也可用瓶装。灭菌的接种培养料应移人接种室接种。只需几粒玉米(或麦粒)原种，接人一袋栽培种培养料的洞中或料面上。一瓶原种可接30-50瓶(袋)栽培种，已接种的袋(瓶)放在适宜温度下培养至菌丝长满瓶即可用于生产。 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定 母种分离后菌种是否优良，早期判断困难，要经过全面的鉴定，符合标准的母种才能扩大繁殖，制备原种和栽培种用于生产。其鉴定的主要项目：母种菌丝的形态 菌丝耐干耐湿试验 菌丝生长速度 菌丝的高温锻炼 菌丝吃料能力 出菇试验 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质

28、量鉴定 1、母种质量鉴定 母种菌丝的形态 挑取少许菌丝在载片上，盖片后在显微镜下观察菌丝形态是否属于所要培养的菌类。有锁状联合的菌类还应看到锁状联合。 菌丝耐干耐湿试验 将母种移接到不同含水量(如50、60、70)的原种培养料中，观察菌丝吃料及生长情况。如蘑菇含水量以60为宜，若它在较低及较高含水量的培养料中仍能正常生长，则说明其对干、湿度的适应性较强，可以用做扩大繁殖。 将母种菌丝接人干、湿度适宜的斜面培养基上，在适宜温度下培养。若菌丝生长快，且整齐、浓密、健壮的则是优良母种；若菌丝生长慢或特别快，且不整齐、凌乱的则不是好菌种。 菌丝生长速度 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴

29、定 1、母种质量鉴定 菌丝的高温锻炼 将母种在适宜温度20-25下培养1周后，置于35下进行24h高温锻炼，再回到适宜的温度下培养。如恢复萌发快，菌丝不发黄、不倒伏，仍然旺盛生长的，说明该母种耐高温性强，可用来扩大培养。 菌丝吃料能力 将母种接人培养料上，若吃料快，则可用于扩大繁殖。 出菇试验 将菌种接入木屑或其它培养料上，培养至菌丝长满，然后降温，提供散射光等出菇条件让其出菇，出菇又快又多又大的是优良菌种，可扩大培育。 通常分离的母种应控制转管次数，次数过多会引起菌种老化或变异，一般应控制在2-3次为宜，最多不超过4次。平菇等生活力强的可以多转1-2次。 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌

30、菌种的质量鉴定 2、原种和栽培种的质量鉴定 原种和栽培种的质量鉴定 （1）菌种传代和菌龄应在规定的范围内 （2）原种及栽培种的外观要求 （3）生理生化指标 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 2、原种和栽培种的质量鉴定 原种和栽培种的质量鉴定 （1）菌种传代和菌龄应在规定范围内 （2）原种及栽培种外观要求 （3）生理生化指标 用转管在45次以内的母种生产的原种和栽培种。 一般菌类原种和栽培种在常温下的菌龄(指菌丝长满瓶后存放的时间)在3个月内有效。草菇等繁殖快的菌类1个月内有效。超过上述期限的菌种，即使外观健壮，生产上也不使用。 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴

31、定 2、原种和栽培种的质量鉴定 原种和栽培种的质量鉴定 （1）菌种传代和菌龄应在规定范围内 （2）原种及栽培种外观要求 （3）生理生化指标 菌丝已长满培养基。 菌丝生长健壮。 菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特有的色泽。银耳菌种除有白色的银耳菌丝外，还应有烟灰色的香灰菌丝。 菌种内无杂菌污染，无其它杂色。 若种瓶底部出现黄色分泌液，则表明菌种老化。 若瓶内菌丝柱和瓶壁脱离，说明菌种老化或培养基偏于。 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 2、原种和栽培种的质量鉴定 原种和栽培种的质量鉴定 （1）菌种传代和菌龄应在规定范围内 （2）原种及栽培种外观要求 （3）生理生化指标 王振福（19

32、97)用液体菌种栽培香菇的试验表明，香菇液体菌种的脱氢酶含量与固体培养料栽培的子实体产量成正相关，因此，菌种脱氢酶含量可作为鉴定菌种质量优劣的生理生化指标。 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 3、菌种的选购方法 很多栽培者常直接购买二级种或三级种用于扩接三级种或生产栽培之用。在选购这些菌种时应掌握一些基本方法： 提 用手抓住棉塞轻提起来，看棉塞松紧是否适度。过松过紧均达不到过滤空气的目的，从而 无法保证能得到优质的菌种。手提还可以通过手测重量判断失水情况和菌龄。 闻 看 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 3、菌种的选购方法 很多栽培者常直接购买二级种或三级种

33、用于扩接三级种或生产栽培之用。在选购这些菌种时应掌握一些基本方法： 提 闻 从一批菌种中随机抽取一些菌种，把棉塞拔起，将瓶(袋)口或管口靠近鼻子嗅菌种的气味，若闻到一种不愉快的霉、臭、酸等异味，则说明菌种有杂菌污染，培养的不是纯菌丝或已有变质腐败的菌种。正常菌种具有特殊的香味。 看 第四章 食用菌菌种的生产 四、食用菌菌种的质量鉴定 3、菌种的选购方法 很多栽培者常直接购买二级种或三级种用于扩接三级种或生产栽培之用。在选购这些菌种时应掌握一些基本方法： 提 闻 看菌种外形是否破管、破瓶或破袋。 看 看菌种是否“纯、正、壮、阔”，即菌种纯度应高，不能感染杂菌； 菌丝色泽要纯正，通常为纯白，原种栽

34、培种菌丝应连结成块，无老化、变色、吐黄水、长子实体原基等现象； 菌丝要粗壮，长势强，分枝多而密(可借助放大镜或显微镜观察)； 培养基质要湿润，含水适宜，不干缩脱壁。 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 在食用菌生产和科研中，选育出一个优良的菌株是很不容易的，而要保持其菌种的遗传稳定性更是困难。菌种的退化、老化以及保藏方法是影响食用菌生产的重要因素。 1、菌种退化 指菌种突然或逐渐丧失原有的 生命力和生产性能的现象。 菌种退化 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 1、菌种退化 菌种退化 （1）菌丝生长速度减缓，在培养基上出现白色、浓密的扇形菌落。

35、（2）对不良的外界条件(如温度、酸碱度、二氧化碳、杂菌等)的抵抗力变弱， （3）子实体形成期提前或推迟，出菇潮次不分明，菌盖、菌柄呈畸形，产量明显下降，品质变劣等。 注意经常选种育种，减少转接次数，改善保藏条件，可以有效地防止菌种的退化。 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 2、菌种复壮 菌种复壮 是使生活力和丰产性能降低的菌种，恢复或提高到原有健壮程度。在退化的菌种中仍有一些保持原有菌种特性的细胞，可采取一些手段，使这些细胞生长繁殖，以更新退化的菌株。 对已退化的菌株进行单细胞分离纯化； 以高剂量的紫外线和低剂量的(NTG)联合对退化菌株进行处理； 采取改善栽培条件(

36、如更换培养基)等措施；恢复和提高菌种的种性。 无性繁殖和有性繁殖交替使用也是菌种复壮的一种手段。 菌种复壮方法 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 3、菌种保藏 菌种保藏 是根据菌种的遗传性能和生理、生化特性，人为地创造环境条件，使优良菌株稳定地保存。 保持优良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，能长期在生产上应用，这是菌种保藏的主要任务。 菌种保藏 的基本原理是采用低温、缺氧及干燥等技术，使菌体生长繁殖受到抑制，延缓代谢速度，使生命活动处于休眠状态；以减少变异的发生，从而达到既保持菌种的纯正，又延长保藏时间，防止死亡和衰退的目的。 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌

37、菌种的退化、复壮和保藏 3、菌种保藏 （1）斜面冰箱保藏法 （2）矿油保藏法 （3）滤纸(孢子)保藏法 （4）菌丝球保藏法（5）自然基质保藏法 （6）载体保藏法 （7）液氮超低温保藏法 菌种保藏常用方法 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 3、菌种保藏 斜面冰箱保藏法 将需要保藏的长满菌丝的斜面菌种放在4的冰箱中保藏。用于保藏的斜面菌种棉塞要用硫酸纸包扎，防止霉菌污染。 斜面试管冰箱保藏菌种一般2-3个月转管一次。 此法适应于大多数食用菌的保藏，但草菇菌种不耐低温，不能在冰箱中保藏，应在10-15下保藏。 保藏时间较短，一般为3-6个月，转管次数增多，变异的可能性也就增大，不适宜长期保藏菌种。 用斜面冰箱保藏法保藏的菌种在使用时应提前12-24h从冰箱中取出，经适温培养、恢复活力后才能用于转管接种。 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和保藏 3、菌种保藏 矿 油 保 藏 法 即采用矿油覆盖斜面试管保藏菌种的方法。 其方法是：先将矿油于110kPa压力下灭菌30min，置40温箱中数日，以排除水分，取适量矿油注入斜面菌种试管，使其淹没并高出斜面顶端lcm，再用无菌橡皮塞封口，在室温条件下垂直保藏(不宜在冰箱中保存)，有效期可达1年以上。 第四章 食用菌菌种的生产 五、食用菌菌种的退化、复壮和