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1、蔗糖酶 Km值的测定1实验原理酶促反应速度在实验中反映为：单位时间内产物浓度的增加量或单位时间内底物浓度的减少量酶促反应的速度要在酶促反应进行的初期进行测定，即测定酶促反应的初速度酶促反应初速度与底物浓度的关系用米氏方程来表示： V0 = Vmax SKm + SV0：酶促反应初速度Vmax：最大反应速度 S：底物浓度Km：米氏常数2 Km值等于酶促反应初速度为最大反应速度一半时所对应的底物浓度，是酶的基本的特征常数之一，它包含着酶与底物结合和解离的性质，特别是同一种酶能够作用于几种不同的底物时。 不同的酶Km值不同，同一种酶与不同底物反应Km值也不同 Km值可近似地反映酶与底物的亲和力大小：

2、Km值大，表明亲和力小；Km值小，表明亲合力大 大多数纯酶的Km值在0.01100 mmol/L 3Lineweaver-Burk Kinetics （双倒数作图法） = * + 1 Km 1 1V0 Vmax S Vmax选择不同的S，通过测定产物量来计算V0，直线做图，即可得出Vmax和Km值 y = a x + b4酶活力预试以对照管调零点，于520nm处测OD值（1.0-1.8）酶沉淀溶于10ml蒸馏水，10,000rpm离心10min, 取上清（目的：找到酶最佳稀释比例）注意该浓度用量即为酶促反应测定的最大用量5底物浓度与酶促反应速度混匀，沸水5min，流水冷却3min， 以 “0”管调零，520nm测OD值标准曲线用上次课做过的数值，也可再做一次6结果处理v: 生成产物葡萄糖的速率（5min单位时间内, 1ml酶液反应生成的葡萄糖的量）；S: 底物蔗糖的摩尔浓度； 300：本实验用蔗糖溶液的浓度 300mM； V： 各试管中加入的底物蔗糖的体积ml； 2： 反应的总体积是2ml； 1000：将反应的总体积换算为L300V27思 考 题Km值的含义及测定的方法

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