医药色谱理论与实践之高效液相色谱法课件

1、医药色谱理论与实践之高效液相色谱法离子对色谱法 将离子对试剂参加到含水的流动相中，用以别离离子型或可离子化的化合物的方法称为离子对色谱法 ion pair chromatography,IPC或PIC)。现在主要采用疏水键合相为固定相，称为反相离子对色谱法Reversed-phase ion pair chromatography，RP-IPC)。离子对色谱法别离机制离子对模型动态离子交换模型离子相互作用模型离子对模型 试样离子在流动相中与离子对试剂生成不带电荷的疏水性离子对，然后溶解或吸附在疏水固定相上。离子对试剂的烷基链越长，生成的离子对与反相键合相的亲和力越大，组分的k值越大。以碱性化合

2、物别离为例动态离子交换模型 离子对试剂在流动相中溶解后，疏水的反离子被吸附在固定相上，形成动态覆盖的离子交换剂，通过离子交换反响而使组分保存在固定相上。离子对试剂的烷基链越长，越易被固定相外表所吸附，那么其交换容量越大，样品组分的k值也越大。离子相互作用模型 离子对试剂被吸附在固定相外表形成动态双电层。在固定相外表均匀排列，但只覆盖很少一局部外表，大局部固定相外表仍为非极性的键合烷基，样品组分的保存值由双电层的静电作用力和固定相外表的非静电作用力所决定。由于离子对试剂在流动相和固定相间存在动态平衡，因而流动相中离子对试剂的浓度越大，或离子对的烷基链越长，吸附在固定相外表的离子对试剂的浓度越大，

3、那么电荷密度越高，因此样品组分的k值也越大。反相离子对色谱法条件选择1.离子对试剂的选择 分析酸类或带负电荷的物质时，常用季铵盐作离子对试剂；分析碱类或带正电荷物质时，常用烷基磺酸盐或硫酸盐作离子对试剂。常用的离子对试剂反相离子对色谱法条件选择2. pH值选择 由于离子对的生成依赖于样品组分的离解程度，当样品组分与离子对试剂全部离子化时，组分的k值最大。因此调节pH值可在较大范围内改变弱酸和弱碱样品的保存值和选择性，对强酸、强碱组分的影响较小。pH值的选择还应考虑固定相的适用范围。1.头孢磺吡苄2.头孢塔齐定3.先峰美伦醇4.头孢呋肟5.头孢唑啉6.头孢氨噻肟唑7.头孢噻乙胺唑8.头孢氨苄9.

4、头孢拉定10.乙酰苯胺内标)Spherisorb C18,10m,300.6甲醇:水乙酸钠乙酸20:78:1.5:0.5) ，SDS离子对试剂离子抑制色谱法 通过改变流动相的pH值，抑制弱酸或弱碱的离解 ，使其以原形参与别离过程。 所以，分析弱酸时常在流动相中加乙酸、磷酸等，而在分析弱碱时常参加二乙胺等。C18甲醇:0.9%乙酸40:60), 1ml/min250nm手性色谱法背景知识手性药物，60以上为外消旋体给药。由于生物系统酶、受体、载体蛋白等是一手性体系，导致对映异构体生物活性的显著差异，以及在分布、代谢和排泄方面的差异。所以，手性对映体的研究成为当前医药领域的热点之一。FDA和欧共体

5、已经要求在申报新药时，提供对映体的资料。HPLC拆分法手性固定相法Chiral Stationary Phase, CSP手性流动相添加剂法(Chiral Mobile Phase Additives,CMPA)手性衍生化法Chiral Derivatization Reagent,CDR)手性固定相法CSP蛋白质固定相 所有蛋白质都是由L氨基酸组成的聚合物，其一级结构中含有几百个手性中心，其二级和三级结构使手性上升到新的水平。这使得蛋白质具有手性固定相所需的性质。现已应用于手性拆分的蛋白质1. 1-酸糖蛋白AGP 一种人血浆蛋白，分子量大约40000，碱性药物的主要血浆结合蛋白。1983年由

6、Hermansson首先报道 。1988年出现第二代AGP-CSP。2. 卵类蛋白(ovomucoid) 1987年Miwa等从鸡蛋清中别离的糖蛋白。分子量约27000。3. 血清白蛋白 人血清白蛋白HSA)和牛血清白蛋白BSA)，分子量超过6000。手性固定相法CSP环糊精手性固定相环糊精cyclodextrin,CD)是复曲面的环状寡糖，最常见的是由6，7，8个D-(+)-吡喃葡萄糖单位构成，分别称为,环糊精。其中以-环糊精最为常用。-环糊精手性固定相手性固定相法CSP手性聚合物固定相此类固定相包括两类不同来源的聚合物：一类是天然的多糖衍生物包括纤维素和直链淀粉 ，另一类是合成的高分子化合

7、物。纤维素和淀粉的手性识别能力来源于葡萄糖单元的手性。其优越性在于：稳定性好；制柱简单，无需键合，吸附在大孔硅胶上即可；适用于多种手性化合物尤其是芳香化合物的拆分，对醇、酸、酮、酯及含硫含磷化合物、金属有机化合物均有良好的手性识别能力。合成聚合物中有聚酰胺类、聚氨酯类、聚甲基异丁酸酯等，它们的手性来源于聚合物的螺旋型结构。如具有螺旋链的三苯甲基丁烯酸酯类聚合物Chiralcel-OT 或OP柱对刚性平面结构的样品具有良好的立体选择性，适用于酯、烃类、酰胺等化合物的拆分。手性固定相法CSP配体交换手性固定相在硅胶或交联聚丙烯酰胺载体上，键合L-氨基酸作为固定配体，然后使其与过渡金属离子Cu(II

8、)、Ni(II)等形成络合物。配体交换手性固定相的拆分机理是由于D,L-氨基酸通过配体交换与固定的手性配体形成非对映异构体复合物，两者的热力学稳定性差异导致拆分。用于拆分的手性配体还有L-1,2-二氨丙烷、-羟基氨基酸、麻黄碱、L-酒石酸、2-哌啶酸等，可拆分氨基酸、二肽及手性药物如-甲基多巴、甲状腺激素等。氧氟沙星的手性配体交换法拆分手性固定相法CSP“刷型手性固定相通过一定的间隔臂，连接一个单分子层的手性有机分子到硅胶载体上，在其外表形成刷子状，故名“刷型手性固定相。这类固定相是HPLC中非常重要的手性固定相，根据刷子的种类不同，可以别离很多手性化合物。手性流动相添加剂法优点：不需手性试剂

9、衍生，无需手性固定相，使用常规的正相和反相柱，方法简单。原理：1流动相中手性试剂与对映体形成非对映络合物，在固定相和流动相中进行不同分配而得到拆分；2手性试剂吸附在柱上形成动态的手性固定相。常用的添加剂有：蛋白质，环糊精，手性冠醚，手性离子对试剂，手性配体交换试剂以及手性氢键试剂等。手性添加剂1. 亲和作用试剂 天然手性的蛋白质BSA,-AGP)作为手性添加剂可拆分氨基酸、羧酸、胺类等。胆酸盐作为手性添加剂，可拆分多种手性药物，如巴比妥、-阻滞剂、扁桃酸等。2. 手性离子对试剂 奎宁、奎尼丁、10-樟脑磺酸、N-苯甲酰氧基羰基-L-甘氨酸-L-脯氨酸，用于有机酸碱对映体的拆分。3. 手性配体交

10、换试剂 常用氨基酸及其衍生物，作用与手性配体交换固定相法相同。可拆分氨基酸及其衍生物、多巴胺、 -阻滞剂、苯妥类、氧氟沙星等。4. 环糊精和冠醚 可拆分氨基酸、扁桃酸、美芬妥英、巴比妥类、去甲羟基安定、甲基炔诺酮、甲琥胺等。5. 手性氢键作用试剂 N-乙酰基-L-缬氨酸-四丁酰胺等手性添加剂，用于别离氨基酸及衍生物和巴比妥类药物。手性试剂衍生化法 利用衍生化反响，使对映体生成非对映异构体，然后利于普通的HPLC别离。 酰氯和酸酐可衍生化手性醇和胺；手性胺试剂可用于羧酸的拆分；异硫氰酸酯类如GITC可别离胺类和醇类对映体。 普罗帕酮的GITC衍生物离子色谱法Ion chromatography,

11、ICIC的背景资料 HPLC可别离离子或离子型化合物，但一些常见的无机离子在可见、紫外区无吸收或吸收很弱，UV检测器不适用；IEC的洗脱液为电解质，电导率高，故也难以用电导检测器进行检测；离子别离时采用高浓度的酸或碱作为洗脱液，对管路及柱子腐蚀较大。由于上述原因，无机物的色谱别离一直开展缓慢，二十世纪七十年代IC的出现才很好地解决了无机离子的别离分析。IC分类抑制型离子色谱法开发最早、应用最广的离子色谱法。1975年Small等发表IC的第一篇论文，首先提出在别离柱和检测器之间串连一抑制柱，消除洗脱液本底电导的影响，从而可以用电导检测器测定无机离子。故称为抑制型离子色谱法。用于化学抑制的典型淋

12、洗液 淋洗液强度TetraborateNa2B4O7Boric AcidH3BO3HydroxideNaOHBicarbonateNaHCO3CarbonateNa2CO3增强l 通常，作为淋洗剂使用的化合物在水溶液中的pH大于8时为阴离子，pH在58之间为中性分子，其阴离子对固定相亲和力与待测离子相近，这类化合物可作为阴离子分析的淋洗液 分析阴离子时，以Na2CO3/NaHCO3 或NaOH稀溶液为洗脱液，别离柱为低交换容量的阴离子交换树脂，抑制柱为高交换容量的阳离子交换树脂。别离柱中： 交换反响 R-OH - + NaX R-X- +NaOH 洗脱反响 R-X- +NaOH R-OH -

13、+ NaX 抑制柱中：对洗脱液的反响 R-H+NaOH R-Na+ +H2O 对阴离子的反响R-H+NaX R-Na+ +HX 通过抑制柱后，洗脱液成为水或含碳酸的水，消除了本底电导，被测离子X-成为游离酸，具有较大的电导。抑制型IC的缺点 抑制柱的交换容量有限，随着使用时间增加，逐渐失效，需定期再生，恢复其抑制能力；采用高交换容量的抑制树脂，使谱带展宽；填充抑制柱中存在Donnan排斥效应，致使弱电解质的别离结果不好。各离子当量电导Equivalent Conductances, 25CCationsAnionsH+350OH- 198Li+39F-55Na+50Cl-76K+74Br-78

14、NH4+73NO3-71Mg2+53PO43-80Ca2+60SO42-80抑制是通过弱酸和弱碱盐的离子交换中和作用。抑制的结果是：1降低流动相的背景电导值，2增加被测物的响应值。化学抑制的结果是改善被测物的灵敏度和检测限。例如，在常见阴离子分析中，以Na2CO3/NaHCO3 为淋洗液，Cl- 以盐的形式存在。NaCl的总的电导是126S50uS/cm Na+76uS/cm Cl-。在抑制器中，盐经过离子交换后，待测离子Cl-变为强酸，其电导值为426S350S/cm H+ +76S/cm Cl-。 纤维抑制柱自动再生抑制器利用水的电化学反响产生氢和氢氧根离子，因此不再需要再生液。在自动再生

15、抑制器中，阴极和阳极之间施加一个直流电流，在施加电场下，在阳极水被氧化产生H+和氧气，同时在阴极水被复原为OH-和氢气。抑制器产生的氢离子和氢氧根离子用于抑制背景电导。自动再生抑制器自动再生抑制器连续抑制较非连续抑制具有以下几处优点：l 无需周期性再生l 稳定的基线l 易于操作l 适于常规梯度分析 可与高容量的柱子相匹配 自动电解再生抑制器连续抑制较非连续抑制具有以下几处优点：l 无需周期性再生l 稳定的基线l 易于操作l 适于常规梯度分析 可与高容量的柱子相匹配 自动再生抑制器连续抑制较非连续抑制具有以下几处优点：l 无需周期性再生l 稳定的基线l 易于操作l 适于常规梯度分析 可与高容量的

16、柱子相匹配 非抑制型离子色谱法1979年Fritz等提出用交换容量更低的离子交换树脂作为别离柱，并使用浓度更低、电导率也更低的洗脱液，样品离子经别离柱后直接进入电导检测器。单柱法的本底电导直接由洗脱液的电导水平决定，一般使用1mmol/L的苯甲酸、邻苯二甲酸或它们的盐溶液。检测方式1. 电化学 A. 电导检测 B. 安培检测2. 光度法 A. 吸收光度法 B. 发射光度法检测方式电导检测法 电导率是在阴极和阳极之间的离子化溶液传导电流的能力。溶液中的离子越多，在两电极间通过的电流越大。在低浓度时，电导率直接与溶液中导电物质的浓度成正比。 检测方式安培检测 安培检测用于测定在一个施加电位下能够进

17、行电化学反响的电活性物质。在单电位安培法中，一个固定电位连续施加到电化学检测池上。测量样品物质在工作电极外表的氧化或复原作用所产生的电流。产生电流的大小与进行电化学反响的被测物浓度成正比。 电导检测器直流安培检测器积分安培检测器无机阴离子儿茶酚胺碳水化合物无机阳离子苯酚脂肪胺，1o，2o，3o羧酸芳香胺氨基酸磺酸硫醇醇类膦酸氰化物醛类胺，1o，2o，3o，4o硫化物S类，除S（）碘化物亚硫酸盐电化学检测器测定的组分检测方式吸收光谱法发射光谱法常用荧光法，阴离子波长（nm）溴酸盐200溴化物200铬酸盐365碘酸盐200碘化物227金属氯化物215金属氰化物215硝酸盐202亚硝酸盐211硫化物

18、215硫氰酸盐215硫代硫酸盐215常见无机阴离子的紫外线吸收波长 分析离子分离（机理）方式检测器无机阴离子亲水性强酸F-、Cl-、NO2-、Br-、SO32-、NO3-、PO43-、SO42-、PO2-、PO3-、ClO-、ClO2-、ClO3-、BrO4-、低分子量有机酸阴离子交换电导、UVSO32-离子排斥安培砷酸盐、硒酸盐、亚硒酸盐阴离子交换电导亚砷酸盐离子排斥安培弱酸BO3-、CO32-离子排斥电导SiO32-离子交换、离子排斥柱后衍生/VIS疏水性CN-、HS-（高离子强度基体）BF4-、S2O32-、SCN-、ClO4- I-离子排斥阴离子交换、离子对阴离子交换安培电导安培/电导

19、缩合磷酸剂未络合阴离子交换柱后衍生/VIS多价螯合剂已络合阴离子交换电导金属络合物Au（CN）2-、Au（CN）4-、Fe（CN）64-、Fe（CN）63-EDTA-Cu离子对阴离子交换电导电导有机阴离子羧酸一价脂肪酸，C5（酸消解样品，盐水，高离子强度基体）离子排斥电导脂肪酸，C5 芳香酸离子对/阴离子交换电导，UV一至三价一元、二元、三元羧酸+无机阴离子羟基羧酸、二元和三元羧酸+醇阴离子交换离子排斥电导电导磺酸烷基磺酸盐、芳香磺酸盐离子对，阴离子交换电导，UV醇类C6离子排斥安培别离方式和检测器的选择阴离子分 析 离 子分离方式检测器无机阳离子Li+、Na+、K+、Rb+、Cs+、Mg+、

20、Ca+、Sr+、Ba+、NH4+阳离子交换电导过度金属Cu+、Ni+、Zn+、Co+、Cd+、Pb+、Mn+、Fe2+、Fe3+、Sn2+、Sn4+、Cr3+、V4+、V5+、UO22+、Hg+ Al3+Cr6+(CrO42-)阴离子交换/阳离子交换阳离子交换阴离子交换柱后衍生/VIS电导柱后衍生/VIS柱后衍生/VIS镧系金属La3+、Ce3+、Pr3+、Nd3+、Sm3+、Eu3+、Gd3+、Tb3+、Dy3+、Ho3+、Er3+、Tm3+、Yb3+、Lu3+阴离子交换，阳离子交换柱后衍生/VIS有机阳离子低分子量烷基胺，醇胺，+碱金属和碱土金属阳离子交换电导、安培高分子量烷基胺，芳香胺，

21、环己胺，季胺，多胺阳离子交换，离子对电导、紫外，安培别离方式和检测器的选择阳离子IC的应用无机离子可离解的有机化合物方法编号方法名称测定对象样品基体200.10(a)在线螯合预富集感应等离子体-质谱测定海水中的痕量元素Cd、Co、Cu、U、V、Ni海水，河口水200.13(a)螯合预富集石墨炉原子吸收法测定海水中的痕量元素Cd、Co、Cu、Pb、Ni海水，河口水218.6(a)离子色谱法测定饮用水、地下水、工业废水中的可溶性六价铬Cr()饮用水、地下水、工业废水300.0(a)300.1(a)离子色谱法测定水中的无机阴离子NO3-、NO2-、SO42-、F-、Cl-、ClO2-、ClO3-、B

22、r-、BrO3-、PO43-饮用水、地下水工业废水及纯净水、地表水、生活废水300.6(a)化学抑制型离子色谱法测定湿沉降物中的阴离子NO3-、Cl-、PO43-、SO42-雨水、露水、雪水、冰雹、冻雨300.7(a)化学抑制型离子色谱法测定湿沉降物中的可溶性碱金属和碱土金属Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+雨水、露水、雪水、冰雹、冻雨6060(a)离子色谱法测定过渡金属Cd2+、Co2+、Cu2+、Ni2+、Fe3+、Mn2+、Cr()水溶液7199(a)离子色谱法测定饮用水、地下水、工业废水中的六价铬Cr()饮用水、地下水、工业废水9056(a)阴离子色谱法F-、Cl-、NO2-、

23、NO3-、Br-、PO43-、SO42-氧瓶燃烧的固体样品及水样EPA Method 7A 1994，p626离子色谱法测定固定污染源排放的氮氧化物NO2-空气样品EPA Method 7A 1944，p637离子色谱法测定固定污染源排放的氮氧化物-碱处理NO2-空气样品5173(b) 甲酸甲酸空气样品2008(b)氯乙酸氯乙酸空气样品3509(b)氨基乙醇化合物乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺空气样品5022(b)有机胂甲胂酸、二甲胂酸、氨基苯胂酸空气样品6004(b)二氧化碳SO32-、SO42-空气样品6005(b)碘I-空气样品6011(b)溴、氯Br-、Cl-空气样品6701(b)氨NH4

24、+空气样品7604(b)六价铬Cr()空气样品国际现行的离子色谱标准分析方法环境与高纯水分析 7903(b)无机酸F-、Cl-、NO3-、Br-、PO43-、SO42-空气样品D4327-91(c)化学抑制型离子色谱法测定水中的阴离子F-、Cl-、NO2-、NO3-、Br-、PO43-、SO42-饮用水、废水D4896-88(c)离子色谱法测定车间空气中的硫酸雾SO42-空气样品D5080-90(c)化学抑制型离子色谱法测定大气湿沉降物中的3中离子Cl-、NO3-、SO42-湿沉降物、雨水、雪水、冻雨D5281-92(c)室外环境、工作场所和室内空气中六价铬的采集与分析Cr()空气样品D554

25、2-92(c)离子色谱法测定高纯水中的阴离子F-、Cl-、NO3-、SO42-高纯水D5257-93(c)水中六价铬的采集与分析Cr()饮用水、地表水、废水D2036-9(c)水中氰化物CN-饮用水、废水ID-104(d)车间空气中的二氧化硫（气泡器）SO42-空气样品ID-108(d)车间空气中的溴Br-、BrO3-空气样品ID-177(d)车间空气中的碘（固体吸附剂）I-空气样品ID-180(d)车间空气中的磷化氢PO3-空气样品ID-182(d)车间空气中的二氧化氮NO2-空气样品ID-188(d)车间空气中的氨（固体吸附剂）NH4+空气样品ID-190(d)车间空气中的氧化氮NO2-空

26、气样品ID-202(d)车间空气中的二氧化氯ClO2-空气样品4410(e)离子色谱法测定阴离子F-、Cl-、NO3-、Br-、PO43-、SO42饮用水、地下水、废水、地表水G29-86(f)模塑件中痕量玷污物的测定Cl-、NO3-、Br-、PO43、 SO42-、Na+、NH4+、K+、模塑件G52-90(f)半导体leadframes上离子玷污测定Cl-、NO3-、SO42-LeadframesIDEMA方法(g)磁盘驱动器组件表面可提取离子玷污物的测定（建议）Cl-、SO42-磁盘驱动器组件IDEMA方法(g)阳离子分析（建议）Na+、K+、Mg2+、Ca2+高纯水、半导体零部件等国际

27、现行的离子色谱标准分析方法环境与高纯水分析 方法编号方法名称测定对象样品基体GB 13580.5-92大气降水中氟、氯、亚硝酸盐、硝酸盐、硫酸盐的测定离子色谱法F-、Cl-、NO2-、NO3-、SO42-降水GB 14642-93工业循环冷却水及锅炉水中F-、Cl-、NO2-、NO3-、PO43-、SO42-的测定离子色谱法F-、Cl-、NO2-、NO3-、PO43-、SO42-工业循环冷却水及锅炉水GB/T 15454-95工业循环冷却水中钠、铵、钾、镁和钙离子的测定离子色谱法Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+工业循环冷却水GB 11446.7-89电子级水中痕量氯离子的离子色谱法测

28、试方法Cl-电子级水GN 8538.1-8538.63-87饮用天然矿泉水检测方法饮用天然矿泉水 中国国家标准GB中的 离子色谱法离子色谱在无机阴、阳离子分析中的应用阴离子分析 阴离子交换-抑制电导，氟、氯、亚硝酸根、硝酸根、磷酸根、硫酸根阴离子交换-抑制电导，磷酸、多聚磷酸阴离子交换-紫外检测，亚硝酸根、硝酸根离子排斥-脉冲安培检测，亚硫酸根阴离子交换-安培检测，溴酸根 碱金属、铵和碱土金属分析可以实现一价、二价离子同时分析过渡金属分析不同价态的离子同时分析EPA方法300.0(A): IonPac AS14A 色谱柱15772-01色谱柱:IonPac AG14A, AS14A (3mm

29、ID)淋洗液:8.0 mM碳酸钠/ 1.0 mM碳酸氢钠流速:0.5 mL/min进样量:25 mL检测:抑制电导, ASRS-ULTRA, 循环模式色谱峰:1.氟离子 1mg/L (ppm)2.乙酸43.氯离子24.亚硝酸根35.溴离子 56.硝酸根57.磷酸根88.硫酸根6Minutes14mS0123456701234567898EPA方法314.0: 高氯酸根标准14600-02色谱柱:IonPac AG16, AS16淋洗液:65 mM 氢氧化钠淋洗源:EG40流速:1.2 mL/min进样量:1000 mL检测器:抑制电导, ASRS-ULTRA, 自动抑制循环模式色谱峰:1. 高

30、氯酸根20 mg/L024681012Minutes00.6mS1色谱柱:IonPac AS12A and AG12A淋洗液:2.7 mM 碳酸钠 0.3 mM 碳酸氢钠流速:1.5 mL/min进样体积:10 L 进样管峰:1.氟离子2.碳酸根3.氯离子4.溴离子5.硝酸根6.磷酸根7.硫酸根采用 IonPac AS12A和AG12A色谱柱不同地区饮用水分析100461Minutes7051356-175SSUnion CitySunnyvale100510Union CitySunnyvale512755432Minutes美国EPA方法IC双通道检测; 根本方法300.1 + PCR加上

31、o 联茴香胺和紫外-可见吸收检测在450 nm方法的浓度范围溴酸根, 电导: 报道值 15 g/L溴酸根, 柱后反响/紫外-可见: 0.5 15 g/L溴离子, 电导: MRL* 500 g/L 亚氯酸根, 电导: MRL 500 g/L 氯酸根, 电导: MRL 500 g/L* MRL is 最低线性所测定的最低值点15690EPA方法对低含量DBP阴离子标准的分析色谱柱:IonPac AG9-HC, AS9-HC淋洗液: 9.0 mM 碳酸钠 流速:1.3 mL/min进样量:225 mL检测:A) 抑制电导, ASRS-ULTRA, 自再生 外加水模式B)吸光度, 450 nm柱后试剂

32、:o 联茴香胺柱后流速:0.7 mL/min柱后加热:60 C色谱峰:1. 亚氯酸根15mg/L (ppb) 2. 溴酸根10 3. 溴离子154. 氯酸根15 15693Minutes100520251005152500-3(A)(B)12321mSAU15204EPA方法分析自来水15695色谱柱:IonPacAG9-HC, AS9-HC淋洗液:9.0 mM碳酸钠流速:1.3 mL/min进样量:225 L检测器:A) 抑制电导, ASRS-ULTRA, 外加水B) 吸光度, 450 nm柱后试剂:o 联茴香胺柱后流速:0.7 mL/min柱后加热:60 C色谱峰:3.溴离子99.1mg/

33、L (ppb)4.氯酸根(A)(B)300510152025-300510152025MinutesAUmS4AEPA方法分析瓶装水色谱柱:IonPacAG9-HC, AS9-HC淋洗液:9.0 mM 碳酸钠流速:1.3 mL/min进样量:225 L检测器:A) 抑制电导, ASRS-ULTRA, 外加水B) 吸光度, 450 nm柱后试剂:o 联茴香胺柱后流速:0.7 mL/min柱后加热器:60 C色谱峰:3.溴离子 24.41 mg/L (ppb) 5.溴酸根-UV 1.721569720Minutes251510502025151050351.2006.0 x10-30AUmS(A)

34、(B)AB5747-01024024024Minutes10 ppb50ppb100ppb色谱柱:IonPac AS7淋洗液:250 mM硫酸铵100 mM氢氧化铵流速: 1.5 mL/min柱后反响试剂:2 mM二苯碳酰二肼10% 甲醇1N 硫酸流速: 0.5 mL/min.检测器: 吸光度, 530 nm EPA方法218.6:废水中铬的测定络合剂分析用硝酸铁柱后反响117850.006AU0246810Minutes123色谱柱:IonPac AS7淋洗液:24 mN硝酸速流:0.5 mL/min柱后反响 柱后试剂:1 g/L Fe(NO3)3 9 H2O2% (v/v) HClO4流速

35、:0.5 mL/min进样量:25 L检测:UV, 330 nm色谱峰:1.磷酸根100 mg/L (ppm)2.NTA 203.EDTA 10色谱柱: IonPac AS11, 2 mm流速:0.3 mL/min进样体积:20 mL检测器:抑制电导 色谱柱:1. PO42. P2O73. P3O94. P3O105. P4O126. P4O13多聚磷酸的分析11781Minutes300mS010515254540352030132465Courtesy of E. S. Baluyot (Rhone-Poulenc Inc.) Presented at the International

36、IC Symposium 1995, Dallas,TX.色谱柱:IonPac AS9-SC, AG9-SC淋洗液:1.7 mM碳酸钠 1.8 mM碳酸氢钠流速:1.5 mL/min进样体积:25 L检测器: 抑制电导Peaks:A: 样品 2. 硝酸根71.6 ppm 3. 未知峰 4. 示知峰 5. 示知峰 B: 样品参加 1. 亚硝酸根0.5 ppm 2. 硝酸根样品处理:1. 约 8 g 用 50 mL去离子水稀释 2. 离心15 min 3. 用 0.2 m滤膜过滤香蕉型婴儿果汁中亚硝酸根和硝酸根10757-02024681012140 10S A: 样品 B: 样品中参加 0.5

37、ppm亚硝酸根2345Minutes0240 4S12火腿提取物中亚硝酸根和硝酸根测定12622色谱柱: IonPac AS11 & AG11 淋洗相:5 mM 氢氧化钠流速:1 mL/min进样体积:25 mL检测器:UV, 225 nm色谱峰: 1.亚硝酸根1.16 mg/L 2.硝酸根0.54 0510 AUMinutes12酸橙汁中亚硫酸根的测定色谱柱:IonPac ICE-AS1淋洗液:20 mN 硫酸流速:1.0 mL/min进样体积:50 L检测器: 脉冲安培Pt电极， 0.8 V色谱峰:1.未知峰2.亚硫酸8.9 mg/L样品用磷酸钠/甘露醇缓冲液稀释36-倍.实际亚硫酸浓度

38、= 260 mg/L.1212000nCMinutes3691211852杏仁中亚硫酸根的测定色谱柱:IonPac ICE-AS1淋洗液t:20 mN硫酸流速:1.0 mL/min进样体积:50 L检测器: 脉冲安培Pt 电极, 0.8 V色谱峰:1.甘露醇l2.亚硫酸根10.4 mg/L1212000nCMinutes3691211853色谱柱:IonPac ICE-AS1淋洗液:5 mM 硫酸流速:1.0 mL/min检测器:直流安培检测, 进样体积:50 mL色谱峰:1. 甘油 2. 亚硫酸根 1.5 mg/L 3. 乙醇样品稀释1:10. 亚硫酸浓度在未稀释样品中为15 mg/L .

39、白酒中亚硫酸根、甘油和乙醇的测定10932Minutes02468100 35nA123色谱柱:AS9-SC分析柱l / AG-10 浓缩柱淋洗液 1:40 mM 硼酸20 mM 氢氧化钠淋洗液 2:200 mM 硼酸100 mM 氢氧化钠流速:2.0 mL/min体积:3 mL 提取预浓缩检测器: 抑制电导ASRS (外加水方式)色谱峰:1. 溴酸根3 ppb面包中痕量的溴酸盐10754-01Minutes012345 S1水样中的阳离子8108-02色谱柱:IonPac CS12淋洗液:从 5.1 min开始，甲磺酸从 4 mM 改变到16 mM流速:2 mL/minTrap柱:CTC-1

40、检测器:抑制电导进样量:25 L峰: 1. 锂离子 2. 钠离子3. 铵离子4. 钾离子 5. 镁离子6. 钙离子0245351015624536124536自来水(680:1)*矿泉水(310:1)*废水(50:1)* 钠离子对铵根离子之比11352用离子色谱比较不同啤酒中的阳离子色谱柱:IonPac CS12分析柱 (4 mm)CG12 保护柱(4 mm) CTC-1阳离子捕获柱淋洗液 1:去离子水淋洗液 2:100 mM 甲磺酸流速:1.0 mL/min进样体积:25 L检测器:抑制电导 色谱峰:1. 钠离子 2. 铵离子 3. 钾离子 4. 镁离子 5. 钙离子梯度:时间E1E2E3E

41、4 初始 8416- 5.00 8416- 5.01 6040- 10.00 6040-Minutes10mS01234510mS0134510mS012345英国Ale英国Stout美国Lager2024681012色谱柱:CS12/CG12/阳离子捕获柱淋洗液 1:去离子水淋洗液 2:100 mM 甲磺酸流速:1.0 mL/min进样体积:25 L检测器:抑制电导 色谱峰:1. 钠离子 2. 铵离子3. 钾离子 4. 镁离子5. 钙离子葡萄酒的阳离子10747Minutes0246810120 10 S12345牛肝中的过渡金属46460520Minutes101512345色谱峰螯合 I

42、C标准值(mg/g)(mg/g)1. Fe3+NA 2. Cu2+162 3.5158 73. Zn2+110 5.3123 84. Mn2+5. Fe2+NA 样品含 120 7 mg/g Ca & 9.9 0.8 mg/g Mg离子色谱测定有机酸阴离子交换-抑制电导甲酸、乙酸、乙醇酸、丙醇酸、乳酸等一元有机酸丙二酸、丁二酸、草酸、酒石酸等二元有机酸柠檬酸、糖精等强保存阴离子对山梨酸、苯甲酸等防腐剂分析离子排斥-抑制电导可以与无机强酸阴离子很好别离，保存值与pKa值大小相关橙汁有机酸的优化别离8508A-02(1:100稀释)Minutes5S012345678910111213141516

43、18051015Peaks:1. 喹咛酸1.0 mg/L2. 乳酸0.43. 乙酸0.14. 乙醇酸0.15. 甲酸0.256. d-半乳糖醛酸0.37. 氯离子0.68. 硝酸根0.259. 戌二酸1.010. 琥珀酸0.211. 苹果酸10.012. 硫酸0.813. 草酸2.014. 磷酸2.015. 柠檬酸8.016. 异柠檬酸1.517. 顺乌头酸0.518. 反乌头酸色谱柱:IonPac AS11淋洗液 1:去离子水淋洗液2:1.0 mM 氢氧化钠淋洗液 3:100 mM 氢氧化钠淋洗液 4:100% 甲醇l流速:2.0 mL/min.检测器:抑制电导，化学抑制模式时间 (min.

44、)%E1%E2%E3%E4 07020010 57020010同果汁中有机酸总体情况8509-01色谱柱:IonPac AS11淋洗液:氢氧化物/甲醇梯度t Peaks:1. 喹咛酸2. 乳酸 3. 乙酸 4. 乙醇酸 5. 甲酸 6. d-半乳糖醛酸 7. 氯离子 8. 硝酸根 9. 戌二酸 10. 琥珀酸 11. 苹果酸 12. 丙二酸 13. 酒石酸 14. 硫酸根 15. 草酸 16. 磷酸根 17. 柠檬酸 18. 异柠檬酸 19. 顺乌头酸 20. 反乌头酸 5 S 0051015苹果汁123456 7910811121415161720Minutes12

45、5S0葡萄汁345678910141617182021113151色谱柱:IonPac AS11 / AG11 guard淋洗液:氢氧化钠 / 甲醇梯度流速:2 mL /min.进样体积: 25 L检测器: 抑制电导色谱峰: 1. 氟离子 2. 乳酸 3. 乙酸 4. 甲酸 5. 未知 6. 丙酮酸 7. 氟离子 8. 硝酸根 9. 未知10. 未知11. 琥珀酸12. 苹果酸13. 丙二酸14. 硫酸15. 草酸16. 磷酸17. 柠檬酸爱尔兰啤酒中的阴离子和有机酸10745024681012141618 0 14 SMinutes8910111213140 4 SMinutes123456

46、789101112131416151789101112131415色谱柱:IonPac AS11 / AG11 guard流动相:氢氧化钠/ 甲醇梯度流速:2 mL /min.进样体积: 25 L检测器: 抑制电导色谱峰: 1. 氟离子 2. 乳酸 3. 乙酸 4. 甲酸 5. 未知 6. 丙酮酸 7. 氯离子 8. 未知 9. 未知10. 琥珀酸11. 苹果酸12. 硫酸13. 草酸14. 磷酸15. 柠檬酸美国啤酒中的阴离子和有机酸1074689101112131403 S024681012141618 0 10 SMinutes123456789101115141213891011121

47、3白酒有机酸7096色谱柱:OmniPac PAX-500淋洗液:NaOH 梯度/27% 乙醇流速:1.0 mL/min.抑制器:阴离子微膜抑制器再生液:20 mN H2SO4色谱峰:1.乙酸2. 乳酸3. 氯离子4. 半乳糖醛酸5. 琥珀酸6. 苹果酸7. 亚硫酸, 马来酸8. 酒石酸9.硫酸10.磷酸11.柠檬酸05253515102030MinutesnS123456789101110S153葡萄汁中的有机酸葡萄汁, 1:100稀释4852997905101520色谱柱:IonPac ICE-AS6淋洗液:0.4 mM 七氟丁酸流速:1.0 mL/min进样体积:50 L检测器:抑制电导

48、 AMMS-ICEPeaks:1.无机离子 2.酒石酸 3.半乳糖醛酸 4.柠檬酸 5.苹果酸 6.甲酸 7.乙酸 8.未知峰Minutes67防腐剂的离子色谱分析色谱柱：HPIC-AG6两根淋洗液：1.5 mM 碳酸钠/1.5mM 碳酸氢钠检测器:抑制电导色谱峰 1.苯甲酸 2.山梨酸样品处理稀释50倍滤膜过滤朱岩.分析化学，1991,193,313316番茄中有机酸9987番茄汁， 1:100 稀释调味番茄酱, 1:100稀释1460MinutesS15352S0010102025577431色谱柱:IonPac ICE-AS6淋洗液:0.4 mM 七氟丁酸流速:1.0 mL/min进样体

49、积:50 L检测器:抑制电导 AMMS-ICE色谱峰:1.无机离子2.丙二酸3.柠檬酸4.苹果酸5.甲酸6.乙酸7.未知峰酒类中的有机酸9984 -1 2010白酒, 1:30稀释红酒, 1:30 稀释0S0S0255 -1 25 10203015253512465791081211131415 -1 25 25052515MinutesMinutes12345678910111213色谱柱:IonPac ICE-AS6 淋洗液:0.4 mM 七氟丁酸流速:1.0 mL/min进样体积:50 L检测器:抑制电导 AMMS-ICE色谱峰:1.无机离子2.无机离子3.未知4.酒石酸 5.半乳糖醛酸

50、6.柠檬酸7.苹果酸8.未知9.乙醇酸10.乳酸11.未知12.乙酸13.琥珀酸14.延胡索酸 15.丙酸啤酒中的有机酸99852010Dark Lager, 1:30 稀释Lager, 1:30 稀释0S12467980515Minutes -1 0S15153123455789色谱柱:IonPac ICE-AS6淋洗液:0.4 mM 七氟丁酸流速:1.0 mL/min进样体积:50 L检测器:抑制电导 AMMS-ICE色谱峰:1.无机物 2.无机物3.苹果酸4.柠檬酸5.丙二酸6.甲酸 7.乳酸 8.碳酸 9.琥珀酸 离子色谱测定有机胺阳离子交换-抑制电导可以分析低分子量胺类化合物阳离子交

51、换-紫外检测可以检测含双键和共轭双键的胺类化合物阳离子交换-安培检测可以对苯胺类化合物检测阳离子交换-脉冲安培检测 可以对脂肪醇胺类化合物检测流动相离子色谱-抑制电导检测 可以对阳离子外表活性剂分析色谱柱:IonPac CS10, IonPac CG10 guard淋洗液 A:乙腈-水 90:10 (v/v)淋洗液 B:高氯酸 0.5 M淋洗液 C:高氯酸钠 1M淋洗液t D:水流动相:时间 (min)%A%B%C%D 0.05106025 1.05106025 10.0510850 25.0510850 26.05106025流速:1.0 mL/min检测器:积分分培色谱柱:A: 罐装青鱼

52、1. 腐胺16g/g 2. 组氨酸103 3. 尸胺187 4. 组胺172 5. 亚精胺 坏的罐装青鱼中的生物胺10758-01Minutes053102015C103C023451234A: 罐装青鱼B: 样品中参加300 g/g 各类胺R. Draissci et. al., Chromatographia Vol. 35, No. 9, 584-590风味添加剂色谱柱:OmniPac PAX-500淋洗液t:盐酸/高氯酸/乙腈梯度流速:1.0 mL/min检测器: UV 254 nm流动相:HCl + KCl + 乙腈梯度色谱峰:1. 可可碱2. 茶碱3. 咖啡因4. 吗啡5. 秋水仙

53、碱6. 士的宁7. 罂粟碱8. 烟碱9. 弱金鸡纳碱10.奎宁7023-0312345678910Au0510离子色谱在醇类和糖类分析应用阴离子交换-脉冲安培检测可用于常见的糖类化合物分析可用于寡聚糖分析可用于糖醇分析可用于醇醛类甜味剂的分析 离子排斥-脉冲安培检测可以醇类、聚醇化合物的分析橙汁中的糖分色谱柱:CarboPac PA1淋洗液:100 mM氢氧化钠流速:1 mL/min检测器: 脉冲安培检测, Au电极Peaks:1.葡萄糖1.7 mg/L2.果糖3.蔗糖002468101240Minutes123nC11400色谱柱:CarboPac MA1淋洗液:500 mM 氢氧化钠流速:

54、0.4 mL/min检测器:脉冲安培检测器温度:室温色谱峰:1.山梨醇 2.葡萄糖3.果糖 4. 蔗糖 8588-0303060Minutes1234苹果汁中的糖类和山梨醇20105040等淋洗别离庶糖中痕量葡萄糖和果糖色谱柱:CarboPac PA1(4 x 250 mm)和CarboPac PA1保护柱淋洗液:160 mM 氢氧化钠流速:1.0 mL/min检测器:脉冲安培,PAD-2 (金)色谱峰:1. 葡萄糖2. 果糖3. 蔗糖7660Minutes024681012123色谱柱:CarboPac PA1和保护柱淋洗液:150 mM NaOH流速:1.0 mL/min 进样体积:50

55、mL检测器: 脉冲安培色谱峰:1. 葡萄糖 4.39% 2. 果糖 3. 乳糖 (内标) 4. 庶糖离子色谱-脉冲安培检测测定甘庶中糖类109302468Minutes2134mA380色谱柱:CarboPac PA1淋洗液:150 mM NaOH流速:1 mL/min进样体积:50 L检测器: 脉冲安培, 金电极色谱峰:1. 葡萄糖 950 g/mL*2. 果糖5903. 蔗糖样品用水稀薄稀释1:100 并过滤.* 浓度通过稀释倍数计算.调味番茄酱中的糖类10753Minutes0510152025 0 200 nC123脱脂后的巧克力糖色谱柱: CarboPacTM PA1保护柱和分析柱淋

56、洗液: 180 mM 氢氧化钠流速: 1.0 mL/min进样体积: 50 L (1 g in 16 L)检测器: 脉冲安培检测,金电极色谱峰: 1. 甘油 未定量 2. 乳糖1.3 g 3. 庶糖2.9 Minutes0810 mC12364210172-0212色谱柱: CarboPacTM PA1淋洗液: 180 mM 氢氧化钠流速: 1.0 mL/min进样体积: 50 L (1 g in 2 L)检测器: 脉冲安培检测, 金电极色谱峰: 1. 甘油未定量 2. 葡萄糖0.4 g 3. 庶糖1.0 花生黄油脱脂后的糖类10018-A0MinutesC312246108 色谱柱:1.新海

57、藻糖 2.葡萄糖 3.果糖 5.异麦芽糖, Matulose 6.蔗糖 7.曲二糖 8.松二糖, Genitobiose 9.Palatinose 10.松三糖 11.麦芽二糖 12.黑曲霉糖 13.麦芽糖, 1-庶果三糖 14.Theanderose 17.吡喃葡糖基庶糖 18. 潘糖 19.麦芽三糖离子色谱-脉冲安培检测分析蜂蜜中糖类8704-01HPLC chromatogram of the carbohydrates in Alsike Honey.Swallow, K.W. and Low, N.H. (1990) J. Agric. Food Chem. 38, 828-832M

58、inutes03016023185678910111312141719英国的甜菜糖蜜中的糖色谱柱: CarboPacTM PA1淋洗液: 100 mM NaOH /20 mM NaOAc流速: 1.0 mL/min检测器: PAD, 金电极范围:1 mA色谱峰: 1. 庶糖4938庶糖Minutes01248261014mA11618啤酒和黄酒中糖类和有机酸色谱柱：Dionex AS6淋洗液：NaOH流速: 1ml/min检测器: 脉冲安培和抑制电 导串联色谱峰:1.甘露醇 7.鼠李糖2.阿拉伯糖 8.麦芽糖3.葡萄糖 9.乙酸4.果糖 10.乙醇酸5.乳糖 11.甲酸6.庶糖朱岩,张兴德,钮

59、渭钧,Mikrochim.Acta,1997,127,189194奶油糖果中葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽三糖1 02Minutes024681012141618200C41235色谱柱:CarboPac PA1淋洗液 1:150 mM NaOH/ 1 mM 乙酸钠淋洗液 2:150mM NaOH/ 150 mM 乙酸钠流速:1.0 mL/min进样量:25 L检测器: 脉冲安培，金电极色谱峰:1. 葡萄糖6.8% 2. 果糖3.0% 3. 未知峰 4. 麦芽糖4.5%5. 麦芽三糖3.9%梯度t:时间%1%2 0.0100 0.1100 1.1100 10.0100 20.0100 20.110

60、0-1色谱柱:CarboPac PA-100 及保护柱淋洗液:NaOH / 乙酸钠梯度流速:1.0 mL/min进样体积.:10 mL检测器:脉冲安培, Au电极色谱峰:1. 葡萄糖 2. 麦芽糖 3. 麦芽三糖 4. 麦芽四糖5. 麦芽戍糖6. 麦芽六糖7. 麦芽七糖8. 麦芽八糖9. 麦芽九糖10. 麦芽十糖别离不同聚合的麦芽糖: CarboPac PA10010927Minutes2340510152025 0 70 nC15678910色谱柱:CarboPac PA-100 和保护柱淋洗液:NaOH / 乙酸钠梯度流速:1.0 mL/min进样体积:10 mL检测器:脉冲安培, Au电