临床免疫学思考题

1、抗原抗体反应的原理、特点、种类以及主要影响因素原理：1.Ag、Ab能特异性结合(内因)：Ag、Ab能特异性结合，是由于Ag表位(抗原决 定簇)和Ab V区之间的特异性结合，二者在空间结构上是严格互补的。Ag、Ab结合力(外因)：静电引力、范德华力、氢键以及疏水作用力特点：特异性、比例性、可逆性、阶段性种类：沉淀反应、凝集反应、补体参与的溶血反应/补体结合试验、中和试验、免疫标记技 术。影响因素：1.自身因素：(1) Ag:与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关；(2) Ab:与Ab的来源有关：是R型抗体或H 型抗体；与Ab的特异性、亲合性、浓度有关。环境因素：(1)电解质：一般实验室所用电

2、解质都是生理盐水(0.9% NaCl),浓 度不能过高。浓度过高，会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。PH： 一般为PH 6-9。当PH 观察结果间接法测抗体包被已知Ag+待测标本（测Ab?） 反应一段时间后，洗加酶标抗抗体 （酶标羊抗人IgG） 洗涤加底物加终止液，观察结果。影响因素（一）固相载体常用固相载体材料：聚苯乙烯。其特点为吸附Ag或Ab的能力强，一但吸附后，不 能被洗脱。固相载体：酶标板（微量反应板，12X8；可分软、硬板一次性使用，不可回收（二）抗原、抗体Ag：需纯化Ab：需效价高、亲和力强、纯化试验条件包被(coating)： 一 般用 pH 9.6 CB(carbonate

3、 buffer)， 0.05M,有利于蛋白质吸附包被浓度：0.1100口g/ml，一般常用 10 口g/ml包被时间、温度：4 C过夜或37 C 1-3h包被量：100ul封闭(blocking)：用1%5%牛血清白蛋白或5%20%小牛血清或脱脂牛奶缓冲液浸泡12h抗原抗体反应的条件微碱性有利于抗原抗体结合，故用pH 7.4 PBS(phosphate buffer saline)洗涤去污剂有利于AgAb形成，洗液中加0.05% Tween-20Ag、Ab 反应时间、温度： 一般 37C、3040min洗涤采用PH7.2-7.4PBS洗涤，规一化，每次浸泡12min，拍干，共洗涤34次酶促反应

4、条件温度 37C10min5.5底物量一致5.排除干扰：多设对照时间pH15. ELISA试验应设哪些对照，为什么？ELISA试验应设对照应设对照操作应得结果阳性对照同标本一样颜色深阴性对照同标本一样颜色浅g无色酶结合物对照加酶步加入无色底物对照加底物步加入无色16.判断 ELISA试验结果的方法。无色肉眼判定：与阳性、阴性对照颜色比较：若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性；若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为弱阳性。酶标光度仪检测A492值(吸光率)：比色法与阳性、阴性对照测定值比较P/N比值：大于2.0为阳性，小于2.0为阴性P:

5、 positive (待测吸光度值)N: negative免疫血清制备的主要程序。 抗血清（免疫血清）：含有某种抗体的血清。它是将抗原按一定的程序免疫动物，一定时间 后，采集动物血液，经分离得到。（1）动物的选择（2）抗原的条件（3）佐剂的应用（4）免疫方法试血和放血（6）鉴定和保存佐剂概念、作用机理、福氏不完全/完全佐剂的组成。佐剂（adjuvant）:同Ag 一起或预先注入机体，能增强机体对该Ag的免疫应答或改变免疫 应答类型的物质。作用机理：增加Ag的免疫原性，从而提高抗血清的效价福氏不完全佐剂（Freund IA）：组成：羊毛脂+石腊油，二者比例为4： 1福氏完全佐剂（FCA）：组成：

6、羊毛脂+石腊油+卡介苗分离提纯免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？盐析法在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，由亲水性变为疏水性，分子间相互凝 聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。离子交换层析法利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进 行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。凝胶过滤法凝胶颗粒是网格状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小 的则嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离，即为分子筛的作 用。亲和层析法利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯

7、化抗原先交联到载体上，制成亲和层析柱， 当Ab （Ig）通过时，与抗原在柱上特异性结合，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液pH、 离子强度，使Ab解脱下来。人体免疫功能包括哪些组成部分?数量B细胞数量T细胞非特异免 疫功能特异性免 疫功能体液中杀菌物质补体、溶菌酶吞噬细胞大、小吞噬细胞（数量、功能）.i细胞免疫（?功能 ，体液免疫功能实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常用哪些试验，这些试验的原理如何？正常值应 为多少？T细胞的计数（T细胞表面标志的检测）（一）特异性抗原的检测淋巴细胞表面有一些特异的CD抗原，根据不同的CD抗原可鉴定出不同的细胞群体CD抗原：淋巴细胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴

8、细胞在分化成熟过程中，细胞表面出现 或消失的抗原分子正常值：CD4+/CD8+31.5（二）、T细胞特异性受体（E受体）的检测 E花环形成试验原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（SRBC）受体（CD2），当T淋巴细胞与绵羊红细胞 相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。Et花环形成试验（total，总E花环）正常值：60%80%Ea花环形成试验（active，活性E花环）正常值：20%30%T细胞功能的检测检测T细胞功能的试验有：（一）T细胞增殖转化试验原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡） DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋

9、巴母细胞。（二）T细胞分泌功能测定（细胞因子检测）（三）T细胞介导的细胞毒性检测细胞毒性T细胞（CTL）具有杀伤靶细胞的功能，它是评价机体细胞免疫水平的指标。检测该杀伤作用的试验称为细胞毒试验。细胞免疫功能体内检测法（体内试验）W型超敏反应皮试原理：W型超敏反应的本质是细胞免疫，因此W型超敏反应为阳性，可反映机体细胞免疫 功能好。特异性抗原皮肤试验：所用Ag: OT或PPD以OT为例：OT 1:2000 0.1ml皮内注射，4872h观察结果，红肿硬结直径大于0.5cm为阳性PHA皮肤试验：将定量PHA注射到受试者前臂皮内，612h后出现红斑和硬结，2448h达高峰，直 径15mm为阳性反应。

10、该法敏感性高，安全可靠。B细胞数量的检测（一）B细胞表面识别抗原受体（BCR）（SmIg, Surface membrane Ig）的检测l.SmIg是B细胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟B淋巴细胞膜上，为B细胞结构蛋白。类型为：IgM、IgD型。正常值：15%25%二）B细胞表面抗原的检测B细胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20、CD21等。用抗CD21的单抗（免疫荧光法、酶免疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为B淋 巴细胞，约占总淋巴细胞的10%15%。B细胞功能的检测（一）血清中Ig的测定检测人免疫球蛋白常用方法：单向琼脂扩散实验、免疫比浊法正常值：IgG12g/L （7.616

11、.6）IgM1.3g/L （0.42.2）IgA2.0g/L （0.73.5）（二）血型抗体效价的测定反映体内IgM水平正常6月婴儿抗A 1 : 8,或抗B 1 : 4;1岁后抗A1:16，或抗B 1 : 8如3岁以上抗A或抗B效价仍 1 : 4，表明IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激机体后抗体应答反应（体内试验）将抗原注射到体内，一段时间后检测相应抗体效价，如抗体效价低，说明机体体液免疫 功能差补体的定义、组成及性质（一）补体的定义及性质：complement:补体是存在于人和动物血清中的一组经激活后具有酶活性的球蛋白， 一般情况下处于未激活状态。补体的特性：稳定性差，各

12、种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧 烈震荡等约90%的补体成分由肝细胞合成，少数由巨噬细胞、肠上皮细胞、脾细胞等产生补体成分均为糖蛋白，大多为8球蛋白，少数为a或Y球蛋白。实验室灭活补体的条件为：56C、30；室温下2天补体也可自然失活；由于补体的稳定性差，容易失活，因此作补体的检测必须用新鲜血清（二）补体的组成：由三部分组成1,补体的固有成分：C1-C9，其中C1又包括C1q、C1r、C1s，共9种成分11种蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3含量最高；2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.补体受体；如C1qR、C3aR等；CH50实验的原理、正常值及意

13、义总补体活性检测原理：组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；整个曲线呈倒“S型，即随着补体量增加， 溶血程度也增加 在50%溶血附近(30%70%之间)，稍微改变 补体量，溶血程度变化明显，因此以 50%判定溶血终点较100%更为敏感，所以该试验称为50%溶血试验(CH50)。总补体活性参考范围：50100U/ml补体结合实验的原理、结果判断及评价补体结合试验(CFT)原理：补体可与任何一组AgAb复合物结合；一旦与某一 AgAb复合物结合后，便不再与另一复合物结合。结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag；溶血为阴性，即待测物中无

14、相应的Ab或Ag.优点：该试验既可测Ag、又可测Ab；Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范 围广；可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测(实际上是测Ag)；比较敏感(0.05p g/ml)、特异；结果判断明显：通过有无溶血来观察，无需特殊仪器检测。缺点：参与反应的物质多，影响因素也多；(反应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血 素)在正式试验前需要找出几种物质间最恰当的比例，比较复杂。25 I、W型超敏反应皮试的原理I型超敏反应皮试-当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特异IgE 高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性

15、粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质：如组胺、 白三烯、激肽等。-在2030分钟内局部皮肤出现红晕、红斑、风团以及搔痒感，数小时后消失。-出现此现象者判断为皮试阳性，即对该变应原过敏；未出现红晕、红斑、风团者为 阴性，即对该变应原不过敏。W型超敏反应皮试用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的CD4+Th1再次遇 到相应抗原后，释放出大量细胞因子，如IL-2、IFN-Y、TNF、IL-3、GM-CSF,活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用；吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；促进T细胞增生和分泌细胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋 巴细胞浸润为主的炎症反应。4

16、8-72小时后局部出现红肿、硬结或水泡，以此来判断变应原是否引起机体W型超敏反应或了解机体的细胞免疫功能。比较I、W型超敏反应皮试（抗原、时间、结果、意义）免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因免疫复合物含义：（一）含义：immune complex,IC 它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。致病机理：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板、中性粒细胞作用而致 病。免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及WHO推荐的检测方法目前普遍应用的标准品是HAHG热聚合人IgG问题：（1）到目前为止，所有检测IC的试验，还没有另人满意的标准化措施；（2）在体外制备的IC还很不稳定

17、，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。 WHO推荐的检测方法：C1q结合试验、-胶固素试验、类风湿因子（RF）试验、Raji细胞试验AID的基本特征及常见的AID有哪些？基本特征：诱因可有可无。有一定的遗传倾向。女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T淋巴细胞。一些自身抗体 在自身免疫病中呈现交叉重叠现象:即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种 自身抗体，而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明显。病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。免疫抑制剂治疗可取得一定疗效

18、。常见的AID：系统性红斑狼疮、类风湿性关节、自身免疫性溶血性贫、重症肌无力ANA的定义及ANAs的组成抗核抗体（antinuclear antibody, ANA）：大多数属IgG类，也有IgM和IgA。无器官特异性和种属特异性，主要存在于血清 中，也可存在滑膜液、胸水和尿液中。ANA原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。ANA广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。ANA所针对的靶抗原由 细胞核扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。现已发现有几十种具不同临床意义的ANA，形成抗核抗体谱（antinuclear antibodies, ANAs）ANAs的组成抗DN

19、A抗体：抗*QN4、抗ssDNA抗体抗组蛋白抗体（AHA）： 抗 H1、H2A、H2B、H3、H4 等抗ENA抗体：抗Sm、抗核糖核蛋白RNP）、抗SSM、抗SS-B等-抗非组蛋白抗体：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖细胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、 抗PL-12、抗着丝点抗体等抗核仁抗体：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA-抗细胞其它成分抗体：抗高尔基体、抗中心体、抗线粒体抗肌动蛋点抗核层蛋 白等各种AID检测时的代表性自身抗体有哪些？1、抗dsDNA抗体对SLE有较高特异性，70-90%活动性SLE患者该抗体阳性，是SLE 的诊断标准之一。2、抗组蛋白抗体（ant

20、i-histonic antibody, AHA）在药物性狼疮患者中阳性率达90-100%， 而SLE病人阳性率仅有20-35%，类风湿性关节炎病人为36%。3、抗可提取性核抗原（extractable nuclear antigen， ENA）抗体1）抗Sm抗体：抗Sm抗体是SLE的特异性标志，疾病特异度达99%，为提高 SLE的诊断准确率，可将抗Sm抗体和抗dsDNA抗体同时检测。2）抗SS-A、SS-B抗体：抗SS-A和抗SS-B抗体并存是干燥综合症的特异标志。3）抗核糖核蛋白抗体 核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又称u1RNP。抗 u1RNP抗体在混合性结缔组

21、织病（MCTD）阳性率为95%以上，是MCTD的标志 抗体。4、抗Jo-1抗体对肌炎和间质性肺纤维化有高度特异性，抗体的效价与疾病的活动性相关。5、原发性胆汁性肝硬化（PBC）时AMA （抗线粒体抗体）阳性率可达90%以上。AMA是 PBC的血清学指标。6、抗Scl-70是进行性全身性硬化症（PSS）的标志抗体，阳性率为50-64%。在原发性免疫缺陷病中哪一种发生最多？原发性B细胞免疫缺陷病（占PIID的5070%），如X连锁无丙球蛋白血症怀疑体液免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？过筛试验（1）血清蛋白电泳 丙球定量：丙球应占总蛋白的15%，大于9.0g/L为正常；若小于 2.5g/L，应考

22、虑ID（2）同种血型凝集素测定-ABO血型抗体检测（反映IgM水平）正常：抗A大于1： 8，抗B大于1： 4，若3岁以上，抗A或抗B仍小于1： 4，应考虑ID（3）血清抗链球菌溶血素抗体的测定（抗0）的测定一反应IgG水平3岁以上应大于100单位确诊试验（1）血清Ig（IgG、M、A）测定：采用免疫比浊法：若IgG小于2.5g/L、IgA缺乏、IgM 小于0.2g/L，可确诊为无丙球蛋白血症（2）特异性Ab产生能力测定：三联伤寒菌苗试验：正常人注射0.25ml，每周1次，连续3 次，抗H应为1： 160，若低于1： 40，表示体液免疫功能差B细胞计数：SmIg检测免疫荧光法，正常15%左右T

23、细胞亚群测定：CD4/CD8(Th/Ts)正常(1 3.5)/1，若小于0.5,可确诊为AIDS怀疑细胞免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？过筛试验淋巴细胞绝对值测定：正常大于2.5X109/L,若 小于1.5X109/L为缺乏迟发型超敏反应皮肤试验：OT皮试等胸腺X线检查：观察胸骨是否发育不全确诊试验T淋巴细胞计数及其亚群检测：E花环实验：正常Et 6070%免疫荧光法：CD3+TLC、CD4+TLC、CD8+ TLC 计数(3) T细胞功能体外试验：PHA刺激的淋巴细胞转化试验：正常60 70%35.HLA-I、II类分子的结构、分布及意义。结构分布意义HLA-I 类由一条a链和一条0链组

24、成，a 链的N端胞外区分为a1、a2、a3 三个结构区，其中a1、a2构成抗 原结合槽，与处理后的抗原肽结 合形成MHC-抗原肽复合体所有有核细胞 膜上识别和提呈内源性抗原肽对CTL的识别起限制性作 用TCR抗原肽；TCR MHC-IHLA-II 类由一条a链和一条0链组成，两 条肽链的胞外区分别有a1、a2和 01、02两个功能区，由a1与01 共同形成抗原结合槽抗原提呈细胞 (如B细胞、巨 噬细胞、树突状 细胞)及活化的 T细胞等识别和提呈外源性抗原肽对Th的识别起限制性作 用TCR 抗原肽 ；TCRMHC-II36 .移植排斥反应的类型及产生的原因和避免方法。超急性排斥反应原因：受者体内

25、预存有抗供体细胞的抗体(针对HLA),抗体与供体细胞的HLA Ag结合， 激活补体，细胞破坏；补体活化产物使血小板凝聚，释放凝血因子XII,产生血管内凝血 避免方法：移植前取受体血清与供体细胞进行细胞毒试CDC试验，检测受者血清中是否预 存有抗供体细胞的抗体。急性排斥反应原因：供、受者HLA Ag型别不完全一致早期以细胞免疫为主(CTL直接杀伤、活化的Th1 介导的迟发型超敏反应)晚期体液免疫为主(抗体介导的细胞毒作用，NK) 避免方法：尽可能选择HLA Ag型别一致的供体慢性排斥反应机理：供、受者HLA Ag型别不完全一致体液免疫为主(W型超敏反应引起的免疫损 伤；特异性Ab活化补体及通过A

26、DCC作用破坏血管内皮细胞；急性排斥反应引起的退行性病变等）避免方法：尽可能选择HLA Ag型别一致的供体移植物抗宿主反应的概念及产生原因。在骨髓移植时，由于移植的骨髓也含有丰富的免疫细胞，且受体处于严重的免疫抑制状态， 因而对供体骨髓表现免疫无能，以使供者骨髓中的免疫细胞不仅得以生长，而且以受者细胞 卫康元产生免疫应答，引起攻击者的移植物抗宿主反应。产生原因：（1）供、受者HLA Ag型别不完全一致（2）移植物中含有大量的免疫活性细胞，尤其是TLC（3）受体免疫活性细胞处于反应无能状态移植前选择供体应做哪些检测？（一）交叉配合试验（P345）预存抗体检测一检测测受体血清中有无抗供体细胞的抗体（1）补体依赖的细胞毒试验（complement dependen