最新2022年湖南省部分规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测及防控措施

1、最新2022年湖南省部分规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测及防控措施2022年湖南省局部规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测流行病学调查及防控措施周望平 王慧 邱美珍 杨俊湖南省生猪产业技术体系、湖南省畜牧兽医研究所 长沙 410131摘要：于2022年1月-12月，对湖南局部地区的9个规模猪场进行了血清流行流行病学调查，采用ELISA和PCR对猪蓝耳进行抗体检测和病源检测。结果显示：经产母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在89%以上，平均阳性率为94%，S/P值2.5的比例占17%；后备母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在63%以上，平均阳性率为92%，S/P值2.5的比例占18%；公猪群的猪蓝耳抗体阳性率在88%以上，平均

2、阳性率为93%，S/P值2.5的比例占17%；仔猪群的猪蓝耳抗体阳性率在67%以上，平均阳性率为76%，S/P值2.5的比例占15%；保育猪30-70日龄猪瘟抗体阳性率在38%以上，平均阳性率为70%，S/P值2.5的比例占15%。另外，在高致病性蓝耳病抗原检测中，共检出16份阳性样品，检出率为26%。数据说明：我省规模猪场的猪蓝耳抗体水平阳性率较高，但S/P值2.5的的猪只所占比例大，抗原检出率高，病野毒感染普遍存在。应做好蓝耳防控措施。关键词：猪蓝耳病， 抗体，水平 ELISA，抗原，PCR, 流行病血清学调查蓝耳病全称猪繁殖与呼吸系统综合征(Porcine reproductive an

3、d respiratory syndrome, PRRS,),是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒引起的急性高致死性传染病，主要引起妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道病症1-2。1987年首次在美国报道该病3，1990 年冬传入欧洲并迅速在欧洲各国爆发和流行，目前PRRS已在全世界范围内流行4。我国于1996年首次别离到猪繁殖与呼吸系统综合征病毒5，而后在我国局部省市出现了爆发流行。2022年夏季, 我国南方地区发生以体温升高、皮肤发红和呼吸急促为主要临床特征的“猪高热综合征,很快涉及全国大局部养猪地区6-7。2022年4月,Tian K等8初步确定此次疫病主要病原为高致病性PRRSV变异株。 近年来

4、，虽然没有蓝耳病的大爆发流行，但仍是猪病防控的一大难题，已被政府列为强制免疫的疾病之一。本文通过调查湖南省局部地区规模猪场PRRS的血清抗体水平和病原情况，以期了解PRRS的流行病学情况野毒感染情况和免疫抗体水平，。为规模化猪场猪PRRS防控提供数据参考。材料1.1样品采集时间2022年1月-2022年12月。1.2血清、和组织样品的采集地点和样本数从湖南岳阳、郴州、益阳、常德等地区的9个规模猪场共采集2361份血清样品，其中经产母猪血样1048份，后备母猪429份，公猪294份，仔猪288份，保育猪302份。组织样品62份。具体情况见表1。表1 血清样品采集登记表猪场编号采样数经产母猪后备母

5、猪公猪仔猪保育猪1213562921352836322775136748118-204149691418185924213-68548288374710833153340810130201332915040354332合计10484292942883021.3血清样品采集和处理血清样品利用真空采血管于猪耳静脉大猪和前腔静脉小猪无菌采血1-2mL，于4下过夜，次日以4000转/分钟，离心15分钟，收集上清于1.5mL管中，-20保存备用。组织样品剖检猪后采集心肝脾肺肾淋巴结，组织匀浆后用于病毒RNA提取。1.4试剂与仪器 猪蓝耳抗体检测试剂盒(PRRSV-X3)购自IDEXX公司；德国Eppen

6、dorf移液器；美国宝特公司ExL800酶标仪。反转录试剂盒RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit购自Fermentas公司。1.5 免疫情况各规模猪场猪瘟疫苗和免疫程序都相同。疫苗用的是高致病性蓝耳JiangXi-1R株弱毒苗，免疫种猪群按每年3，6，9，12各普疫一次，仔猪在出生后15-21天首免。1.65 引物根据高致病性蓝耳病病毒编码Nsp2蛋白的基因序列，设计一对引物，引物的扩增片段包括其基因整个缺失区。扩增片段的理论长度在480 bp左右。2 方法：2.1 猪蓝耳病抗体检测及判定标准S/P=(样品OD值-标准阴性对照OD值)/(标准阳

7、性对照OD值-标准阴性对照OD值)蓝耳抗体ELISA试验成立条件：标准阳性OD值0.4，标准阴性OD值0.2。判断标准：阳性值为S/P0.4；阴性值为S/P0.4。2.2 猪蓝耳病抗原检测按常规法进行病毒RNA的提取，用Fermentas公司的RevertAidTMfirst Strand cDNA Synthesis Kit进行反转录合成cDNA。产物作为模板进行PCR，条件为：95，5分钟；95，30秒，65，30秒，72，30秒；72，7分钟，35个循环。PCR产物在1.5%的凝胶上进行电泳分析。23 试验结果23.1各猪场种猪群蓝耳抗体检测结果表-2 9个规模猪场种猪群蓝耳抗体水平猪场

8、编号阶段经产母猪后备母猪公猪检测数阳性数阳性率检测数阳性数阳性率检测数阳性数阳性率S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.512132075597%26%56551398%23%29293100%10%283783394%40%636324100%38%22227100%32%367641196%16%4830263%4%1181041588%13%41491433096%20%69672697%38%14147100%50%59282289%2%4236686%14%13133100%23%

9、68581995%11%4842188%2%2826093%0%7108100393%3%33334100%12%15150100%0%8101962595%25%3028093%0%2018490%20%9150139693%4%4039398%8%35331294%34%合计104899017494%17%4293937992%18%2942745193%17%通过表-12可以看出，9个规模猪场经产母猪群蓝耳S/P值0.4的比阳性率均在89%以上，平均比率为94%，但S/P值2.5的猪只也占一定比重，平均为17%，没有到达理想水平，其中5场和7场抗体阳性率高，S/P值2.5的猪只所占比率在

10、3%以下，且阳性率也高，猪场生产情况稳定免疫效果很理想；1、2、8场S/P值2.5的比例在25%以上，可能存在病毒血症或野毒感染。3场的后备母猪除3场的抗体阳性率低外，没有到达合格水平，；其他场的阳性率都在86%以上，但1、2、4场S/P值2.5的比例比拟高，需结合生产实际观察是否存在野毒感染；6、8场后备母猪抗体阳性率高，S/P值2.5的猪只比率较低，临床观察猪群状态较好水平非常理想。9个场公猪抗体阳性率都非常较高，都在88%以上，但除了6、7场以外的各场均存在S/P值2.5的猪只，这局部公猪，建议结合临床需进行隔离观察。23.2 各猪场商品猪蓝耳抗体检测结果表-3 9个规模猪场商品猪蓝耳抗

11、体水平猪场编号阶段仔猪保育猪检测数阳性数阳性率检测数阳性数阳性率S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.512118986%43%3531987%26%277571574%20%5123545%10%3-2018690%30%41817694%33%18185100%28%5-68360672%7%7444960%12%73322267%6%4039898%20%81312492%31%3227484%13%94334079%0%3212038%0%合计2882204276%15%3022124670%15%注：“表示未采样通过表-3发现，

12、仔猪抗体水平也比拟高，阳性率均在67%以上，但除了9场以外，其他场S/P值2.5猪只占一定的比例也非常高，可能存在隐性感染或野野毒感染风险或隐性感染；保育猪的抗体平均水平与仔猪差异不大，只有2、6、9场阳性率较低，且9场没有S/P值2.5的猪只。23.3各规模猪场蓝耳病原检测结果表-4 9个规模猪场蓝耳病病原检测情况猪场编号组织样品数阳性阴性18442642350547525120126606780886339404合计621626%4674% 由表-4可知，蓝耳病原的检出率为26%，其中1、2、4、8场存在野病毒感染，与抗体检测结果根本一致，但病毒是来自疫苗毒还是野毒，还有待通过测序进一步探

13、讨。24 讨论从本次的调查研究发现，自蓝耳病要求强制性免疫以及高致病性毒株蓝耳苗的应用以来，湖南省局部地区的猪只蓝耳抗体水平普遍有所提升，大多数种猪和商品猪都到达了合格抗体水平较高，有一定的保护作用，但由检测结果也可以看出，S/P值2.5的比例比拟高，再结合蓝耳病病原检测，发现蓝耳病野毒携带和感染还十分普遍。因此，做好猪场的蓝耳病监测，进行风险评估预警是保障猪场不受或少受此病感染的有效防控措施之一。蓝耳病主要造成母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病，规模化猪场能够稳定生产和持续开展关键在于保持种猪的健康稳定，种猪群携带蓝耳病毒不仅会使机体免疫力受到抑制，还更会通过垂直传播或排毒的方式传染给仔猪。，其

14、次控制好仔猪的蓝耳病，以免病毒带入后备猪群和种猪群。本报告中6、8、9场猪群各阶段抗体阳性率较高，抗体强阳性率和抗原检出率较低，结合生产实际看是蓝耳病稳定场。而蓝耳病主要就是造成母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病，因此，不控制好种猪群和仔猪的抗体水平，会直接关系到整个猪群的发病及健康状况。35 防控措施3.1 免疫程序各规模猪场蓝耳病的免疫程序大同小异，本次检测的9个猪场种猪群按每年3，6，9，12各普疫一次，仔猪在出生后15-21天首免。但在实际生产中，需结合抗体检测水平进行免疫程序制定，不可死板硬套其他猪场的免疫程序。35.21 蓝耳疫苗的选择和免疫程序目前市面上主要有灭活苗和弱毒苗，弱毒苗又

15、分不同毒株，如经典株、高致病性JiangXi-1R株、CH-1R株等，在生产中各种疫苗都得到了一定的应用。由于蓝耳病毒基因亚型及血清型很多, 疫苗保护的毒株和猪场的毒株不一定形成交叉保护，在选择蓝耳疫苗时，最好结合当地疫情监测的情况和本猪场的实际情况来定，因高致病性猪蓝耳病危害非常大，目前应该首先做好高致病性猪蓝耳病疫苗的免疫工作。另外对于同一猪场，最好不要选择两种以上毒株的蓝耳活疫苗进行免疫，并选择适合本猪场的免疫程序。35.32 做好隔离驯化对于抗体检测时S/P值2.5的猪只和被野毒感染及发病的猪只，要做好隔离观测措施，尤其是种猪。公猪被感染或存在排毒现象时需进行隔离或淘汰，不能再使用其精

16、液。另外，据调查发现大多数猪场新发蓝耳病均由新进猪只带进猪场而传染，因此要做好更新繁殖猪引进后的隔离驯化工作。35.43 做好药物保健由于蓝耳病的毒株基因型非常复杂，而且不同基因型毒株之间交叉保护性差，常常在做好免疫后仍有蓝耳病的发生。因此在做好免疫预防的同时，加强药物保健也是非常必要的，可在饲料中适量添加微生态、精氨酸和适量抗生素等保健药物。35.54 重视生物平安措施规模猪场日常做好消毒、隔离、防鼠、防蚊等工作，特别是运料车和装猪车要远离生产区，同时做好运猪车的生物平安。4 参考文献1 Keffaber K. Reproductive failure of unknown etiology

17、 J.Am A ssoc Swine Pract Newsl,1989,2:1-10.2张建武,庄金山,袁世山.中国局部地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究J.中国农业科学,2022,41(6):1822-183.3 何海健.猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的研究进展.金华职业技术学院学报，2001(1)：59-614 杨小燕，李晓华，等.猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查.中国兽医杂志，2001，37(4)：175方莹，黄印尧，张长弓，颜江华.猪繁殖呼吸综合征PRRS抗体免疫金标快速检测试纸的研制与应用. 福建畜牧兽医，2022，26(2)：1-26邓舜洲,刘文峰,戴益民,等. 2022年夏江西蓝耳病流行毒株的别离及初步鉴定J.养猪,