光学显微镜样品的相称观察方法

1、光学显微镜下样品的几种衬度模式体视显微镜专题之三（Mi croimage译）Tina (2010-06-18 18:34:32)（以下内容由中国显微图像网译制，转载请注明！）高分辨率光学显微镜下，活体以及无色透明的样品由于缺少衬度，在明场下几乎看不清。使用全孔径 的物镜，无色样品的图像非常差，甚至周期性有规律的结构也不行，如衍射格栅、线性光纤、集成电路、 丝状藻类、硅藻等。Contrast Modes in Transmitted Optical Microscopy尽管透明样品通常通过散射和衍射产生相位差影响光线，但由于人眼看不到相位差，所以这些物体在 显微镜下仍然看不见。除非给样品染上有色

2、染料，或者显微镜使用者关了虹彩光阑尽量减少聚光镜的工作 孔径。然而，这些极端的措施会极大地消弱物镜的分辨率。现代光学显微镜的光学系统能够在大倍数下产生高分辨率图像，但如果图像没有衬度，这是无用的。 衬度并不是样品内在的特性，但依赖于样品和光的相互作用以及光学系统的效率，即需要有个合适的检测 器记录图片信息。在显微镜光学系统中控制图像衬度依赖于几个因素：数值孔径的设置、检测器的特点、 光学校正程度、样品类型、采用的衬度原理。除了特异的增强衬度附件，显微镜中还有几个设置可以提高 衬度。光学系统中最关键的是视场以及聚光镜数值孔径的设置，同时也可通过调节数码相机来改变衬度， 或者改变数码检测器的放大倍

3、数、实时处理图像、给样品染色等等。图1有三张图，展示了一个透明近乎无色的Zygnema丝状藻类在三种衬度模式下的图像：明场、相差 和 DIC。光可以在一系列机制下与样品相互作用产生图像衬度。这些包括来自表面的反射、吸收、折射、偏振、 荧光和衍射。衬度也可以通过改变显微镜的光学部件和照明模式来增强，或通过数码技术或图像处理图像， 下面的讨论集中显示样品和光的不同中作用，并回顾了几种光学显微镜技术（表1）。表1展示了不同种 样品及其不同材质在透射和落射显微镜下，如何选择衬度增强技术。这个表格可被用来指导如何解决光学 显微镜下某些特定的成像问题。人眼对样品中波长的振幅和波长本身的变化非常敏感。基于这

4、个原因，许多样品切的很薄（1-30微米）， 再被染上化学染料以产生衬度和区分样品中的不同结构。这个技术已经在生物样品中用了几百年了，染料 选择性的吸收一个或几个波长，穿过或发射其他波长。这些技术同样适用于荧光染料，它可用于增强样品的衬度。在荧光标本中，一个或几个可见到近红外 的波长被激发时，它们常发射更长波长的光，从而在黑色背景下变得清晰可见。光学显微镜的衬度增强技术（表1）样品类型成像技术透身桃光透明样品细菌,精子，细胞在玻璃容器， 原生动物、螨、纤维等。相差DIC霍夫曼斜照明光散射物体硅藻、膳食纤维、头发，淡水的微生物，放射虫等。莱茵堡照明 暗场照明相差和DIC光线折射样本胶状悬浮剂，粉末

5、及矿物质液体相衬分散染色DIC振幅标本彩色组织，自然色的标本头发和纤维昆虫和海藻明场照明荧光标本在组织培养的细胞荧光染色涂片检查和传播荧光照明折射样本矿物薄片液晶融化-再结晶的化学药品头发和纤维骨头和羽毛偏光照明反身桃光高光反射表面薄膜，镜子抛光冶金样品集成电路明场照明 相差、DIC 暗场照明漫反射表面厚膜岩石和矿物头发、毛纤维、骨、昆虫明场照明 相差、DIC 暗场照明振幅的表层特征染成纤维，弥漫性金属标本明场照明暗场照明复合材料 聚合物折射样本矿物薄片头发和纤维骨头和羽毛单晶硅定向薄膜偏光照明荧光标本染色细胞，荧光染色部分涂片检查荧光照明中国显微图像网推荐原文出处： HYPERLINK /ar