ABI-9700型扩增仪的验证标准操作规程_第1页
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1、宁波市刑事科学技术研究所作业指导书文件编号NBIFS-320-027页 号第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页版 次第1版 第0次修改标题ABI-9700 型扩增仪的验证批 准 人叶成立发布日期2009年5月1日PAGE 11 适用范围该方法适用于9700型扩增仪的有效性验证。本方法介绍的有效性验证方法，是通过将特定扩增仪（以下称待验证仪器）与已进行检定的同类扩增仪（以下称已检仪器）进行比对来实现的。2 原理通过设定，9700型扩增仪能够进行不同的“温度-时间”循环模式，结合特定的分子生物学试剂，可以完成不同的PCR（Polymerase Chain Reaction）反应以及以

2、PCR为基础的STR检验。3 器材和试剂3.1.1 台式离心机3.1.2 扩增仪3.1.3 超净工作台3.1.4 遗传分析仪3.1.5 加样器3.2 试剂3.2.1 Identifiler 试剂盒3.2.2 GeneScan-500 LIZ3.2.3 Hi-Di Formamide3.2.4 超纯水4 操作步骤4.1 扩增反应4.1.1 取出冻藏的扩增试剂置于室温解冻，轻弹混匀，离心。4.1.2 按照下表比例混合反应液。反应体系反应体系需要量缓冲液42.0 l引物22.0 lTaq Gold酶2.0 l（1u）9947A(0.1ng/ul)22.0 l超纯水22.0 l4.1.3 将混合好的各

3、种成份振荡、离心。4.1.4 向每个反应管内分装混合液10.0 ul，共分装10个反应管。4.1.5 将反应管分别放入两台扩增仪（待验证仪器和已检仪器）中，按预先设定的程序运行：95 11min 1 cycle 94 1min 59 1min 28cycles 72 1min 60 60min 1 cycle 25 kept forever4.1.6 扩增完毕后立即检测或将产物置于4保存。4.2 电泳检测按照“NBIFS-320-023荧光STR复合扩增产物检测方法”中的步骤进行检测。4.3 分析结果4.3.1 按照“NBIFS-320-030 DNA检验结果的分析”中的步骤进行分析。4.3.2 比较待验证仪器和已检仪器的检验结果图谱，如对应产物的RFU 值偏差10%，则待验证仪器通过验证；如对应产物的RFU值偏差10%，则待验证仪器未通过验证。5 注意事项5.1放入待验证仪器和已检仪器中的反应管必须分别放在扩增仪加热块的四角及中间部分，孔位可以随机选定，两台仪器中的孔位必须一一对应。6相关文件6.1法庭科学DNA实验室规范 GA/T382-20026.2法庭科学DNA实验室检验规范 GA/T383-20027相关记录7

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