无菌制剂工艺

1、无菌制剂工艺cGMP指南.目录一、简介和框架二、无菌制剂对环境、设备设备要求三、人员要求四、对组分和密封件要求五、对内毒素控制六、对消费时间限制七、对无菌工艺和灭菌方法验证八、对实验室的控制九、无菌测试要求十、对批记录的审核十一、附录1.无菌工艺的隔离系统附录2.吹灌封三合一技术略附件3.灌装和封口操作前的工艺技术十二、相关指南和术语略.一、简介和框架本无菌工艺cGMP指南200409替代了1987年的无菌工艺工业指南。本指南主要是针对无菌产品和生物制剂产品的无菌工艺要求的GMP指南。本指南应结合“人用药/兽用药新药恳求无菌工艺验证文件递交指南一同指点工业企业的无菌工艺消费。本指南不具有任何的

2、法律约束力。药政框架本指南从属于药品消费质量管理规范21CFRparts210和211；对于生物制剂产品从属于21CFRparts600和680的监管，并对其无菌工艺做了增补的要求。.技术框架本文的无菌工艺和终端产品灭菌工艺有本质上的区别：以终端灭菌工艺的产品在高质量的环境下进展灌封，但此种产品及其消费环境、容器和密封系统并非完全无菌，最终产品需求进展热压或幅射灭菌。无菌工艺的产品、容器/密封件都必需事先分别用无菌方法处置，再于严厉控制的环境下操作成最终的产品，其最终产品不能进展灭菌操作。因此无菌工艺含有更多的工艺变量，各组成部分的灭菌方法也不尽一样，过程引入的偏向环节较多，其任何的人为操作都

3、是潜在的污染源。只需不适用终端灭菌处置的产品才思索用无菌工艺过程。.二、无菌制剂对厂房设备设备要求对无菌工艺制剂的干净区必需有监控微粒和微生物的设备；其干净厂房在运用前必需进展静态测试合格，否那么以为验收不合格；其干净厂房的干净级别划分必需以动态条件下测试的数据为准；必需用日常的动态数据监控证明其干净级别一直如一。.1.cGMP对干净级别的划分洁净级别ISO对应级别 颗粒度(0.5um/m3 ) 悬浮菌（cfu/m3)沉降菌90mm培养皿cfu/4h10053520111000635200731000073520001051000008352000010050注：以上数据均为静态下的测试，动态

4、100级相当于静态的1000级，以此类推。EU将洁净区的级别划分为A、B、C、D四级，其中A、B为100级（A级主用于100级无菌区、B级主用于100级洁净区，C为1万级、D为10万级。它们对悬浮粒子（个/m3）规定如下：洁净级别静态动态0.5um5um0.5um5umA3500035000B350003500002000C3500002000350000020000D350000020000未定义未定义.2.关键区域的控制关键区域定义：无菌药物和容器及密封件所暴露的环境区域，这个区域必需可以维持产品在无菌的形状如无菌过滤和无菌灌封。关键区域的操作活动包括：灌装和封口之前及过程中的无菌物料的操

5、作，如无菌衔接和无菌组分的添加。无菌区域必需控制0.5um的颗粒，在运用后必需在动态测试下符合100级要求。动态检测时的检测间隔为在气流范围内离操作区1英尺0.3048m尘埃粒子计数器的放置和采样口的朝向必需合理，以获得有效的样品。对于HEPA安装在房间顶棚上的干净区，其尘埃粒子计数器应放在离地0.71m处，采样口朝上。日常消费每班都应进展无菌区颗粒度的监测 FDA无菌工艺cGMP指南建议运用远程技术来实现。.可以采用动态条件下操作前的颗粒程度来断定有否外源性颗粒污染。应采用能维持单向流的高效空气去除关键区域的颗粒。应控制区域中的紊流和静置空气的产生，由于它们为空气污染提供了渠道。应有完好的测

6、试记录来分析证明其空气流能否为单向，并且要有书面的结论涵盖对无菌操作和设备设计的影响评诂。可以用录像或照像方式证明气体流动的方向。关键区域的空气监测结果是最终没有微生物的污染，假设发生那么应高度注重并调查。3.支持区域的控制支持区域的定义：用于制备、储存或转移非无菌组分、配方产品、中控物质、设备、容器密封件的区域。FDA引荐直接临近无菌工艺消费的支持区域在动态条件下至少应到达万级ISO7。工厂可以采用千级ISO6或维持整个无菌灌封间在百级ISO5。.4.干净区的隔离预防污染的一个关键环节在于对不同操作区域间的有效隔离，应确保干净区的空气流以适宜方式从高级别区流向相邻的低级别区。在高级别区和低级

7、别区之间应至少坚持1015Pa的正压差。进入无菌工艺操作间的更衣室和缓冲间的干净级别应与无菌操作间的干净级别一致。无菌操作间与其临近的无任何干净级别要求的房间必需一直坚持12.5Pa的正压差来防止污染。假设压差低于设定的最低限值，必需对无菌操作间的环境质量进展修复和再确认。对于低压差的发生应有报警安装进展监控，任何的报警必需有记录、任何的偏向必需调查。.例如：cGMPCFR211.42设计及构造的特征作业在特定区域进展无菌操作.经过滤器过滤的空气向作业区供应.5.对过滤器的要求5.1对气体和液体过滤器的要求常用气体过滤的疏水性资料PTFE聚四氟乙烯，运用中必需枯燥应防冷凝水的堵塞和微生物的生长

8、。常用药液过滤的亲水性资料聚砜常用注射剂用水过滤的亲水性资料PVDF聚偏二氟乙烯。上述资料常用作筒式过滤器的滤芯。FDA规定对用于无菌产品的过滤器应进展微生物挑战性实验、无菌过滤性能实验和完好性起泡点实验运用前后。其中微生物挑战性实验用户可以要求过滤器的制造商来完成，无菌用过滤器对数细菌减少量应7。过滤器必需进展周期性改换。在对无菌药液过滤器的验证中除了完成上述三项实验外，还应对过滤器的溶出物检查、过滤器的清洁度检查及与药液顺应性实验详细方法参见中国GMP验证指南中冻干粉针剂验证的有关内容。.5.2对HEPA的要求HEPA的完好性必需维持无菌的消费条件，在安装时必需做检漏测试。美国联邦规范20

9、9A和209B指出：假设HEPA的走漏实验和空气流速测试均合格，那么干净室的空气干净度是不难到达的，此两项运转检验比在含极少微粒的部位进展微粒计数测定的做法更有意义，故其重要性不亚于粒子测定。检测位置：边框、滤器外表。检漏方法：DOP气溶胶法和PAO气溶胶法 DOP邻苯二甲酸二辛脂、PAO聚烯烃 DOP法由于有突变性，现国外已w全部改用PAO作为气溶胶烟雾剂。取样速度和间隔：每分钟1立方英尺(0.0283m3/min中国验证指南的取样速度为3 5cm/s)，气溶胶光度计的取样口应离滤器和边框外表约12英寸0.0254m 0.0508m中国验证指南的间隔为2 4cm 。对于替代的烟雾剂应评诂其对

10、微生物生长能否有促进作用，以排除替代的烟雾剂对HEPA呵斥微生物污染的风险。.HEPA的过滤效率应可以截留99.97%的大于0.33um的颗粒。无菌工艺的HEPA检漏应有适当的时间间隔确认，每年最少检查2次。当空气干净度不合格或能够引起墙壁或屋顶构造变化的设备翻修或培育基灌装失败或药物无菌测试失败时，必需加做额外的检漏测试。HEPA检漏测试必需有完好的书面记录备查，一旦发现气溶胶光度计的读数0.01%时阐明有走漏，应及时改换或维修，改换维修后必需重新测试。经过HEPA过滤器的空气速度均一性的周期性确认非常重要，其速度的变化会呵斥紊流而添加污染的风险。其单向气流速度的测定必需于间隔过滤器外表约6

11、英寸15.24cm处进展测试，或是在无菌操作关键区域内过滤器任务外表中心确实定间隔内测定。假设检测为非单向气流或是有副作用的气流方式，都必需改换HEPA。.无菌环境的设计留意点/认证空调设备的设计认证原FDA检察官提出事项网框的间隙无空气滞留气流监控录像的保管.6.对干净区整体设计的要求总那么：无菌工艺要求尽能够的减少潜在的污染。必需控制产品暴露的时限，提供最高级别的环境控制，优化工艺道路和防止低质量空气进入Class100的设备设计都是高度无菌确认的关键。优化人流物流，防止无必要的活动发生；设备的规划必需符合人体工程学的要求，优化操作工的操作；必需尽能够的减少操作工人数；人流的设计必需尽能够

12、限制人员进出无菌工艺间的频率；必需尽量减少关键区域和普通干净区域或隔离器之间的传送次数；必需限制在关键区域旁的活动，以防止低质量空气的引入。.无菌工艺中所用的设备必需有适当的设计防止人为的干扰和打断添加污染的危险要素。如：运用在线称量安装可减少反复的手动操作，运用SIP灭菌处置预配备的衔接可减少灭菌操作，其他工艺道路的自动化操作可降低产品污染的风险。产品必需在适宜的干净级别下进展转移。例如：冻干工艺的半压塞产品只能在关键区域内转移，设备设计必需确保灌装消费线和冻干机在Class100维护下，转移和御载操作也必需遭到一样级别的维护。假设无菌工艺区或轧盖前房间内有带塞小瓶即未轧盖的产品，必需有部分

13、维护措施防止产品遭到污染，运用仪器在线检测装配不适当的塞子以提供额外的质量保证待轧盖产品在运输过程中的塞子突起。无菌隔离系统的运用可以更好的维护产品不受人为污染。.必需仔细定义和控制各房间之间的动态过程。可以运用双门或集成灭菌器确保低级别区到高级别区的正确适宜的直接物流；运用气闸室和联锁门控制无菌工艺设备内空气压力，无菌制造区域入口处和其他无级别区的临近处必需设气闸室；当人员和物料从低级别区域进入高级别区时应严厉采取措施防止污染如必要的洗手消毒、更衣、物料的灭菌等规程。建造干净区的资料必需容易清洗和消毒，如无缝和弧形设计的墙角、平整巩固的顶棚/墙壁/地板、不藏尘HEPA框架等。工艺设备和系统必

14、需配备卫生安装和阀门。无菌工艺操作间内应不设下水道地漏，假设不可防止，那么任何这样的设备都必需有设计阐明。设备应便于安装拆御和无菌处置；不妨碍干净区气流，在关键区不得打乱单向气流；对干净区环境的影响必需有足够的阐明；没有积累颗粒的程度外表和突起部位。因非正常情况导致的空气系统或其他设备的停机，以及建造活动对设备的影响等必需在偏向和变卦控制系统中加以阐明解释，必需有书面的程序阐明在停机后如何恢复正常运转。.图例：1.无菌操作的微生物污染控制.图例2.环境区域划分和正确的更衣事例.三、人员要求3.1操作人员质量部门必需为制造操作提供常规的监视以确保操作人员的无菌操作一直符合已建立的书面规程。任何人

15、在进入无菌操作区前必需接受如下培训内容的培训：消毒技术和更衣操作；微生物学和卫生学；精制包装行为准那么；非无菌药物呵斥的病人平安性危害；无菌制造区域内的一切书面操作规程等。以上内容的培训，在日常任务中，主管人员应每天评诂每个操作员工在实践操作中能否按书面规程操作。.维持无菌物品和外表无菌形状的人员操作技术有：只运用无菌器具接触无菌物料，为防止物料间的交叉污染，应根据需求及时改换无菌器具；在更衣后无菌手套必需经常消毒或改换，应防止将衣物和手套直接接触无菌产品和容器；人员的挪动必需缓慢，必需有目的的挪动，应防止因漫无目的的挪动而呵斥的单向气流混乱；为防止无菌产品受污染，应确保操作人员的身体处于单向

16、气流之外；操作人员进展的必需的无菌操作不得危害产品的无菌性，应防止垂直操作打乱单向气流，应防止在关键区域内说话；通常从侧面的操作可以确保无菌产品周期的无菌条件。无菌操作之前和整个过程中必需防止着装的不测污染着装的维持和控制。只需有资历的人员，穿适宜的着装方可允许进入无菌操作区。.任务服必需进展消毒处置，且不得有丝织物零落；着装包括：面罩、面具、胡罩、防护眼镜和弹性手套必需可以覆盖一切的皮肤和毛发，必需有书面的规程描画如何采用无菌方式运用这些着装品。一旦发现着装有破损或损坏必需立刻改换。操作人员调任其他岗位应经过再培训和获得上岗资历，这种情况必需有充分的书面规程规定。3.2实验室人员无菌技术和无

17、菌制造人员的要求同样适用于进展无菌取样和微生物测试的实验室人员。假照实验室产生的各种数据存在问题，那么操作和系统将不被以为是在受控和可反复的形状下。.3.3人员的监控程序操作人员是严重影响无菌产品的关键环节之一，必需建立高度预警且灵敏的人员监控程序。可经过获得每天每个操作工手套的外表样品，或者是每批消费的相关样品来建立监控程序。监控样品还应包括衣物上合理部分的适宜取样频率下获得的样品。质控部门必需为那些复杂或是复杂的无菌操作环节的操作工建立一个更加全面的监控程序。对无菌操作人员的监控目的是一直维持在操作过程中坚持手套和衣物的无污染形状，单单取操作前的灭菌手套是不够的，由于在后续的操作中微生物会

18、重新繁衍。一旦操作工外表微生物超越建立的规定规范或是显示出不利的趋势，必需立刻进展调查。后续采取的措施应包括添加取样、添加观测、重新培训、再确认着装程序、特殊情况下的人员重新调整、安排指定的人员分开无菌操作区域。.四、对组分和密封件的要求4.1组分无菌产品组分包括活性成分、注射用水和其他辅料。假设运用了一个或多个含有微生物或细菌内毒素的组分，那么产品会被污染，因此对这些组分中的微生物载量和内毒素目的确实认及建立适宜的可接受限制非常重要。非肠道产品要求无热源，因此必需有书面的规程和的规格规范来规定产品中每个组分的内毒素可接受规范，任何内毒素不合格的组分都必需拒不运用。无菌制剂的组分通常单个灭菌或

19、是多个组分混合后的混合物灭菌。常用的方法是将组分溶于溶剂中再于无菌条件下进展除菌过滤，或是将各组分分别溶解后单独无菌过滤最后进展无菌混合此法适用于组分混合后最终产生大分子的混悬针剂。过滤的药液再进展灌封或无菌结晶或冻干成粉末。对热稳定而又不溶解的组分可采用干热灭菌的方式，但必需小心的设计热穿透和热分布实验。.4.2容器/密封件制备非肠道产品所运用的容器具/密封件必需无菌、无热源，其灭菌方法必需符合它们的材质性质，其灭菌的有效性必需验证证明。对其灭菌后可坚持无菌无热源的时间限制和再验证周期必需有书面的规定。无菌制剂产品的容器具/密封件清洗的最后一道清洗剂必需是符合USP质量规范的注射用水。评诂去

20、热源工艺的有效性方法：向容器/密封件中添加知量的内毒素，然后去热源处置，再测定其残留的热源量，同时运用阳对照的方法计算内毒素的回收率。验证研讨数据必需证明采用的方法可以将内毒素降低至99.9%3Logs。对玻璃容器普通采用干热方法灭菌和除热源，对此灭菌方法的验证必需包括热分布实验、热穿透实验和运用最短的消毒时间。容器的放置必需与实践消费相一致。非肠道制剂所运用的塑料容器也必需是无热源的。.橡胶密封件胶塞和注射器活塞在进展纯蒸汽灭菌前的最初清洗水至少运用符合USP最低内毒素的纯化水，最后冲洗水必需是注射用水。运用热注射用水多次冲洗可以到达去除热源的目的。为防止微生物繁殖的污染，橡胶密封件灭菌后必

21、需彻底枯燥，其含水量应符合规定规范。对清洗灭菌的过程必需进展验证，以确认这些物料上的内毒素被完全去除。必需特别留意硅化处置过程是胶塞的潜在污染源，其所用的硅油聚硅氧烷必需符合一定质量规格，必需对制剂产品的平安性/质量/纯度不产生副作用。采用的这些容器/密封件的合同制造商必需符合cGMP的要求，制剂消费商必需审核合同制造商的验证方案及最终的验证报告。对已建立供应商质量审计体系定期测试的合同制造商可以在外观测试和对方COA检验证书的根底上接受容器/密封件。.微生物可以穿透的密封件不适宜无菌产品的消费。对最后分装好的产品的检查中发现任何被破坏或有缺陷的单个容器必需检出并被销毁。必需严厉保证运输过程中

22、容器/密封件的完好性，必需防止由于包装破损呵斥的非无菌污染。设备适用性问题或购入的容器/密封件质量缺陷都会呵斥容器密封系统的不完好，假设危害是由于没有及时检出而呵斥的完好性破坏，必需立刻改善这些系统。递送安装如灌注安装的功能缺陷，使递送的体积不一致，同样可以导至产质量量问题，必需采用适宜的中控方法进展监控。任何与中控或最后检查不一致的或超出范围的结果都必需按照21CFR211.192的条款进展调查。.五、对内毒素的控制注射产品的内毒素污染是不好的GMP控制呵斥的。药物成分、容器/密封件、储存时间限制和制造设备都在内毒素的控制范围内。设备的充分清洗、枯燥和保管可以控制微生物的载量，防止内毒素的载

23、量添加。设备必需设计成容易拆御/装配/清洗/消毒或灭菌。假设没有足够的控制方法，产品中的内毒素将会由上下游的设备而添加。无菌级别的过滤器和湿热灭菌不可以有效的去除内毒素。对设备内外表的内毒素可以采用高温干热灭活，或采用清洗程序去除内毒素。一些CIP规程可以先运用适宜的高纯水或洗涤剂如稀酸稀碱、外表活性剂初洗，最后用热的注射用水冲洗。清洗灭菌的设备除非立刻进入无菌操作的过程中，否那么在清洗后必需进展枯燥。.六、消费时间限制根据21CFR211.111条款：无菌工艺的每步操作都最好设定时间限制；时间限制必需包括：大批量产品的配制和灭菌时间间隔、过滤工艺时间间隔、产品暴露在消费线上的时间间隔、无菌设

24、备/容器/密封件的保管时间限制等。不同产品消费环节的时间限制的建立必需有数据支持。生物载量和内毒素载量必需在建立配方加工阶段的时间限制的时候进展评诂。产品过滤的总时间必需建立，以防止微生物穿过过滤器。这个时间限制也可以防止上游的生物载量和内毒素载量的添加。假设过滤器可以提供微生物吸附的基底，必需确定和合了解释其最多的运用次数。.七、对无菌工艺和灭菌方法验证7.1模拟无菌工艺研讨7.1.1研讨方法的设计为确保产品无菌，应对其无菌灌装和封口操作及灭菌方法进展验证，必需进展“培育基灌装实验用培育基替代产品模拟整个工艺过程包括消费环境，确认培育基能否在工艺过程中被污染。原那么：综合思索消费线上一切潜在

25、的污染源，评诂工艺控制的有效性，思索最差的情景模拟，挑战极端的环境等。必需有完好的批记录，环境监控记录等支持这样的模拟研讨，必需书面定义条件的选择缘由。不应该用产品灌装实验作为引入潜在污染操作行为的根据。研讨设计应思索的要素：消费线允许的最长时间范围，可呵斥潜在污染的相关要素如员工的疲劳；人员数量及操作活动；.每次运转中的常规中断操作次数、类别和复杂程度以及非常规的中断操作和干扰事件如维护、停产、设备调整；设备的无菌装配；无菌分装和冻干过程；有代表性的无菌加料如容器/密封件和无菌组分的添加和转移操作的次数；班次变化、中途休憩和适宜的更衣次数；无菌设备衔接/断开的类别；无菌取样操作；消费线速度和

26、构造；称重；容器密封系统如大小、类别、设备兼容性；书面规程中的无菌工艺相关的特殊限定如CIP指令前的环境要求.7.1.2模拟研讨运转次数和频率：在最初确实认时，至少应进展三次延续且独立的模拟。日常每半年反复一次，以评诂其控制才干；每班的代表性活动和中断操作、换班都必需在半年确认程序中涵盖；一切被授权进入无菌工艺间的人员包括技术工人和设备维修人员，都必需每年至少参与一次无菌灌装测试，参与者的操作都必需和其日常任务相一致；每次产品或消费线的变化都必需有书面的变卦控制系统评诂。任何能够影响无菌工艺性能的变卦或事件都必需添加额外的培育基灌装实验来评诂。如设备设备的改动、消费线构造的变化、人员艰苦变化、

27、环境监控结果的异常、容器密封系统的变卦、延期的关机或最终废品无菌检查显示产品被污染等都可引发对系统的再验证；一旦灌装实验数听阐明工艺不受控，必需对污染的起原和问题涉及面进展调查。一旦制定的整改措施，就必需进展模拟实验以确认缺陷曾经被修复，工艺已回到了受控形状。当调查得不出有压服力的结论时，在加强监控的前提下延续进展三次胜利的消费就可以了。.7.1.3模拟研讨运转继续时间以最大批量和运转时间根底上灌装实验是最真实的模型，假设采用任何其他的适宜模型都必需进展合理的解释。灌装实验的运转继续时间必需思索实践操作时间和中断操作的时间。普通性发生的中断操作必需在日常模拟中涵盖，那些不经常发生的中断操作可在

28、周期性的模拟中确认。假设无菌工艺中有一定操作工的手工操作，在模拟工艺中此类操作继续的时间不得少于实践的制造工艺时间，以尽能够的模拟由于操作工所引入的潜在污染风险。对于冻干操作，FDA建议运用不封锁的容器暴露在部分抽空的设备内来模拟正常工艺，不需冷冻产品，必需小心操作确保培育基处于有氧形状，以防止抑制潜在的微生物生长。7.1.4模拟研讨消费线速度培育基灌装实验程序必需充分解释消费期间的消费线速度范围，每次培育基灌装操作必需评诂一个消费线速度，必需对选择的速度进展合理的解释。.7.1.5模拟研讨环境条件：培育基灌装实验必需在足以代表实践的消费环境下进展。人为特别控制条件下的灌装将导致不正确的评诂。

29、在SOP允许的“压力条件如最大工人数和提高的运转程度内，灌装实验涵盖这些挑战是非常重要的，也支持了这些研讨的有效性，此所谓的“压力条件不包括人为制造的极端环境条件如将HVAC系统调整为最差条件。7.1.6模拟研讨的培育基要求：普通情况选用大豆酪蛋白消化液培育基，特殊情况选用厌氧菌培育基硫代硫酸盐培育基。选择的培育基必需证明可以促进G、G、酵母菌和霉菌以及USP生物指示剂的生长。USP生物指示剂能否足以代表消费相关的菌种必需由QC实验室决议。环境监控和无菌测试的菌种必需用于促生长的挑战性实验，菌种的接种单位必需100CFU。假设促生长实验失败，模拟实验中发现的任何污染的来源应进展调查，培育基灌装

30、实验必需立刻重新进展。.每个单元都必需灌入适宜数量和类别的培育基，并确保其接触到容器的内部倒置或旋转，以便目测察看微生物的生长。灌装完成后进展外观检查，一切完好的单元必需立刻进展培育，有完好性缺陷如无塞/破瓶等的必需丢弃。培育基单元必需在足以检测到最难生长的微生物条件下培育，根据以下思想选定培育条件：培育温度必需符合生物载量和环境中菌种的生长，普通不超越2035通常菌种都有规定的培育温度范围，培育时必需维持在目的温度的2.5 内；培育的时间不得少于14天，假设灌装的培育基延续运用两个温度点培育，那么每个单元在每个温度的培育时间不得少于7天；培育基单元能否被污染必需由具有适宜教育背景、培训和阅历

31、的人员担任进展检查。假设QC不担任详细检查，也必需在这样的检查时现场监视。一切检查时发现的可凝单元都必需交给QC微生物学家。为方便目测察看微生物生长情况，FDA建议采用的容器为透明色。.培育过后任何被破坏的单元必需和灌装过程中损坏的单元一同计数，从最终计数中排除这些单元的决议都必需全面解释，并在培育基灌装报告中作为偏向解释。假设发如今很难检测损坏与微生物污染之间有必然的联络，必需进展完好的调查来查明缘由。假设书面程序和批记录中描画了在培育基灌装实验中可以被移出的单元或去除率，那么这些被移出的单元不用进展培育。千万不要在灌装实验中移出比实践消费中更多的单元。制造商没有必要担忧培育基灌装对消费设备

32、和设备呵斥潜在污染，由于假设培育基被正确处置、并立刻清洗和消毒，甚至对设备灌装系统进展灭菌，那么后续产品的消费没理由被影响。大数量的在线去除不应该影响培育基灌装实验模拟正常消费来检测潜在的污染才干。必需为收率和物料平衡建立适宜的可接纳规范，培育基灌装记录的物料平衡记录必需包括每批的总数目以及详细描画拒收单元的情况。.7.1.7模拟研讨实验结果的解释：工艺模拟的运转必需在QC部门的监控下进展，污染单元的数量必需和灌装实验模拟的时间和活动相一致。运用摄像机记录可以协助确认人员操作对于灌装实验中的无菌工艺没有负面的影响；任何被污染的单元都被以为是不好的且需求调查的。相关的染菌必需鉴定出其种系，必需调

33、查污染的能够缘由。无论灌装运转批量多大，只需模拟运转中发现了污染，就必需以为存在着潜在的无菌保证问题。灌装实验的总数和被污染的数目没有直接比例关系。测试结果必需可靠且可以反复的阐明无菌工艺操作消费的产品是无菌的。在合理设计的设备内的当代无菌工艺操作被证明可以到达零污染率，且普通不会导致培育基灌装实验被污染。.引荐的可接受规范：对于任何批量的大小，灌装实验中延续的发生微生物污染应意味着存在低级别的污染问题，是必需调查的。对于一条消费线上反复发生实验污染事故，无论能否符合接受规范，都是一个信号阐明无菌工艺消费线的不好趋势，必需确认问题、矫正和再验证。模拟灌装实验的可接受规范允许有少量的污染，这并不

34、意味着无菌产品的批号中可以存在着非无菌单元。美国食品药品化装品法案section301a,21u.s.c331a规定：制止制造商出卖任何非无菌制剂产品。只需书面规程要求市售产品批号必需在一样方法处置的情况下发生的灌装实验失败可以被放弃思索。对于这样的情况必需有支持的文件和合理的解释。灌装数量可接受污染量处理措施5000瓶0调查后重新验证5000100001调查，必要时重新验证2调查后重新验证100001调查2调查后重新验证.7.2过滤效率过滤是药品溶液无菌处置的常用方法。无菌级过滤器必需验证可以从工艺流中反复去除活的微生物来获得无菌液体。无菌过滤器的孔径应0.2um，可以运用一级或多级过滤器。

35、无菌过滤验证中必需包括模拟最差消费条件下的微生物挑战实验和过滤器完好性测试。应选择代表最差情况的生物指示菌评诂其去生物载量的才干，微生物挑战实验常用的指示菌为缺陷假小单胞菌Pseudomonas diminuta ATCC19146)，它的直径为0.3um。灭菌前产品的生物载量必需检测以确定潜在污染微生物的趋势特征。挑战实验所需生物指示菌的浓度至少为107CFU/ cm2 那么验证所需指示菌数量过滤器滤膜有效外表积107CFU/ cm2 ，运用此浓度的目的是为实践消费提供一个平安界限。. 由于过滤器膜上通常有些孔径比普通孔径要大，有可以使微生物经过的风险，此风险随微生物数量的添加而增大，因此挑

36、战实验的微生物数量非常重要。直接在产品中运用生物指示菌过滤并培育，虽然是最好的方法，但是假设药物本身具有抗菌作用或是在油性配方中那么会导致错误的结论。只需有充分的理由，过滤器对药物制剂配方的有效性可以运用适宜的替代方法来评诂，但替代产品不能含有抗菌成分，且模拟的工艺和消费条件必需一样。任何运用与实践产品及工艺条件的模拟物所产生的任何分歧都必需进展合理的解释。.可以影响过滤器性能的要素包括：被过滤物质的黏度和外表张力；PH值；被过滤物质或配方组分和过滤器的相容性；过滤压力；过滤速度；最大运用时间；过滤温度；浸透性分量浸透浓度表示；液压减震效果。在设计无菌过滤验证方案时阐明过滤器所允许的极端工艺参

37、数非常重要，一旦过滤验证过于复杂，超出了运用者的测试才干，就必需委托测试或交由滤器制造商测试。但是滤器运用者必需审核过滤验证报告来确保其到达工艺的用途，其数据必需与运用者的产品和消费条件相一致由于滤器的性能在不同条件下对不同的产品有很大差别。一旦过滤器被验证经过后，就必需保证明际消费过程中运用一样类别的过滤器。无菌过滤器必需在每批消费后改换，对那此可以反复运用的情况必需进展合了解释，其无菌过滤验证必需包括最大的可处置的批数。.无菌过滤器应进展完好性测试，其测试必需在过滤工艺开场前和终了后均应进展，以确认其运用前和运用后能否有走漏和穿孔，可以采用前置流速和起泡点测试来确认其完好性。消费中过滤器完

38、好性测试的规格规范必需同细菌截留验证研讨产生的数据相一致。7.3设备/容器/密封件的灭菌7.3.1确认和验证接触无菌产品、无菌容器和密封件的设备外表都必需无菌。接近无菌产品的外表，只需有理由疑心其有潜在污染的能够，都必需坚持无菌形状。这些关键设备的无菌处置工艺验证与产品/容器密封件的无菌工艺验证同样重要，最广泛的方法是湿热和干热灭菌。无菌工艺设备的无菌处置必需每批进展。灭菌后，设备/容器/密封件的传送、装御都必需严厉按照无菌操作的方法进展维护和维持产品的无菌形状。验证研讨必需可以证明灭菌周期的有效性，且必需进展周期性再确认。指定的装载方式、生物指示剂和温度探头的位置必需在验证中有记录。消费批记

39、录的规定必需和验证的装载方法一致。.必需评诂灭菌器或设备运用SIP的设备内部潜在的很难到达的位置通常说的灭菌器的冷点区，用空载和负载实验来确认其内部不同位置的条件均匀性如温度和压力，这些均匀性研讨或参数规划研讨必需运用校验过的仪器进展。热穿透实验必需运用曾经建立的负载方式进展评诂，以确定不能有效到达灭菌致死率的热物质穿透难度。用放置在温度传感器附近的生物指示剂来评诂微生物致死率与基于输入热量的预期致死率之间的关系。当确定什么物质特别难灭菌时必需留意过滤器/泵和灌装系统的灭菌。最终，这种灭菌方法的灭菌周期规范必需根据到达足够灭菌才干的最低位置所需的时间来定。必需证明灭菌方法可以到达使微生物下降至

40、10-6或是更好的情况。灭菌器的验证程序必需继续关注最冷点和最难穿透的部位，其适宜性必需建立在确认/维护/变卦控制和周期性确认涵盖微生物挑战的根底上。变卦控制程序必需足够阐明负载情况的变化或是灭菌器的构造改动。.7.3.2设备控制和仪器校验无论是验证还是日常监控，灭菌监控设备产生的数据可信性都是至关重要的。测定灭菌周期参数的设备都必需进展日常校验。必需建立书面的规程来确保这此设备处于校验的有效形状，FDA建议的规定如下：热法灭菌中运用的温度和压力测定仪器必需进展日常周期性校验，且间隔必需适宜。验证中运用的传感器必需在验证的前后都校验；用于监控灭菌器灭菌时间的仪器必需周期性校验；生物指示剂运用的

41、微生物计数器必需确认，且生物指示剂必需保管在适宜的条件下；假设供应商的COA的可靠性曾经经过适宜确实认程序确认，那么生物指示剂如胞子试纸，玻璃安瓿的D值可以在每批确认后接受。否那么必需对接种到灭菌物质中的生物指示剂D值进展测定，或是采用供应商提供的方法之外的其他方法来测定。D值测定可以运用独立的实验定完成。蒸汽纯度测定的仪器必需校验；对于干热灭菌隧道，测定传输带速度的仪器如传感器和发送器必需周期性校验；内毒性挑战实验必需由实验室适宜的配制和测定。.为了确保灭菌设备的人工控制，必需适当的设计设备，留意诸如灭菌介质可达性能、管道坡度、冷凝水完全排除等性能。设备控制系统必需确保经过哪些安装在可以快速

42、反映工艺变化位置的丈量仪器来实现。哪些灭菌器或SIP操作中需求人工手动控制的阀门操作，都必需在制造规程和批记录中记录下来。灭菌设备都必需进展适宜的维护以确保其延续和称心的功能。灭菌器性能特性的日常评诂如平衡时间对于确保灭菌单元一直按照验证条件进展延续的运转是非常重要的。.八、实验室控制8.1环境监控8.1.1普通的书面程序无菌工艺中环境监控程序是非常重要的实验室控制之一。此程序不但为无菌工艺环境质量提供了有意义的信息，还为相邻的干净区域提供了环境变化的趋势数据。环境监控必需可以及时确实认潜在的污染源，允许在产品被污染前实施整改措施。干净室内空气和外表质量的评诂必需从书面定义好的规程和科学的测试

43、方法开场。监控程序必需涵盖一切的消费班次，包括空气、地板、墙壁和设备外表及那此能够接触无菌物料、容器和密封件的关键外表。取样点位置必需以书面程序阐明，取样时间、频率和位置都必需在无菌工艺设备的监控环境内用科学合理的方法进展。取样量大小必需足以使环境污染的监测最优化，以满足其符合规定的干净级别。.书面程序中阐明微生物最大风险的位置非常重要。监控关键区域的微生物质量来决议灌装和封口操作中能否坚持了无菌形状是尤为重要的。可以在重要的操作活动或是消费中产品暴露位置进展空气和外表取样。与无菌产品接触的关键外表必需在操作过程中一直坚持无菌。当设定关键取样点时，必需思索这些点在工艺中的污染风险，包括配备困难

44、、工艺操作继续时间、中断影响等要素。关键外表的取样操作必需按照无菌工艺运转的要求来防止直接接触无菌的外表。关键区域检出微生物污染的结果不一定要成批拒收，必需立刻对操作运转信息和数据进展调查，必需留意有能够存在的极低概率的假阳性情况发生。环境监控检测方法不能够不断有效的检测出取样区域的微生物，特别是那些低程度污染很难监测到的区域。由于假阴性能够发生，延续的微生物生长检测结果只是一种不利趋势。在给定时间内，污染发生率的添加是一样或是更加值得关注的趋势。在短少任何不利趋势的信息前提下，单一超出行动限的情况都必需进展调查和评诂，并决议能否需求采取任何适宜的补救措施。在一切的干净级别中，都必需在发生不良

45、趋势时采取适当的补救措施。.一切环境监控点的位置都必需在SOPs中详细描画，以确保可以在一样的地点反复操作。书面规程必需涵盖以下信息：取样频率；取样时间如运转到什么阶段进展取样；取样过程所用的时间；取样量如外表积、空气体积；特殊的取样设备和技术；警告限和行动限；超出警告限和行动限后的适宜反响；8.1.2建立监控规范和趋势分析程序微生物取样规范必需根据取样点位置和操作的相关性来确定，这个规范必需可以确保整个无菌制造设备内的微生物受控。可以参考历史数据库、培育基灌装实验、干净区确认和清洁卫生处置研讨的数据来建立这个规范。可以运用相类似的运转数据来设定警告限和行动限，尤其对那些新的运转操作非常适用。

46、.环境监控的数据必需为制造环境的质量提供信息。每个单独的测试样品结果都必需与警告限或行动限进展比较，分析其有效性。运用检测结果的平均值会掩盖不可以接受的位置的情况。到达警告限的数据必需立刻采取行动，到达行动限的结果必需立刻采取调查。必需建立书面的程序，详细描画审核的频率和采取的行动。质量控制部门必需对环境和人员监控数据进展日常短期监视如每天、每周、每月、每季和长期趋势分析。趋势分析报告必需包括每个地点、每个班次、每个房间、每个操作人员和其他参数产生的数据。质量控制部门必需担任对任何超标进展调查并编写相关的数据报告如一年内指定的微生物调查研讨并确定后续适宜的整改措施。微生物种类的明显变化必需思索

47、进展环境监控数据的重新审核。书面操作程序必需定义进展周期通行监控结果、趋势分析和调查结果给最高担任经理的程序系统。.8.1.3消毒效率消毒剂/消毒方法的顺应性、有效性和局限性都必需评诂。这些消毒剂/消毒方法的有效性必需根据其确保潜在污染可以彻底从外表去除的才干大小来测定。为了防止引入新的污染消毒剂必需无菌，且存放在适当的无菌容器中并在书面程序预先规定的最长时间内运用。日常运用的消毒剂必需可以有效的抑制那些菌丛恢复的实验室内常态的微生物生长。许多常见的消毒剂对孢子无效如70%的异丙醇对芽孢杆菌Bacillus upp的芽孢无效。所以有效的消毒程序必需包括一个能杀孢子的物质，当发现环境中存在孢子有

48、机体时，必需按照书面规程的方法消毒。消毒操作程序必需详细描画如配制方法、运用频率和接触时间以确保可以反复。一旦建立了方法，必需运用日常监控程序来评诂其有效性和充分性。一旦发现微生物相关的不良趋势，必需调查确认干净室内分别到的微生物对干净室内运用的消毒剂的敏感性。.8.1.4监控方法可接受的监控微生物学特性的环境包括：A、外表监控环境监控涉及不同外表的微生物质量取样测试，如产品接触的外表、地板、墙壁和设备外表都必需测试。可以运用接受皿和擦拭法来进展这类实验。B、自动空气监控对空气的微生物质量进展评诂能够涉及运用活动的设备，包括但不限于如紧缩机、离心机和膜或明胶取样器。每种设备都是测定一定体积内的

49、有机体数量，但是又都有优点和缺陷。FDA建议每消费班次都在选择的位置运用这些设备来评诂无菌工艺消费区域环境的好坏。制造商必需知道这些设备进展空气监控的才干，取样器必需在搜集效率、干净度、消毒难易及对单向空气的影响大小的根底上进展选择。由于设备各不一样，故运用者必需在其正式运用前进展全面的适用性检测。制造商必需这些设备被校验且正确运用。.C、被动空气检测沉降菌检测本方法运用的是被动的空气取样器，如沉降皿将含有营养培育基的培育皿敞开放置在环境中。由于可以监测到那些降落在培育皿上的微生物，所以沉降菌检测方法可以被作为定性或是半定量的空气监控方法。关键区域的沉降菌数据会由于将培育皿放置在高污染风险的地

50、方而提高。做为方法验证的一部分，质量控制实验室必需评诂培育基在什么情况下可以有效的获得低级别的环境微生物。暴露的环境必需预先防止漫枯燥作用如漫长的取样时间或高的气流速度而妨碍微生物的生长。被动空气取样的数据可以和其他取样方法获得的数据一同来评诂。.8.2微生物培育基及微生物鉴别检测出来的微生物特性提供了环境监控程序的关键信息。环境中分别获得的微生物普通和培育基灌装实验或产品无菌测试发生的污染物以及环境监控的全面信息为调查提供了非常有价值的信息。关键区域及其直接接触区域人员的监控必需包括微生物种类的常规鉴别。普通情况下，环境趋势的数据可以提示出非受控或低级别受控区域的微生物污染了无菌工艺区域。为

51、低级别控制的干净区域，如10万级ISO8区域，设立足够的规程就可以检测出这样的趋势能否存在了。至少必需有规程来鉴别辅助区域环境内周期性检测发现的微生物种类，从而建立一个有效的数据库来反映消费中能够存在的微生物数据库，并证明清洗和消毒操作的继续有效性。.知的基因鉴别方法比传统的生物化学和形状学技术更加准确和真实的鉴别微生物的种类。这些方法在失败调查如无菌测试/灌装研讨污染中有特别的价值。然而，适宜的生物化学和形状学技术可以用于日常微生物的鉴别。微生物监控的目的是为了反复监测微生物，以监控环境控制形状。稳定的方法可以产生一个数据库，可以使数据比较和解释更加合理。用于环境监控的微生物培育基必需验证在

52、一定的温度和时间下，适宜于检测真菌如酵母菌和霉菌和细菌。总菌数的测试条件是30 35培育4872小时，总霉菌普通在20 25培育57天。外购的环境监控培育基必需测试证明其可以用于培育微生物。促生长实验必需每个配制批号都要进展。在特定情况下必需运用去活剂来防止干净室内消毒剂或产品如青霉素类残留的影响。.8.3过滤前生物载量必需设计消费工艺控制步骤来尽能够的降低为过滤产品的生物载量。除了会添加对无菌过滤器的挑战，生物载量还会产生杂质如细菌内毒素，导致产品降解。因此必需建立过滤前的生物载量限制。8.4微生物检测潜代方法在证明其和传统方法如USP方法等效或是更好的前提下，可以在环境监控、中控控制测试和

53、废品放行测试中运用其他适宜的微生物测试方法。8.5颗粒度监控日常的颗粒度监控对于快速检测到空气干净度的明显变化非常有用。对于任何位置的超标情况必需进展调查，找出根源。调查范围必需涵盖偏离的严重程度以及对趋势数据的评诂。假设需求必需执行适宜的整改措施来防止未来发生类似的偏向。.九、无菌测试无菌测试的某些方面特别重要，如测试环境的控制、测试方法局限性的认知和阳性结果发生后的消费系统调查。测试的实验室条件必需与无菌灌装操作的设备和控制相一致，不好或是有缺陷的无菌测试设备会导致测试失败。假设消费设备和控制程度明显好于无菌测试的设备和条件，那么无菌测试的假阳性结果会干扰对于实践无菌产品的判别。这样的消费

54、缺陷能够不会被发现。运用无菌隔离箱可以最大程度的降低假阳性结果的发生。9.1微生物实验室控制根据CFR211.194和211.165章节的要求，无菌测试方法必需真实且可反复，USP71 无菌测试是最主要的无菌实验指点原那么，涵盖了测试方法和相关的培育基信息。作为方法验证的一部分，微生物挑战实验将证明方法的可反复性和可靠性。假设微生物生长被抑制，测试方法必需进展变卦如添加稀释度和膜过滤的洗涤次数及去活剂来优化回收率。最终方法验证研讨证明该方法不会提供假阴性的测试结果。.进展无菌测试的培育基必需无菌且经过了促生长实验。操作人员必需进展培训且资历合格，必需有书面的规程来维持人员的再培训，确保其操作符

55、合无菌测试的要求。9.2取样和培育无菌测试遭到其检测污染才干的限制，由于普通检测样品都比较少，如按照USP的描画，统计学评诂阐明无菌测试的取样方案“也只能在10次测试中，9次监测到的污染率高达10%的批号，进一步的解释为：假设批量为10000单元的消费中有0.1%的污染，那么运用20个单元进展无菌测试时有98%概率的该批号会经过无菌测试。样品可以代表整个批号和工艺条件是非常重要的，必需在以下情况下取样：在无菌工艺操作的开场、中间和最后取样；结合工艺中断和干扰情况来思索取样。由于测试方法灵敏度的限制，任何阳性结果都会被以为是最严重的cGMP问题，都必需进展彻底的调查。.9.3阳性结果的调查在无菌

56、测试中必需小心防止任何能够污染样品的行为。一旦发现微生物生长，该批产品就被判别非无菌，必需进展调查。只需可以呵斥微生物生长的明确缘由被找出，方可以为最初的阳性测试结果无效。只需确定且书面记载的证据清楚的证明污染发生在测试过程中，方可以进展新的测试。假设已有证据不明确，产品也必需按照不符合无菌需求的产品那样回绝收货并报废。在综合思索一切与产品制造和样品测试相关的要素后，必需汇总成为书面的调查报告，涵盖确切的结论和整改措施。必需给予以下有压服力的证据进展调查：A、阳性菌的鉴别无菌测试中分别的微生物必需进展种一级别的鉴别。必需审核微生物监控数据来判别该微生物能否在实验室、消费环境、人员或产品生物载量

57、中发现过。先进的鉴别方法如基于核酸的方法对于调查非常有价值。假设比较环境监测和无菌测试结果，必需是运用的一样方法获得的鉴别结果。.B、实验室测试和偏向记录实验室偏向的审核和调查的发现可以协助证明实验室能否为污染源的结论。例如，假设是实验室环境中很少发现的微生物，那么消费环境中被污染的能够性就很大；假设该微生物在实验室和消费环境中都存在，最少也可以阐明产品确实被污染了。适宜的处置偏向是实验室控制的重要环节。当无菌测试过程中发生偏向的时候，必需记录、调查和补救。假设任何的偏向被以为无菌测试的完好性有危害，必需立刻终止实验。无菌测试的阳性结果可以作为消费和实验室问题的表征，必需仔细的调查整个消费制造

58、工艺，由于这样的问题往往延申影响到不止一个批号。为了更加准确的监控潜在的污染源，建议分类汇总监控数据的趋势，包括产品、容器类别、灌装消费线、取样操作和测试人员等等。在终端灭菌产品和无菌工艺产品采用相类似的无菌操作的情况下，假设后者的无菌测试失败率高，将是无菌工艺存在问题的表征。.实验室无菌区域和人员的微生物监控也可以提供有意义的趋势信息。实验室无菌区域的微生物的上升趋势必需立刻调查其缘由，并整改。在一些情况下，这样的趋势证明实验室缺陷能够是导致无菌测试失败的缘由。假照实验室保管了这类的缺陷记录，这样的历史数据可以降低对实验室的疑心，消费阶段被污染的能够性会更大一些，反之确不一定正确。当实验室没

59、有很好的记录情况下，厂家不能自然而然的以为实验室缺陷对无菌测试失败奉献大于消费缺陷。因此一切的无菌测试阳性结果都必需彻底的调查是非常重要的。C、人员监控人员每天监控数据的审核和趋势分析可以为指明污染源提供非常有用的信息。人员操作的适宜性和培训都值得重点审核和思索。D、产品的生物载量FDA建议审核产品生物载量的变化趋势，并思索能否发生了生物载量的不良趋势。.E、消费记录的审核必需审核完好的批消费记录和批控制记录来确认能否存在严重的失误或是异常景象影响到产品的无菌度。如调查必需包括的要素是：可以影响到关键区域的事件；消费数据或是趋势数据显示工具和支持系统能否正常运作，例如，灌装消费线的空气质量的监

60、控记录可以阐明什么时候存在不适宜的空气平衡或是不正常的颗粒度；建造或者维护活动能否存在不良影响。F、消费历史的调查该产品或是类似产品的制造历史也必需作为调查的一部分进展审核。以往的偏向、问题或是变卦如工艺、成分、设备的变卦都在思索的要素之内，都有能够是问题的根源所在。.十、批记录的审核制造商必需在他们的无菌工艺运转时建立工艺和环境监控活动，这些监控活动每天维护和执行至关重要。一切消费记录及数据和书面规程、运转参数、产品规格规范的一致性必需在无菌工艺产品最后放行前审核，这样的要求被称为工艺和制造周期内系统性能的全审核。一切的中控实验结果都必需根据211.188的要求涵盖在批记录文件中。环境和人员