双黄连注射剂的工艺与质量标准研究

1、双黄连注射剂的工艺与质量规范研讨 张清波黑龙江省药品检验所 二九年八月十二日 .主要内容一、双黄连注射剂系列的种类概略二、双黄连注射剂系列的研讨概略三、双黄连注射剂系列的指纹图谱研讨四、双黄连注射剂系列的质量研讨五、存在的主要问题.FLOS LONICERAE RADIX SCUTELLARIAEFRUCTUS FORSYTHIAE 黄芩金银花连翘一、双黄连注射剂系列的种类概略功能与主治: 清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。 收载规范： 成方制剂十一册、中国药典2005年版一部.一、双黄连注射剂系列的种类概略1、

2、消费企业：黑龙江省消费双黄连注射剂企业共有11家股份制企业5家、民营企业5家、私营企业1家，从业员工1.1万人。这些企业分别建厂于1950年至2001年。有20余年消费双黄连注射剂的历史，企业固定资产净值25亿元，年消费才干11.83亿支。2、剂型及规格：现有注射液、粉针剂、冻干粉针剂、滴注剂四个剂型；有20ml、300ml、500ml、0.6g、1.2g。3、消费量：现11家从2000年到2021年底共消费双黄连注射剂2万余批次、27亿支；2004年至2021年消费1.49万批次、20.53亿支。近三年来实现产值13.4亿元、利税2.1亿元，单种类产值占全行业总产值的12.96%。4、销售范

3、围：目前这些企业的种类销往全国各地，分布最广的企业除台湾、香港、西藏外，各省市、自治区、直辖市均有销售和运用。.二、双黄连注射剂系列的研讨概略 第一阶段: 2002年2004年1、对8家消费企业的近100批产品进展了初步质量分析；2、进展企业工艺调研与实验室模拟工艺的研讨；3、与消费企业沟通，明确消费工艺应严厉按照部颁规范执行4、药材样本的采集：共实地采集了不同产地的70多批药材；5、调查不同采收季节、不同来源，不同产地的药材对指纹图谱的影响；6、采用色谱指纹图谱技术，对双黄连注射剂指纹图谱的整个获取过程进展了方法学验证并测定了一致工艺道路后的样品7、调查了药材、中间体与废品指纹图谱的相关性；

4、8、添加了废品中绿原酸、连翘苷的含量测定规范。.二、双黄连注射剂系列的研讨概略 第二阶段2006年2021年：1、根据样品的实测情况对双黄连注射液、注射用双黄连的指纹图谱的评价规范进展了改良；2、添加了异常毒性、降压物质、过敏实验平安性检测规范。3、注射用双黄连指纹图谱已收载于中国药典2005年版一部增补本。.药厂实地调研，调查 药材样品的采集废品样品的搜集 实验室模拟工艺小样 一致消费工艺 中期会的召开方法学验证 双黄连注射剂系列指纹图谱的建立 中间体指纹谱的研讨 相关性调查 前期预备任务文献检索研讨方案的制定会议召开三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨市场上近100批废品的摸底药材指纹图谱的研讨

5、双黄连注射剂系列质量规范的提高 指纹图谱条件确实立技术报告的构成征求反响意见消费工艺的追踪工艺参数变动的影响. 一致工艺前八个不同厂家的双黄连注射液指纹图谱的比较 从这八个厂家的样品色谱图可以看出，无论从色谱峰的个数上，还是各峰面积的大小和相对比例，不同厂家的产质量量不尽一样，尤其是保管时间在1020分钟的色谱峰个数、510分钟的色谱峰面积，厂家之间差别很大。.金银花与连翘分别煎煮提取与混合煎煮提取对指纹图谱的影响 金银花、连翘混提与单提，特征色谱峰之间差别较大，表如今5、6、7号色谱峰在单提液中缺失或减弱。除1、3号色谱峰相对稳定外，大多特征峰的相对峰面积比值发生变化，混提比单提有增高的趋势

6、，阐明混提添加了某些成分的溶出量。实验室模拟小样金银花与连翘分别煎煮提取金银花与连翘混合煎煮提取.金银花、连翘提取不同的煎煮时间对指纹图谱的影响 峰号保留时间相对峰面积RSD（%）煎煮2小时/次煎煮1小时/次15.979 0.211 0.280 4.859 29.262 1.000 1.000 0.000 310.279 0.276 0.353 5.484 411.287 0.034 0.038 0.275 515.096 0.050 0.048 0.127 615.525 0.040 0.042 0.152 715.896 0.083 0.077 0.446 820.150 0.256 0.

7、199 4.019 921.216 0.443 0.496 3.733 1022.171 0.060 0.058 0.148 1126.066 0.504 0.551 3.317 对金银花、连翘提取的煎煮时间分别进展每次煎煮1小时和每次煎煮2小时的调查，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化不大。. 金银花、连翘提取各步骤对指纹图谱的影响 峰号保留时间醇沉纯化稀配RSD(%)15.983 0.280 0.150 0.055 11.295 29.236 1.000 1.000 1.000 0.000 310.267 0.353 0.196 0.114 12.184 411.330

8、0.038 0.021 0.020 0.989 515.114 0.048 0.037 0.035 0.689 615.544 0.042 0.032 0.031 0.624 715.925 0.077 0.041 0.035 2.286 820.164 0.199 0.103 0.136 4.846 921.183 0.496 0.324 0.334 9.649 1022.197 0.058 0.042 0.036 1.140 1126.061 0.551 0.332 0.282 14.292 重点调查醇沉、纯化、稀配这三步留样。HPLC分析结果显示，特征色谱峰的峰数与峰位无大的区别，即成分

9、未有变化，但来自金银花药材的2号特征峰绿原酸及1、3、9、11号特征峰的峰面积随着一步步消费而降低，其它特征峰相比受影响较小。醇沉纯化稀配.金银花、连翘提取不同醇沉温度对指纹图谱的影响 峰号保留时间相对峰面积RSD（%）20OC醇沉40OC醇沉60OC醇沉15.986 0.136 0.082 0.081 3.132 29.200 1.000 1.000 1.000 0.000 310.267 0.164 0.167 0.163 0.190 411.280 0.025 0.026 0.026 0.019 515.083 0.049 0.066 0.047 1.056 615.517 0.042

10、0.044 0.042 0.070 715.892 0.061 0.063 0.060 0.126 820.130 0.256 0.265 0.253 0.607 921.164 0.450 0.468 0.446 1.138 1022.166 0.055 0.056 0.054 0.081 1126.055 0.397 0.407 0.393 0.742 40CO20CO60CO 对金银花、连翘提取进展20C、40C、60C不同醇沉温度的调查，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化较小RSD小于3%.金银花、连翘提取中冷藏放置与冷冻放置对指纹图谱的影响 峰号保留时间相对峰面积R

11、SD（%）冷藏冷冻15.983 0.272 0.280 0.576 29.271 1.000 1.000 0.000 310.275 0.334 0.353 1.352 411.296 0.159 0.038 8.575 515.100 0.047 0.048 0.080 615.529 0.043 0.042 0.053 715.904 0.081 0.077 0.274 820.154 0.217 0.199 1.293 921.208 0.488 0.496 0.572 1022.171 0.072 0.058 0.983 1126.066 0.563 0.551 0.848 对金银花、

12、连翘药材水煎、浓缩后进展冷藏放置与冷冻放置对比调查，结果除4号特征峰差别较大外冷藏的峰面积增值较大，其它均相差无几。.以上研讨结果阐明：1、金银花、连翘药材的合煎与分煎对某些成分的溶出有较大的影响；2、消费工艺各步骤的一致性也是获得稳定的双黄连注射液指纹图谱的关键要素；3、在一定范围内，不同的煎煮时间、不同的醇沉温度对双黄连注射液指纹图谱的影响不大。三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨.双黄连注射剂药材指纹图谱的研讨连翘药材【中国药典】连翘为木犀科Oleaceae连翘属植物连翘Forsythia suspensaThunb.Vahl. 的枯燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习

13、称“青翘；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘。.22批连翘药材的质量情况来源水分（%）连翘苷含量（%）三精6.9 0.134 晨星6.0 0.295 乌苏里江7.3 0.252 福和华星6.1 0.183 齐齐哈尔7.0 0.088 哈中药二厂6.4 0.115 浙江药检所提供（山东产）6.1 0.126 河南淅川5.3 0.152 三精河北安国（2003年10月上旬）6.4 0.200 三精山西降县（2003年1011月）7.1 0.068 山西（青翘）12.1 0.612 山西6.9 0.111 山西陵川（老翘）6.6 0.098 栾川县（伏牛山北）（2003年11月）7.1 0.

14、083 栾川县（伏牛山北）（青翘2003年910月）6.6 0.079 辉县南塞镇（太行山02年老翘）7.7 0.047 辉县南塞镇（青翘水煮后晒干）5.3 0.206 辉县南塞镇（太行山03年老翘）7.6 0.312 陕西商洛市山阳县玉竹乡7.2 0.091 陕西临汾（青翘）6.5 0.122 商洛市商州县（2003年）7.0 0.043 .编号保留时间山西陕西栾川辉南陵川812.74144.809254.42321.266115.767136.2261013.663160.6315.233395.051110.449214.5821214.5621385.105170.253135.429

15、248.32470.0872021.346888.85232.18599.311824.281273.4932424.43514758.922557.8072055.913498.953993.9252625.76385.36559.82653.66944.99553.7362726.814616.897199.472263.935241.897317.0283637.035379.5276.96655.552230.448261.9013737.924962.039158.784100.574394.731207.0874440.924125.83273.951172.306104.6062

16、36.1944842.587264.63489.187159.407268.868474.2765244.23123.37159.18163.377218.658196.2245646.695414.1669.53982.698134.358177.1015949.95262.156150.72761.458145.694568.693不同产地青翘指纹图谱.编号保留时间山西栾川辉南02辉南03陵川112.746244.096105.838148.517402.338292.936213.673333.769131.911174.775478.842359.515314.56969.824110

17、.50642.545173.50191.267421.359173.135449.678398.463953.514421.195524.4821218.2141574.895741.3191671.2941519.973626.848161.595136.62656.855181.487168.898727.351102.1432.99759.298164.022150.951837.037216.25876.14348.68193.45103.987937.927228.20291.31248.804317.689201.4771040.903118.25768.01588.394197.

18、192131.6021142.573274.572237.432164.058221.832458.2151249.951223.584106.84145.13684.168114.063不同产地老翘指纹图谱. 有3对一样产地的青老翘，分别是山西、栾川、陵川，把它们的图谱进展比较发现：1、山西青老翘在色谱峰的保管时间和峰数上较为一致，只是峰面积有所增减，如老翘中10.919、12.737、13.662的峰面积稍有添加，而14.562、18.850、21.323、46.666和37.902连翘苷的峰面积明显减少；2、栾川青老翘在色谱峰的保管时间和峰数上也较为一致，老翘色谱峰除了12.737、13

19、.662峰面积减少外，其它色谱峰无明显变化；3、陵川老翘那么在10.919、49.944峰面积明显减少，其它峰面积无明显变化。 总之，一样产地的老翘大部分色谱峰峰面积均比青翘减少。一样产地青、老翘指纹图谱.双黄连注射剂药材指纹图谱研讨黄芩药材【中国药典】黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的枯燥根，春秋二季采挖，除去须根和泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。 药材样品的搜集.黄芩药材的匹配结果.双黄连注射剂药材指纹图谱研讨金银花药材【中国药典】本品为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca

20、Miq.、山银花Lonicera confusa DC或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的枯燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收，枯燥。金银花质量情况.金银花同山银花比较. 7批金银花药材的图谱比较 忍冬与红腺忍冬的区别.1、不同种类的药材得到的指纹图谱不同；2、不同产地的药材得到的指纹图谱不同；3、不同采收季节的药材得到的指纹图谱不同4、要获得到稳定、均一的废品指纹图谱，固定药材的种类、产地、采收季节是不可忽略的要素之一。双黄连注射剂药材指纹图谱研讨.金银花中间体在金银花药材中的追踪三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨金银花中间体金银花药材.连翘提取物三、双黄连注射剂的指

21、纹图谱研讨连翘中间体在连翘药材中的追踪连翘药材.5批黄芩提取物匹配结果 三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨黄芩中间体在黄芩药材中的追踪.三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨1、 中间体的各特征峰均可在药材指纹图谱中得到追踪；2、药材经过适当的方法提取纯化后的HPLC谱图中的色谱峰比中间体的多；3、中间体色谱图与相对应的药材色谱图在对应峰的量上有所变化。4、建立的指纹图谱可以很好地控制药材、中间体乃至废品的质量。.样品的测定10个厂家21批样品6个厂家18批样品.从整个色谱峰面积看：1、各厂家的黄芩苷的投料比较稳定10号峰的峰面积RSD值最小；2、属于连翘的5、6号色谱峰和属于金银花及连翘的7号峰，属于黄

22、芩及连翘的8号峰的峰面积虽然不大，也相对比较稳定；3、属于金银花的1-4号和9号峰变化较大； 结果阐明，确保不同厂家消费出一样质量产品的关键是1-4号和9号这5个色谱峰的峰面积的相对稳定，即金银花的质量和消费工艺的同一性。三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨.三、双黄连注射剂的指纹图谱研讨21批双黄连注射液指纹图谱类似度 输出黄芩苷信号未输出黄芩苷信号.11批双黄连注射液指纹图谱类似度未输出黄芩苷信号 双黄连注射液对照指纹图谱未输出黄芩苷信号 .双黄连注射液药材与废品、中间体的相关性 .色谱峰描画 共有10个特征峰，分为两部分，保管时间在15分钟以前的是14号峰，不应有多峰景象，其中2号峰为绿原酸，其分别度高，峰面积积分值适中，作为参照峰S；13号峰来自金银花药材；4号峰为连翘药材中含有的成分，同时也是工艺过程中转化的产物。保管时间在15分钟以后的是510号峰，其中5、6号峰为连翘药材的特征峰，7号峰为连翘和金银花药材所共有，8号峰为连翘和黄芩药材所共有， 9号峰为金银花药材