巫山淫羊藿在不同生长季节中两种黄酮类成分的反相高效液相色谱分

1、巫山淫羊藿在不同生长季节中两种黄酮类成分的反相高效液相色谱分【关键词】巫山淫羊藿；,黄酮类成分；,柔藿苷；,淫羊藿苷；,生长季节；,高效液相色谱法,摘要：目的对?中国药典?淫羊藿药材的收载品种巫山淫羊藿中2种黄酮类成分柔藿苷ruhuside和淫羊藿苷iariin进展测定，比拟这两种成分在不同月份的含量变化。方法采用反相高效液相色谱RPHPL法，以bekanulterT18柱带预柱为色谱柱，流动相为乙腈水2575，流速1.0lin1，检测波长为270n。结果柔藿苷在0.196421.9642g范围内呈良好的线性关系，淫羊藿苷在0.193351.9335g范围内呈良好的线性关系。巫山淫羊藿中淫羊藿

2、苷除5月份外，其余月份的含量都低于0.5，而柔藿苷的含量平均在1.710。结论巫山淫羊藿在其生长的任何月份都是柔藿苷含量远大于淫羊藿苷含量，柔藿苷是巫山淫羊藿中的主要成分。关键词：巫山淫羊藿；黄酮类成分；柔藿苷；淫羊藿苷；生长季节；高效液相色谱法Deterinatinf2FlavnidsinEpiediuushanenseinDifferentGringSeasnsbyHPL)Abstrat：bjetiveTdeterinethententfruhusideandiariininEpiediuushanense，andparethententvarietyfthese2pundsindiffe

3、rentgringseasns.ethdsSapleseredealtithbyHPLithbekanulterT18analytiallun.Thebilephaseasnsistedfaetnitrile-ater(25:75).Theflrateas1.0lin1.TheUVdetetinassetat270n.ResultsThelinearrespnserangefr0.196421.9642gfruhuside(r=0.99912,n=10);0.193351.9335gfiariin(r=0.99900,n=10).InthehlegringseasnsfEpiediuushan

4、ense,thententfiariinislessthan0.5%exeptfrinay,hilethententfruhusideisrethan1.710%.nlusinAsfarasruhusideandiariintbenerned,thententfruhusideisuhhigherthanthatfiariinineahnthfthegringseasnsfEpiediuushanense,andruhusideistheainpnentinEpiediuushanense.Keyrds：Epiediuushanense;Flavnids;Ruhuside;Iariin;Gri

5、ngseasns;HPL巫山淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物EpiediuushanenseT.S.Ying的地上局部，是1995年版?中国药典?增收的淫羊藿品种，功能补肾壮阳，强筋骨，祛风湿，用于治疗阳痿遗精、风湿痹痛等症。巫山淫羊藿中淫羊藿苷iariin及总黄酮类成分的含量测定，文献多有报道，但有关柔藿苷尤其是柔藿苷ruhuside与淫羊藿苷在不同月份的含量比拟尚未见报道。本文对这二种黄酮类成分进展了系统的研究。现将结果报道如下。1仪器与材料1.1仪器美国BEKAN公司高效液相色谱仪，包括125型泵，168型PDA检测器，32Karat色谱工作站；HAILTN微量进样器HAILTN公司；微孔滤膜

6、13，4.5天津市色谱科学技术公司；YQ300型超声波清洗器上海凯波超声设备。1.2对照品柔藿苷和淫羊藿苷对照品均为作者从巫山淫羊藿中提取别离，并经光谱分析鉴定，HPL面积归一化法显示其纯度分别为98.92%，99.07%。1.3药材样品由陕西省安康地区药品检验所中药室鉴定并提供。1.4试剂所用试剂均为分析纯。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱：BEKANULTERT18柱54.5250，预柱4.645；流动相：乙腈水2575；柱温：室温；检测波长：270n；流速：1.0lin1；进样量：20l。2.2色谱系统适用性实验理论塔板数以柔藿苷计为3567，以淫羊藿苷计为3708；柔藿苷tR=21.1

7、3in；淫羊藿苷tR=24.767in；柔藿苷和淫羊藿苷的别离度为2.188。2.3检测波长的选择柔藿苷和淫羊藿苷构造相似，在流动相中用二极管阵列检测器测得紫外光谱最大吸收均在270n处，见图1。应选择270n为吸收波长。2.4流动相的选择比拟了4种溶剂系统：甲醇水；甲醇水冰醋酸；乙腈水；乙腈水36醋酸。结果只有乙腈水2575别离效果最为理想且峰形较好，应选择乙腈水2575为流动相。色谱图见图23。1.柔藿苷光谱图2.淫羊藿苷光谱图图1柔藿苷和淫羊藿苷的紫外光谱图略图2对照品的HPL图谱略图3样品5的HPL图谱略2.5线性关系考察精细称取柔藿苷对照品9.82g，淫羊藿苷对照品9.67g，分别用

8、甲醇溶解并定容于20l量瓶中，各取0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0l于5l量瓶中混合定容，取20l混合液进样。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得其回归方程。柔藿苷：Y4.623105-9.736102X，r=0.99912；淫羊藿苷：Y7.161105-8.784103X，r=0.99900。说明柔藿苷在0.196421.9642g,淫羊藿苷在0.193351.9335g与峰面积呈良好线性关系。转贴于论文联盟.ll.2.6重现性实验取同一样品溶液1份，连续进样6次，20l/次，分别测定其吸收峰面积。结果柔藿苷峰面积RSD2.8

9、3n=6，淫羊藿苷峰面积RSD4.17n=6。2.7精细度实验取线性范围内的同一对照品溶液，每隔1h进样20l，测定5次/d，连续测定3d，记录峰面积，考察日内、日间精细度，测定结果柔藿苷、淫羊藿苷的日内精细度s(n=5)分别为：5.3071055.978103,RSD=1.126%；8.2651052.113104，RSD=2.557%；柔藿苷、淫羊藿苷的日间精细度sn=3分别为：5.0721052.091104,RSD=4.123%；8.2421052.061104，RSD=2.500%。2.8加样回收率实验在巫山淫羊藿的生药中定量参加对照品溶液，自然挥干后，按上述供试品溶液制备样品溶液，

10、分别测得柔藿苷、淫羊藿苷回收率。结果见表1。表1加样回收率实验结果略2.9供试品溶液的制备及测定精细称取样品粉末约0.13g，经60枯燥3h，过40目筛，置于50l具塞三角瓶中，参加30l70%乙醇，称重，超声提取1h，称重并补足减失重量，过滤，弃去初滤液，取续滤液用微孔滤膜4.5过滤，作为供试品溶液，汲取20l注入高效液相色谱仪。测定结果见表2。以柔藿苷和淫羊藿苷各自的含量对月份作图。见图4。图4柔藿苷和淫羊藿苷的含量图略表2巫山淫羊藿叶在不同生长季节的柔藿苷和淫羊藿苷含量测定结果略3讨论本文采用RPHPL技术对巫山淫羊藿一年内每一月份的柔藿苷和淫羊藿苷的含量进展了比拟研究，结果说明在其生长

11、期内始终是柔藿苷含量远高于淫羊藿苷，平均为淫羊藿苷的4.65倍。从图4可见，巫山淫羊藿中柔藿苷以8月和9月份采收含量最高，淫羊藿苷以5月份采收含量最高，二者不具相关性。本实验中曾试用了多种溶剂系统作为流动相，包括2000版药典淫羊藿苷含量测定项中规定的乙腈水3070。发如今以乙腈水3070为流动相时，淫羊藿苷与其邻近峰的别离度较好，可以完全分开，但是柔藿苷却很难与其后面紧跟的位于淫羊藿苷之前的峰分开。假如以乙腈水2575为流动相时，不仅淫羊藿苷与其邻近峰的别离度较好，可以完全分开，并且柔藿苷也可以与其后面紧跟的位于淫羊藿苷之前的峰很好地分开，见图5。因此实验中选择以乙腈水2575为流动相。图5选择流动相略?中国药典?2000版规定淫羊藿中淫羊藿苷的含量不得低于0.500。本文测得巫山淫羊藿中淫羊藿苷除5月份外，其余月份的含量都低于0.5，而柔藿苷的含量平均在1.710，另外，RPH