同济医院检验科ISO15189体系文件05人类免疫缺陷病毒抗体

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ205第2版标题：人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)测定第2章 第05号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页 目的：检测血清标本中的抗HIV抗体。 适用范围：同济医院检验科HIV实验室。 项目名称：HIV抗体测定。 检测方法：双抗原夹心酶联免疫法。 检测原理：本试剂盒采用HIV特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、 gp41标记辣根过氧化物酶，采用双抗原夹心法捕获人血清、血浆标本的HIV(1+2)抗体。适用于献血员及高危人群中人类免疫缺陷病毒抗体的筛查。 试剂：6.1 品牌：上海科华。6.

2、2 包装规格：96人份。6.3 内含物：6.3.1 反应板（已包被HIV抗原）：8孔/条12；6.3.2 酶结合物：12ml/瓶；6.3.3 抗HIV阳性对照：1ml/瓶；6.3.4 抗HIV阴性对照：1ml/瓶； 6.3.5洗涤液(1:25稀释)：80ml/瓶；6.3.6 底物缓冲液：8ml/瓶；6.3.7 TMB：8ml/瓶；6.3.8 终止液：7ml/瓶；6.3.9粘纸胶；若干；6.3.10 说明书：1份；6.3.11 自封袋：一个。7 仪器品牌、型号：ELX800酶标仪，测定波长为450nm,参考波长630nm；洗板机、加样器、温育箱；Alisei 全自动酶免分析仪。8 操作步骤：8.

3、1 打印工作单：8.1.1 打开电脑及打印机电源,8.1.2 双击齐效检验系统,登入自己的工号与密码；8.1.3 双击报告处理,单击标本申请信息打开标本申请明细信息查询,打开左上角的所有信息,选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择HIV执行查询,点击打印申请单，打印出工作单。排列被检测标本：根据工作单上的库位号找出相应标本,并按工作单上的顺序排列。8.3 装载试剂：开启Alisei全自动酶免分析仪，根据待测标本数量，点击编辑工作列表，出现试剂及酶标板界面。按照屏幕所示放好洗板液，洗针液，标本试管，预稀释管和试剂。8.4 装载酶标板：点击Alisei全自动酶免分析仪界面的装卸反应板按钮

4、进行装载反应板，按项目顺序进行装载。等所有项目酶标板装载完成后，点击开始按钮，机器开始检测。 Alisei分析仪检测参数:试剂空 白阳性对照阴性对照标 本两 孔三孔两孔单 孔100ul/孔孵育37，60min洗涤洗涤液300ul/孔 5次酶结合物100ul/孔混匀，37，30min洗涤洗涤液300ul/孔 5次底物缓冲液50ul/孔TMB50ul/孔混匀，37，10min终止液50ul/孔 振荡混匀读数450/630nm读取OD值结果：8.4.1 阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD值0.8。8.4.3 CUTOFF值的计算：Cutoff值=阳性对照平均OD值10%(若阳性对照OD值2.5按2

5、.5计算)。8.4.4 结果判定：样品OD值Cutoff值者为HIV抗体反应阳性。样品OD值Cutoff值者为HIV抗体反应阴性。（初试阳性标本应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按“全国HIV检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证实验）。8.5 仪器自动记录OD值并可打印测定结果，同时传入LIS中，发送报告详见“HIV实验室实验结果分析报告程序”。9. 参考范围：正常人阴性。10. 临床意义：抗HIV是HIV的相应抗体，几乎所有个体在感染HIV后都能产生抗HIV，是HIV感染诊断及筛查的良好指标。11. 病人准备、标本要求：标本为血清时最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。12. 注意事项：12.1 开展本项检测的单位必须是当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。12.2 整个检测工作必须符合HIV实验室管理规范和生物安全防护的有关规定，严格防止交叉感染，操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。12.3 HIV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。所有样品、洗涤液和各种废物应按传染物处理，终止液为2M的硫酸，使用时必需注意安全。12.5标本和酶结合物均应使用加样器加样,并应按科室加样器校准要求定期校准。微孔板从冷藏环境取出时，应平衡至室温后方可使用，未用完的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。12.7粘纸胶不能反复使用。