7-尿液检验标准化进展

1、尿液检验标准化、质控进展现 状建 议曾真第一页，共五十二页。第一章干化学检测尿液有形成分第二页，共五十二页。优点：检测化学工程多、速度快；缺乏：检测特异性不好、检测工程名不副实；质控： 1、质控物为化学物质，不是真实形态学成分； 2、干扰因素多，无法预知和排除；许多有形成分不能检测；方法自身不能证实检测的真实性；不符合ISO15189；只能是过筛检测；现 状第三页，共五十二页。检测粒细胞的酯酶淋巴细胞、单核细胞等不能检测干扰物质众多： 庆大、先锋、甲醛、胆红质等例如白细胞蛋白检测白蛋白其他蛋白不能检测干扰因素众多：pH、药物等。红细胞检测血红蛋白、肌红蛋白干扰因素众多：维生素C、高蛋白、pH第

2、四页，共五十二页。弥补方法必须镜检： 1、镜检与化学检验的关系： 互补、验证 2、镜检干化学不能检测的有形成分；使用特异性检测方法检测化学成分；第五页，共五十二页。第二章尿液有形成分检测标准化第六页，共五十二页。尿液有形成分检验的现状第七页，共五十二页。尿液有形成分检测仪器分类单镜头单镜头第八页，共五十二页。显微镜离心镜检戴西斯仪器离心镜检流式、数字流式检测直接发报告流式、数字流式检测+手工显微镜镜检复核流式、数字流式检测+戴西斯仪器镜检复核流式、数字流式检测+干化学比照+镜检复核镜检自动化仪器检测镜检自动化仪器检测+镜检复核检验程序多样性第九页，共五十二页。ECLM - European U

3、rinalysis Guidelines2000NCCLS - Routine Urinalysis and Collection, Transportation, and Preservation of Urine Specimens; Approved Guideline 1995JCCLS - JCCLS Guideline GP1-P32000SCCLS - 尿沉渣检查标准化的建议(2002)ISLH - ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003)NCCLS -

4、尿液检验操作指南第三版(2022) 修改的 GP16-A3尿液检验的标准管理标准文件不离心离心方法第十页，共五十二页。尿液有形成分国际标准文件不离心方法 1、2003年 ISLH 尿液颗粒计数 Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003) 2、2009年NCCLS 尿液检验操作指南（第三版）离心方法 2002年以前标准文件第十一页，共五十二页。CLSI原NCCLS)尿液分析操作指南第三版GP16-A3(2022)第十二页，共五十二页。Number 4 GP16-A324 Clin

5、ical and Laboratory Standards Institute. All rights reserved.10.1.2 Urine Particle Analyzers64-68Automated urine analyzers use various technologies to classify and enumerate particles in urine.Depending on the instrument, the technologies incorporated can include impedance, digital imaging flow cyto

6、metry, flow cytometry, light scatter, dyes, fluorescence, or some combination thereof. Particles with like characteristics are then grouped and classified. The elements that are typically identified include RBC, WBC, epithelial cells (squamous and nonsquamous), casts (benign and pathologic), bacteri

7、a, sperm, mucus, crystals, and small round cells. Samples showing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer, are then reviewed microscopically by a technologist. Negative samples may obviate the need for manual microscopy.第十三页，共五十二页。国际标准GP16-A3 2022年给出的解决对策1、数字图像流式细胞仪、

8、流式细胞仪等 标本不论是实验室认为或仪器检测异常时（Samples showing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,）必须用人工镜检方法重新检测确认。2、阴性结果可以免除镜检确认。第十四页，共五十二页。流式图像流式人工镜检国际标准规定第十五页，共五十二页。国际标准的参考文献64 Delanghe J. New screening diagnostic techniques in urinalysis. Acta Clin Belg. 2007;62:155-161.65 Ottig

9、er C, Huber AR. Quantitative urine particle analysis: integrative approach for the optimal combination of automation with UF-100 and microscopic review with KOVA cell chamber. Clin Chem. 2003;49:617-623.66 Delanghe JR, Kouri TT, Huber AR, et al. The role of automated urine particle flow cytometry in

10、 clinical practice. Clin Chim Acta.2000;301:1-18.67 Roggeman S, Zaman Z. Safely reducing manual urine microscopy analyses by combining urine flow cytometer and strip results. Am J Clin Pathol. 2001;116:872-878.68 Shayanfar N, Tobler U, von Eckardstein A, Bestmann L. Automated urinalysis: first exper

11、iences and a comparison between the Iris iQ200 urine microscopy system, the Sysmex UF-100 flow cytometer and manual microscopic particle counting. Clin Chem Lab Med.2007;45:1251-1256.第十六页，共五十二页。再次过筛理论依据： 1、干化学也能检测局部有形成分的化学物质； 2、流式仪器也能检测局部有形成分； 3、两者结合检测结果对照可以进一步减少人工镜检数量，减少复检率；干化学指标：红细胞、白细胞、蛋白质、胆红素；方式

12、：排列组合为64种模式；流式+干化学再次过筛减少镜检率的可行性第十七页，共五十二页。临床实际验证差异太大的原因：两者检测方法均为过筛检测，干扰物均无法排除、证实；两者均为非形态学方法，两者之间无相互验证性；两者方法之间也无检测的互补性；排列组合方式不适合这种检测：案例流 式 结 果RBC WBC 干 化 学 排 列 组 合 结 果 RBC WBC Pr 1 234+第十八页，共五十二页。使用流式、数字图像流式仪器怎样做到标准和标准按照NCCLS要求，阳性标本必须镜检；镜检复核方法要 符合ISLH方法要求；复核后按镜检结果报告；灵敏度要求：符合临床决定限第十九页，共五十二页。镜检方法标准化文件具

13、体要求国际标准ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003)第二十页，共五十二页。ISLH镜检方法核心内容1、不离心尿液直接检测，2、计数池体积 6.4ul3、低倍镜 观察计数大型有形成分（上皮细胞、管型）； 高倍镜 观察计数小型有形成分（细胞、真菌、结晶等）4、结 果 以“个/ul”报告。5、统计学精度 低倍：（管型和上皮）至少计数50个 CV14%； 高倍：（红、白细胞等）至少计数200个， CV7%；第二十一页，共五十二页。一、标准镜检参考方法的检测特点不离心尿液直

14、接镜检 定量准确检测体积：6.4ul(不是1ul) 目的：提高灵敏度，确保检测准确性 原因：不离心尿液直接镜检极易漏检报告：个/ul第二十二页，共五十二页。必须有两个镜头：高倍镜和低倍镜 两个镜头观察的内容不同（大小不同） 两个镜头观察的范围不同（体积范围不同） 两个镜头观察的细节不同（分辨率不同）二、标准镜检参考方法的基本要求：第二十三页，共五十二页。统计学精度 低 倍：（管型和上皮）至少计数50个CV14%；高 倍：（红、白细胞等）至少计数200个， CV7%；这是在有形成分浓度不低时候的理想统计学精度三、标准镜检参考方法的理想精密度第二十四页，共五十二页。镜检必须做到检测：不离心尿液直接

15、检测检测体积：不小于6.4ul灵敏度到达：3-10个细胞/ ul 符合临床决定限要求 目的：低浓度不漏检检测报告：个/ul第二十五页，共五十二页。第二节 镜检自动化技术仪器第二十六页，共五十二页。 依 据机器视觉方法学：显微镜镜检方法，金标准，方法溯源镜检自动化已经成为开展方向镜检自动化仪器没有改变人工镜检程序：改变的是： 操作自动化： 仪器预识别和计数有形成分 人工审核时作用就是人工镜检 符合国际标准：ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003)第二十七页，共五十二页

16、。仪器工作流程 完全参照人工镜检标准参考方法进样充池低倍过筛视野数可设置低倍定位 分类计数管型、上皮高倍识别分类计数报告清洗阴性阳性人工审核第二十八页，共五十二页。第三节数字图像自动化仪器如何达到人工镜检标准第二十九页，共五十二页。镜检自动化仪器=人工镜检条 件是否符合ISLH2003年的国际标准条件；是否是使用的具有高、低倍镜的显微镜; 拍摄图像是否是真实显微镜下的实景？图像经过处理否？检测灵敏度能否到达:3-10个细胞/ul;结果有人工审核；审核人员专业知识、经验、能力、责任心；第三十页，共五十二页。第三章尿液有形成分检验质控第三十一页，共五十二页。尿液有形成分检测质控真实成分标准品质控单

17、一真实成分标准品质控标准成分图像质控替代品质控第三十二页，共五十二页。有形成分检测仪器技术不同质控不同流式：质控物为特制颗粒物；机器视觉技术：红细胞没有质控物的仪器现 状第三十三页，共五十二页。第一节流式质控第三十四页，共五十二页。质控依据是血液分析质控物为特制颗粒，不是尿液有形成分，为替代品，与实际检测无系统属性；干扰物影响无法质控和检测；检测错误时检测者无法得悉；分类计数无意义；实际意义：校准仪器计数准确性；检测、质控依据和问题流式第三十五页，共五十二页。特制颗粒质控物，实际检测无系统属性流式第三十六页，共五十二页。检测错误时仪器无法知道流式第三十七页，共五十二页。第二节镜检仪器质控第三十

18、八页，共五十二页。机器视觉质控：质控物：单一红细胞；其他成分质控品目前无法做到；开展方向：标准图像质控；预识别后人工审核不能少；标准图库建立和指导意义大，需要增加和加强；实际意义：校准仪器计数准确性；分类计数在人工审核后才具有意义；第三十九页，共五十二页。第三节无质控品仪器第四十页，共五十二页。问 题无质控品的仪器检测灵敏度不够，不能质控识别能力不好，无法质控检测体积达不到国际标准要求，精确度较差单镜头下小的分辨不清（ISLH要求两个镜头）第四十一页，共五十二页。单镜头的仪器探讨：第四十二页，共五十二页。高、低倍镜以下图像比较第四十三页，共五十二页。第四十四页，共五十二页。第四十五页，共五十二页。第四章如何保证尿液检测标准和正确第四十六页，共五十二页。如何能是尿液检测标准和正确按国际标准文件 ISLH2003和GP16-A3 执行，不折扣；尿液检验必须包括：理学、化学和镜检；任何仪器检测结果必须与人工镜检相符合；总原则第四十七页，共五十二页。仪器检测的阳性结果必须镜检复检GP16-A3规定；镜检复核时方法应符合ISLH 规定自动化仪器灵敏度符合临床决定限要求 3-10个细胞/ul如何能是尿液检测标准和正确使用流式仪器第四十八页，共五十二页。质 控应在定性良好的前提下强调定量准确如何能是尿液检测标准和正确第四十九页，共五十二页。符合ISLH(2003)规定；应该具备上下倍镜头图像