项目二 疫苗的生产技术课件

1、项目二 疫苗生产技术 在发展中国家，死亡总人数的30%50%死于传染病。 在发达国家，传染病死亡人数仅占死亡总人数的4%8%，主要得益于疫苗的广泛应用。一、概述1、疫苗的概念 人工免疫：有计划、有目的地给人体接种抗原，或输入抗体或免疫细胞，使机体获得某种特异性抵抗力，从而达到预防或治疗某种疾病的目的。被动免疫 被动免疫是将抗体从人或者动物输入到其他人或动物获得。被动免疫可在短时间内为免疫对象提供足够数量的抗体以得到针对一些感染的保护，但是这种保护持续时间很短，常在数周或者数月内逐渐消失。因此被动免疫通常需要多次重复接种。一、概述 疫苗：刺激机体免疫系统对某种病原微生物处于高度戒备状态-“时刻准

2、备着！”一、概述2、理想疫苗的标准 安全：无致病性和接种后异常反应 有效：可诱导产生可靠的保护性免疫 实用：易于接种、保存和运输，价廉3、疫苗的发展历史 古典疫苗时期：牛痘苗、狂犬病疫苗 培养疫苗时期：脊髓灰质炎疫苗、卡介苗 基因工程疫苗时期：乙型肝炎基因工程疫苗 一、概述 结核病、麻疹、乙型脑炎、甲型肝炎、风疹疫苗、腮腺炎等疫苗。 减毒活疫苗 基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）：采用分子生物学技术，去除与毒力或毒力相关基因片段，使病原微生物毒力减低或丧失。用缺失突变毒株制成的疫苗。减毒活疫苗 与自然突变株（多为点突变毒株）相比，基因缺失活疫苗具有突变性状明确

3、、稳定、不易发生毒力返祖的优点。 百日咳、乙型脑炎、流行性脑脊髓膜炎、狂犬病、伤寒、钩体病、甲型肝炎、鼠疫、流感等疫苗。 灭活疫苗 缺点：免疫力维持时间短，需要多次重复接种；主要诱发体液免疫，不能产生细胞免疫或黏膜免疫应答；接种剂量较大，不良反应；需要严格灭活。 灭活疫苗 优点：易于制备；免疫原性稳定性高；储存及运输方便；易于制备多价疫苗；疫苗安全性高。 SARS疫苗研究 1、国内全病毒灭活疫苗所用的SARS毒株均为原始毒力很强的毒株，其研发、检定和将来的生产都必须需在P3级条件下进行，不能适应规模化生产。灭活疫苗 2、尚无有效的动物模型，SARS流行爆发具有不确定性，各种疫苗的安全性和有效性

4、的临床前验证较困难。H7N9 H7N9是禽流感的一种亚型。流感病毒颗粒外膜由两型表面糖蛋白覆盖，一型为血细胞凝集素（即H），一型为神经氨酸酶（即N），H又分15个亚型，N分9个亚型。 所有人类的流感病毒都可以引起禽类流感，但不是所有的禽流感病毒都可以引起人类流感，禽流感病毒中，H3、H5、H7、H9可以传染给人，其中H5为高致病性。H3为人犬共患，依据流感病毒特征可分为HxNx共135种亚型，H7N9亚型禽流感病毒是其中的一种，既往仅在禽间发现，未发现过人的感染情况。这个病毒的生物学特点、致病力、传播力，还没有依据进行分析判断 。发病症状：发热、咳嗽等急性呼吸道感染症状，尤其是会出现高热、呼吸

5、困难。2022/8/2617二、免疫接种 免疫接种是预防和控制传染病的综合措施之一，是指利用免疫制剂和疫苗通过适宜的途径对机体进行接种，使机体获得对某种疾病的特异免疫力，以提高个体或群体的免疫水平，从而达到保护机体，预防和控制针对疾病的目的。项目实施一 卡介苗的生产 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病，自有人类以来就有结核病。每年3月24日为世界防治结核病日。 2022/8/2621结核病的发生和发展结核病的发生和发展 ：核菌首次侵入人体主要是通过呼吸道进入肺泡并在此繁殖，称为

6、原发感染。原发感染处形成原发病灶，结核菌从原发病灶中沿淋巴管进入到血流中，叫做血行播散 。结核菌通过血行播散进入各脏器中，有的立即发病，发生严重的粟粒型结核病和结核性脑膜炎。有的结核菌潜伏在各种器官内，待机体免疫力下降时发病，称为继发结核病，也叫内源性发病 。 但是，近年来证实，如果多次、大量感染结核菌，也能形成外源性发病 。所以，积极发现并治愈传染源，减少结核菌传播的机会；经常保持室内通风换气；保持健康的身体、增强免疫力、新生儿要接种卡介苗。就可以减少感染和发病的机会。 2022/8/2623卡介苗的简史 卡介苗简称BCG，1907年法国内科医生卡美特和介兰在前人不断实践和经验总结的基础上，

7、认识到有效的结核免疫需活菌感染，但必须改变结核菌的毒力。于是他们从牛乳中分离出来的一株毒力很强的牛型结核杆菌在甘油牛胆汁马铃薯培养基上移植培养，经过13年231代的移植培养和传代，并通过近似人类的动物猩猩身上试验。2022/8/2624卡介苗2022/8/2626卡介苗接种的预防效果 1、目的：卡介苗是一次人工原发感染，通过人工方法，使未感染机体产生一次轻微的没有危险的感染，机体可自动的产生特异性免疫力，这种获得性的免疫力可限制以后结核菌感染在体内的播散，从而可以减少结核病发病的目的。2022/8/2627 人工原发感染优点是： （1）可以掌握人工感染时在机 体健康状况下进行； （2）可以掌握

8、人工剂量； （3）可以产生特异性免疫力。2022/8/2628 卡介苗接种对象 卡介苗接种对象应根据结核病流行情况而定，主要是未受结核杆菌感染的婴儿，结核病感染机会多的地区接种越早越好，因此新生儿是主要接种对象，最迟在1岁以内接种。有些新生儿由于出生时种种原因未能接种卡介苗，补种时应根据各地疫情情况，采用做结素试验或不做结素试验直接接种法。（建议超过三个月小儿补种卡介苗先做结素试验阴性，接种为好，因为现在流动人员多、杂，流行感染机会也就多，假如已自然感染再加上接种人工感染，这样就有可能引起强反应，如局部强反应或腋下淋巴结肿大。2022/8/2630卡介苗的生产卡介菌种在综合培养液中培养后，收集

9、菌膜，混悬于适宜的灭菌的保护液内，经冷冻干燥制成。所得到的活菌制剂，具有产生抗体、增强免疫力、诱导-干扰素产生的作用。 2022/8/2631基本要求生产、检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的有关要求。卡介苗生产车间必须与其他生物制品生产车间及实验室分开。所需设备及器具均须单独设置并专用。卡介苗制造、包装及保存过程均须避光。从事卡介苗制造的工作人员及经常进入卡介苗制造室的人员，必须身体健康，经X射线检查无结核病，且每年经X射线检查12次，可疑者应暂离卡介苗的制造。2022/8/2632种子批的制备菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。1、名称及来源采用卡

10、介菌 D2 PB302 菌株。严禁使用通过动物传代的菌种制造卡介苗。2、种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。2022/8/2633种子批的传代3、种子批的传代 工作种子批启开至菌体收集单批收获培养物的总传代数应不得超过12代。2022/8/26344、种子批菌种的检定1）培养特性 卡介菌在苏通培养基上生长良好，培养温度在3739之间。抗酸染色应为阳性。在苏通马铃薯培养基上培养的卡介菌应是干皱成团略呈浅黄色。 在牛胆汁马铃薯培养基上为浅灰色黏膏状菌苔。 在鸡蛋培养基上有突起的皱型和扩散型两类菌落，且带浅黄色。 在苏通培养基上卡介菌应浮于表面，为多皱、微带黄色的菌膜。202

11、2/8/2635毒力试验 用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300400g的同性豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液（5mg/ml），每周称体重，观察5周动物体重不应减轻；同时解剖检查，大网膜上可出现脓疱，肠系膜淋巴结及脾可能肿大，肝及其他脏器应无肉眼可见的病变。2022/8/2636有无毒分枝杆菌试验 用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300400g的同性豚鼠6只，于股内侧皮下各注射1ml菌液（10mg/ml），注射前称体重，注射后每周观察1次注射部位及局部淋巴结的变化，每2周称体重1次，豚鼠体重不应降低。6周时解剖3

12、只豚鼠，满3个月时解剖另3只，检查各脏器应无肉眼可见的结核病变。2022/8/2637 若有可疑病灶时，应做涂片和组织切片检查，并将部分病灶磨碎，加少量生理氯化钠溶液混匀后，由皮下注射2只豚鼠，若证实系结核病变，该菌种即应废弃。当试验未满3个月时，豚鼠死亡则应解剖检查，若有可疑病灶，即按上述方法进行，若证实系结核病变，该菌种即应废弃。若证实属非特异性死亡，且豚鼠死亡1只以上时应复试。2022/8/2638免疫力试验 用种子批菌种制备疫苗，经皮下免疫体重300400g豚鼠4只，每只注射0.2ml（1/10人用剂量），对照组注射0.2ml生理氯化钠溶液。豚鼠免疫后45周，经皮下攻击103104强毒

13、人型结核分枝杆菌，攻击后56周解剖动物，免疫组与对照组动物的病变指数及脾脏毒菌分离数的对数值经统计学处理，应有显著差异。种子批保存种子批应冻干保存于8以下。2022/8/2639疫苗生产流程2022/8/2640保存、运输及有效期于28避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。保质期一般是一年。2022/8/2641项目实施二 乙型肝炎疫苗的生产 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到预防乙肝感染的目的。接种乙

14、肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。2022/8/2642乙肝疫苗的发展史乙肝疫苗形成于1986年，为了得到乙肝疫苗，研究人员从研究复试病毒，到酵母，并研究纯化的蛋白质序列。并经过了大量的诱导免疫反应。 1991年，疫苗被应用于高危险人群。主要是一些儿童，因为儿童的感染率极高。 2005年，美国推行常规的疫苗注射。给所有未注射过乙肝疫苗的儿童注射。治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止疾病恶化的天然、人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品2022/8/2643接种乙肝疫苗接种程序：共3针，按照0、1、6 个月程序，即接种第1针疫苗

15、后，间隔1或6个月注射第2 及第3针疫苗。新生儿接种乙型肝炎疫苗越早越好，要求在出生后24h内接种。接种部位新生儿为大腿前部外侧肌肉内，儿童和成人为上臂三角肌中部肌肉内注射。由于婴幼儿和成人的免疫应答敏感性不同，所以有的人打疫苗容易产生抗体，而部分人不会产生抗体。乙肝疫苗第一针后大概有30%左右的人产生抗体，而第二针后有50%70%左右，第三针后90%左右产生抗体。 2022/8/2644预防乙肝从新生儿开始 乙肝疫苗可以成功预防乙肝病毒的感染，新生儿一出生就接种乙肝疫苗，基本可以确保将来不得乙肝。 2022/8/2645控制乙肝蔓延人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，当安全、有效、足量的乙型肝炎疫

16、苗提供接种使用时，肯定将对控制乙型肝炎病毒的传播起到决定性的作用。我国已实施新生儿国家免疫规划，乙肝疫苗即是免费且强制性接种的疫苗之一。2022/8/2646 乙型肝炎疫苗的研制 乙型肝炎疫苗的研制先后经历了血源性疫苗和基因工程疫苗阶段。目前基因工程乙肝疫苗技术已相当成熟，我国自行研制的疫苗经多年观察证明安全有效，亦已批准生产。乙肝疫苗的发展与应用，将对乙型肝炎的预防和控制起重要作用。 2022/8/2647乙肝疫苗的制备 目前使用的乙肝疫苗是基因工程疫苗-重组酵母乙肝疫苗和重组CHO乙肝疫苗，其主要成分是乙肝病毒的表面抗原，即一种乙肝病毒外衣壳蛋白，并非完整病毒。 这种表面抗原不含有病毒遗传物质，不具备感染性和致病性，但保留了免疫原性，即刺激机体产生保护性抗体的能力。 乙肝表面抗原曾经是从乙肝病毒携带者的血液，经纯化灭活等严格工序制备而来，即血源性疫苗，该疫苗由于安全、来源和成本等原因已被淘汰(如，有引起血源性疾病的嫌疑和浪费大量的