灭活疫苗生产线GMP管理要求

1、灭活疫苗生产线GMP管理要求蒋玉文中国兽医药品监察所一、灭活苗的种类病毒类灭活疫苗细胞毒灭活疫苗 转瓶培养 悬浮培养胚毒灭活疫苗组织毒灭活疫苗细菌类灭活疫苗发酵培养灭活疫苗胚毒灭活疫苗组织毒灭活疫苗特 点：生产用菌毒种是病原微生物 （强毒）二、灭活苗生产线的分区非洁净区洁净区操作的环境控制区有菌区无菌区操作的对象（活与灭活）有毒区（灭活前） 无毒区（灭活后）三、灭活疫苗一般生产工艺流程种子的制备菌毒液培养（组织毒、胚毒繁殖收获）菌毒液检验（纯粹检验 、活菌计数、病毒滴度测定、毒力测定）负压区灭活、脱毒灭活、脱毒浓缩 化等浓缩纯化等抗原含量、浓度、纯度测定、无菌检验 内毒素测定四、厂房与设施生产

2、线的设置 按微生物的类别、生产方式和工艺设置不同的生产线，灭活疫苗生产线主要有以下几类：病毒类：细胞毒灭活疫苗生产线（转瓶培养）细胞毒灭活疫苗生产线（悬浮培养）胚毒灭活疫苗生产线组织毒灭活疫苗生产线细菌类：细菌灭活疫苗生产线（液体苗、冻干苗、干粉苗 ）组织毒灭活疫苗生产线（如山羊传染性肺炎组织毒灭活苗生产线）鸡胚毒灭活疫苗生产线（如牛衣原体灭活疫苗，采用鸡胚生产）建议：在同一车间内同时建设细菌苗和病毒苗生产线，以满足大量的细菌病毒联苗的生产需要。四、厂房与设施厂房与布局总要求 厂房及生产线的平面布局、功能间的设置、设备的配置与参数、人物流的走向及洁净级别应满足产品工艺的要求和工艺流程及生物安全

3、要求，最大限度地降低污染、交叉污染和防止病原微生物泄露的风险，确保产品的质量和生物安全。 有生物安全三级防护要求的兽用生物制品的生产检验应符合相关规定。 制品生产环境的空气洁净度级别应当与产品和生产操作相适应，厂房与设施不应对原料、中间产品和成品造成污染。 生产过程中涉及高致病性病原微生物、有感染人风险的人兽共患病病原微生物以及芽孢类微生物的，应在生物安全风险评估基础上，至少采取专用区域、专用设备和专用空调排风系统等措施，确保生物安全。其空气净化系统等设施还应当符合特殊要求。 含有活毒的废水、废弃物（包括动物组织、动物尸体）的处理设施和设备能否满足生物安全的要求（活毒废水取样及传出方式和设备）

4、四、厂房与设施厂房与布局总要求 不同类型的灭活疫苗的抗原生产区应保持相对独立并应根据不同的生产工艺设置不同功能间，以满足工艺的要求。 进入生产区的人、物流应分开设置，功能间不可作为人流通道。 有毒操作区与无毒操作区应有各自独立的空气净化系统，病原微生物操作区（有毒区）的空气不得再循环或仅在同一区内再循环，并设置和保持为绝对负压，空气应通过高效过滤后排放，滤器的性能应定期检查。 有毒区和无毒区间的人流、物流分开设置，且人流应设置为包含淋浴间单向流。 有毒生产操作区及其设备应便于清洁和去污染，其有效性应经验证。四、厂房与设施厂房与布局总要求 抗原生产区与配苗分装区应相对分开，灭活（脱毒）前抗原生产

5、区（有毒区）与灭活（脱毒）后抗原生产区（无毒区）操作和应绝对分开，各自使用不同的空气净化系统。 灭活前抗原生产区（储存有毒区）应为绝对负压。 生产操作区（有毒区）应设置污物消毒灭菌设施设备，生产操作结束后的污染物品应在原位消毒、灭菌后，方可移出生产区。 应具有对制品生产、检验过程中产生的污水、废弃物（包括动物组织、动物尸体）等进行无害化处理的设施设备并且满足生物安全的要求。含活微生物的废水应收集在密闭的罐体内进行无害化处理，其中三级防护生产车间和检验动物房的活毒废水灭菌罐应设置在负压环境中。活毒废水灭菌后的取样装置应能保证取样过程样品不暴露和在线灭菌（取样及传出方式和设备）。 有菌区和无菌区不

6、得共用人流和物流通道（如精细间与扎盖间或洗瓶间与扎盖间）四、厂房与设施厂房与布局总体要求 抗原在灭活检验完成前抗原不得移出有毒生产区。 有毒区向无毒区间进行灭活后物料的传输应设置相应传输设施（带气闸物流缓冲间）和设备（带有净化、消毒和互锁功能的传递窗、可在线灭菌的传输管道和过滤装置）。 不同品种的灭活前抗原的生产不得有同时共用、交叉、传输设备（管道）相通的现象，达到气流、物流、人流三“独立”的要求。 灭活后的抗原浓缩、纯化、抗原配制、乳化、配苗、分装（和冻干）区严格分开并设置为正压（物料的传输尽可能多使用管道系统），空气净化系统应与有毒区绝对分开。 洁净区与非洁净区、有毒区与无毒区、洁净级别不

7、同的相邻洁净室（区）的所有人流、物流通道均应装置压差计；相邻的同级别但压差（正负压）不同的也须装置压差计。 有菌区和无菌区不得共用人流和物流通道（如精细间与扎盖间或洗瓶间与扎盖间）。制品生产的人员、设备和物料应通过气锁间进入洁净区，采用机械连续传输物料的，应当用正压气流保护并监测压差。制品生产的人员、设备和物料应通过气锁间进入洁净区，采用机械连续传输物料的，应当用正压气流保护并监测压差。三、厂房与设施厂房与布局总要求 洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之间的压差应当不低于10帕斯卡。必要时，相同洁净度级别的不同功能区域（操作间）之间也应当保持适当的压差梯度，并应有指示压差的装置和（或）监控系

8、统。 不同功能间如洁净级别不同，则需要设缓冲间等并进行更衣，缓冲间的净化级别应与拟进入的区域或功能间的级别相同（设置压差计） ； 所有进入洁净区的物料都应进行无菌处理，设备和物料应通过气锁间进入洁净区，采用机械连续传输物料的，应当用正压气流保护并监测压差。洁物进和污物出不可共用同一路线（设施与设备）。配苗前孵化间与接种间应设置与接种间级别相同缓冲间，孵化的鸡胚通过缓冲间传入接种间并保持气流由缓冲间流向接种间。 检验动物舍强毒区（效检攻毒区）必须设计负压净化系统、淋浴间和空气高效过滤系统，人、物的出入口应设置气闸室并设置为单向流，动物尸体和污物必须原位消毒处理，并配备污水无害化处理系统。三、厂房

9、与设施厂房与布局总要求 质量管理部门应根据需要设置检验、留样观察以及其他各类实验室，能根据需要对实验室洁净度、温湿度进行控制。检验中涉及病原微生物操作的，应在符合生物安全要求的负压实验室内进行。 分子生物学的检验操作应在单独的区域内进行，其设计和功能间的设置应符合相关规定，并有防止气溶胶等造成交叉污染的设施设备。三、厂房与设施厂房与布局特殊要求 致病性芽孢菌（如肉毒梭状芽孢杆菌、破伤风梭状芽孢杆菌）操作直至灭活过程完成前应当使用专用设施设备（独立的生产线）。 除有其他规定外，灭活疫苗（包括重组DNA产品）、类毒素及细胞提取物的半成品的生产可以交替使用同一生产区，在其灭活或消毒后可以交替使用同一

10、灌装间和灌装、冻干设施设备，但应当在一种制品生产、分装或冻干后进行有效的清洁和消毒，清洁消毒效果应定期验证。 以动物脏器、血清或脏器、组织为原料生产的制品（组织毒）的特有生产阶段应当使用专用区域和设施设备并与其他制品和其他生产阶段区域严格分开（专线）。 组织毒的繁殖必须设置单独的负压生产动物房，并设有专用的空气处理设施以及动物的专用通道及废弃物的灭菌消毒处理设施。含有感染活毒的动物尸体或组织向高净化级别的区域传递时，传输设施或设备需密闭（如渡槽、带有净化和消毒功能的传递窗）。 使用密闭系统生物反应器生产同一类别制品可以在同一区域同时生产。三、厂房与设施厂房与布局特殊要求 操作高致病性病原微生物

11、、牛分支杆菌以及特定微生物（如高致病性禽流感灭活疫苗生产用毒株）应在专用的厂房内进行，生产设备须专用，并有符合相应规定的防护措施和消毒灭菌、防散毒设施。（独立厂房） 应具有对制品生产、检验过程中产生的污水、废弃物等进行无害化处理的设施设备。含活微生物的废水应收集在密闭的罐体内进行无害化处理，其中三级防护生产车间和检验动物房的活毒废水灭菌罐应设置在负压环境中。活毒废水灭后的取样装置应能保证取样过程样品不暴露和在线灭菌。 密闭容器（如发酵罐）、管道系统、阀门和呼吸过滤器应便于清洁和灭菌，宜采用在线清洁、在线灭菌系统。特别是有有毒区的密闭生物反应器、发酵罐排气口均必须安装呼吸过滤器，保证在培养过程中

12、产生的含毒气体经过滤后排出。含活毒菌毒液的取样装置必须保证取样过程的样品不泄露且可在线灭菌。三、厂房与设施厂房与布局特殊要求 洁净区内设置的冷库和温室，应当采取有效的隔离和防止污染的措施，避免对生产区造成污染（通过设置缓冲间实现）。 制品生产的A/B级洁净区内禁止设置水池和地漏。在其他洁净区内设置的水池或地漏，应当有适当的设计、布局和维护，安装易于清洁且带有空气阻断功能的装置以防倒灌。同外部排水系统的连接方式应当能够防止微生物的侵入。 生产设备跨越两个洁净级别不同的区域时应采取密封的隔离装置。除传送带本身能连续灭菌（如隧道式灭菌设备）外，传送带不得在A/B级洁净区与低级别洁净区之间穿越。（如分

13、装间与扎盖间，设备不可穿越，安装压差计监测压差和气流方向，停产时应有隔断装置如挡板，两个区域的净化系统应同时开启，不得单独开启扎盖间的空调净化系统） 干粉疫苗的灭活冻干后的收集、粉碎、混合和分装应装有除尘设备，并设置为相对负压，以防止粉尘的扩散避免交叉污染并便于清洁。（规范五十条）四、厂房与设施不同生产操作的洁净级别要求洁净度级别(1)制品生产操作示例有开口暴露操作的细胞的制备、半成品制备中的接种、收获；灌装前不经除菌过滤制品的混合、配制；分装（灌封）、冻干、加塞；在暴露情况下纯化、添加稳定剂、佐剂、灭活剂等B级背景下的局部A级C级背景下的局部A级C级胚苗的半成品制备(接种与收获)；组织苗的半

14、成品制备（含脏器组织的采集、研磨、过滤）半成品制备中的培养过程，包括细胞的培养、接种后鸡胚的孵化、细菌的培养；灌装前需经除菌过滤制品的配制、精制、除菌过滤、超滤等采用生物反应器密闭系统；可通过密闭管道对接添加且可在线灭菌、无暴露环节的生产操作；鸡胚的前孵化、溶液或稳定剂的配制与灭菌；血清等的提取、合并、非低温提取和分装前的巴氏消毒；卵黄抗体生产中的蛋黄分离过程；球虫苗的制备、配制、分装过程；口服制剂的制备、分装、冻干等过程；轧盖(2)；制品最终容器的精洗、消毒等D级生产与质量管理种子批及细胞库 应建立种子批系统和细胞库系统、按兽药典要求进行保存、检定和管理、够避免污染或变异的风险。应当通过连续

15、批次产品的一致性确认种子批、细胞库的适用性。鸡胚制备或传代的菌毒种必须使用SPF鸡胚。 种子批或细胞库和成品之间的传代数目（倍增次数、传代次数）应当与已批准注册资料中的规定一致，不得随生产规模变化而改变。 应当在适当受控环境下建立种子批和细胞库，以保护种子批、细胞库以及操作人员。在建立种子批和细胞库的过程中，操作人员不得在同一区域同时处理不同活性或具有传染性的物料（如病毒、细菌、细胞）。生产与质量管理种子批及细胞库 种子批与细胞库的来源、制备、贮存、领用及其稳定性和复苏情况应当有记录。储藏容器应当在适当温度下保存，并有明确的标签。冷藏库的温度应当有连续记录，液氮贮存条件应当有适当的监测。任何偏

16、离贮存条件的情况及纠正措施都应记录。库存台账应当长期保存。第 不同种子批或细胞库的贮存方式应当能够防止差错、混淆或交叉污染。 在贮存期间，基础种子批贮存条件应不低于生产种子批贮存条件；基础细胞库贮存条件应不低于生产细胞库贮存条件。一旦取出使用，不得再返回库内贮存。 应按规定对菌（毒、虫）种、种细胞、标准物质进行使用和销毁。生产与质量管理生产管理 应按农业农村部批准的制品规程制定企业的生产工艺规程和标准操作规程，生产工艺不得随意更改，如需更改，应按有关规定办理相关手续。 应有防止物料及制品所产生的气体、蒸汽、喷雾物或生物体等引起交叉污染的措施。（设施设备、文件、人员） 当中间产品的检验周期较长时

17、，除灭活检验外，允许其他检验完成前投入使用，但只有全部检验结果均符合要求时，成品才能放行。 向生物反应器或其他容器中加料或从中取样时，应当检查并确保管路连接正确，并在严格控制的条件下进行，确保不发生污染和差错。（设备和人员） 应当对制品生产中的离心或混合操作采取隔离措施，防止操作过程中产生的悬浮微粒导致的活性微生物扩散。（设备的选型和操作方式）生产与质量管理生产管理 向发酵罐或反应罐中通气以及添加培养基、酸、碱、消泡剂等成分所使用的过滤器宜在线灭菌。（设备） 不同洁净级别使用的工作服不得混洗，允许在同一洗衣间内分别洗涤。强毒操作区的工作服在原位消毒后方可传出强毒区进行清洗。（管理） 生产过程中

18、被污染的物品和设备应当与未使用过的灭菌物品和设备分开，并有明显标志。（管理） 应当按照操作规程对洁净区进行清洁和消毒。所用消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。应当定期进行环境监测，及时发现耐受菌株及污染情况。（管理） 应当采用经过验证的工艺进行病毒去除或灭活处理，操作过程中应当采取措施防止已处理的产品被污染。四、生产与质量管理确认与验证 企业应当确定需要进行的确认或验证工作，以证明有关操作的关键要素能够得到有效控制。确认或验证的范围和程度应当经过风险评估来确定。 企业的厂房、设施、设备和检验仪器应当经过确认，应当采用经过验证的生产工艺、操作规程和检验方法进行生产、操作和检验，并保持持续的验

19、证状态。 企业应当制定验证总计划，包括厂房与设施、设备、检验仪器、生产工艺、操作规程、清洁方法和检验方法等，确立验证工作的总体原则，明确企业所有验证的总体计划，规定各类验证应达到的目标、验证机构和人员的职责和要求。四、生产与质量管理确认与验证 应当建立确认与验证的文件和记录，并能以文件和记录证明达到以下预定的目标：（一）设计确认应当证明厂房、设施、设备的设计符合预定用途和规范要求；（二）安装确认应当证明厂房、设施、设备的建造和安装符合设计标准；（三）运行确认应当证明厂房、设施、设备的运行符合设计标准；（四）性能确认应当证明厂房、设施、设备在正常操作方法和工艺条件下能持续符合标准；（五）工艺验证

20、应当证明一个生产工艺按照规定的工艺参数能够持续生产出符合预定用途和注册要求的产品。 采用新的生产处方或生产工艺前，应当验证其常规生产的适用性。生产工艺在使用规定的原辅料和设备条件下，应当能够始终生产出符合注册要求的产品。四、生产与质量管理确认与验证 当影响产品质量的主要因素，如原辅料、与药品直接接触的包装材料、生产设备、生产环境（厂房）、生产工艺、检验方法等发生变更时，应当进行确认或验证。必要时，还应当经畜牧兽医主管部门批准。 清洁方法应当经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染。清洁验证应当综合考虑设备使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的

21、性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素。四、生产与质量管理确认与验证 应当根据确认或验证的对象制定确认或验证方案，并经审核、批准。确认或验证方案应当明确职责，验证合格标准的设立及进度安排科学合理，可操作性强。 确认或验证应按照预先确定和批准的方案实施，并有记录。确认或验证工作完成后，应当对验证结果进行评价，写出报告（包括评价与建议），并经审核、批准。验证的文件应存档。 应当根据验证的结果确认工艺规程和操作规程。 首次确认或验证后，应当根据产品质量回顾分析情况进行再确认或再验证。关键的生产工艺和操作规程应当定期进行再验证，确保其能够达到预期结果。四、生产与质量管理质量管理 应当按照兽药典、兽用生物制品规程或农业农村部批准的质量标准对制品原辅料、中间产品和成品进行检验，并对生产过程进行质量控制。 必要时，中间产品应当留样，以满足复试或对中间控制确认的需要，留样数量应当充足，并在适宜条件下贮存。 应当对生产过程中某些工艺（如发酵工艺）的相关参数进行连续监控，连续监控数据应当纳入批记录。 采用连续培养工艺（如微载体培养）生产的，应当根据工艺特点制定相应的质量控制要求。