基因工程切割和标记基因检测习题

1、第 页基因工程习题1.一环状DNA分子，设其长度为1.限制性核酸内切酶A在其上的切点位于0.0处；限制性核酸内切酶B在其上的切点位于0.3处；限制性核酸内切酶C的切点未知.但C单独切或与A或2.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示B同时切的结果如下表，请确定C在该环状DNA分子的切点应位于图中的哪处（）C单独切长度为0，8和0，2的两个片段C与A同时切长度为2个0，2和1个0，6的片段C与B同时切长度为2个0，1和1个0，8的片段氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）.有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的

2、目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.回答下列问题：（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有（答出两点即可）.而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是;并且和的细胞也是不能区分的，其原因是.在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的

3、单菌落，还需使用含有原因的固体培养基.（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自3下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注请回答下列问题：限制酶BamHIBelISau3AIHindlll识别序列及切割位点GGATC|X；AJVAACTAi|TGATCCTAGjGATCCTAGj用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过酶作用后获得重组质粒.为了扩增重组质粒，需将其转入处于态的大肠杆菌.为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加平

4、板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中.(3)若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开(4)若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得种大小不同的DNA片段.4纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图.IMW.=野肛丸阳也阴g们耶脏细叫序艸据图回答：本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如图，为防止酶切片段的自身环接可选用的限制酶组合是

5、或TOC o 1-5 h zA.B.C.D.*+Ig|gatccAGATCTATC*?ATTAGCiTATQCGGATCTAACt；Tt*+亂制脉D限制脉2)臥制桶TOC o 1-5 h z设置菌株I为对照，是为了验证不携带纤维素酶基因.纤维素酶基因的表达包括和过程，与菌株II相比，在菌株III、W中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有.在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株II、III、W，菌株不能存活，原因是.酵母菌生产酒精的细胞部位，产生酒精时细胞的呼吸方式，在利用纤维素生产酒精时，菌株W更具有优势，因为导入的中重组质粒含有.使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新二造成的酶的流

6、失，提高酶的利用率5胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示0-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)，请回答下列问题：A或I诳編码忙TOC o 1-5 h z图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构.图1中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达,氨苄青霉素抗性基因的作用构建基因表达载体时必需的工具酶有.B-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于.溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合

7、蛋白能获得完整的A链或B链，且B-半乳糖苷酸被切成多个肽段，这是因为.根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量，你得推测结果是，理由是.肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图MEALU怕JJK加工口人為fnR?JAiniRNAt玉*评功紅严T(1)基因工程的步骤中，进行过程为进行过程时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞培养.研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2.据图分析，可从细胞中提

8、取进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中(RASmRNA/RAS蛋白质)含量减少引起的.某线性DNA分子分别用限制酶Hindlll和SmaI处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对):Hindlll：2.5kb，5.0kb；SmaI：2.0kb,5.5kb；Hindlll和SmaI：2.5kb,3.0kb,2.0kb；限制酶Hindlll和SmaI在此DNA分子中各有1个识别序列.两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoRI处理，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生了1.5kb的新片段.请在给出的DNA分子上标注限制酶H

9、indlll、SmaI、EcoRI的切割位点：(5)在生物工程中，为了获得足够数量的受精卵，先利用刺激供体雌性鼠超数排卵胚胎干细胞形态上具有的特性.许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色基因工程中常利用该原理从导大1&杆開I培捽菇冲加人转化丈驕杆曲I博醉崩中如人入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图.请据图回答：转化大航杆袒I焙荐加中加人*K-raMPTC(1)基因工程中，构建基因表达载体的目的是限制酶EcoRI的识别序列和切点是-GzAATTCSmaI的识别序列和切点是

10、-CCCGGG-.图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的TOC o 1-5 h z末端序列是，连接过程中需要的基本工具.转化过程中，大肠杆菌应先用处理，使其处于能吸收周围DNA的状态.菌落颜色为白色的，原因.菌落中的目的基因是否能表达，可采用的检测办法.基因工程切割和鉴别问题参考答案（2014嵊州市校级一模）一环状DNA分子，设其长度为1.限制性核酸内切酶A在其上的切点位于0.0处；限制性核酸内切酶B在其上的切点位于0.3处；限制性核酸内切酶C的切点未知.但C单独切或与A或B同时切的结果如下表，请确定C在该环状DNA分子的切点应位于图中的哪处（）C单独切

11、长度为0，8和0,2的两个片段C与A同时切长度为2个0，2和1个0，6的片段C与B同时切长度为2个0，1和1个0，8的片段A.0.2和0.4处B.0.4和0.6处C.0.5和0.7处D.0.6和0.9处【解答】解：根据图示分析可知，C单独切割时，获得0.8和0.2两个片段.而C与A同事切割时，获得2个0.2和1个0.6片段，可推知C的切割位点在0.2、0.4、0.6或0.8处.C与B同时切割时，获得2个0.1和1个0.8片段，可确切推知C的一个切割位点肯定在0.2和0.4两处.故选：A.二.实验题（共1小题）（2016天津）人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从血浆中制备.如图1是以

12、基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径.（1）为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取总RNA（或mRNA）合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因.如图2中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向.TOC o 1-5 h zII HYPERLINK l bookmark0 t,HSA基因iii102启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是B(填写字母，单选).A.人血细胞启动子B.水稻胚乳细胞启动子C.大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子利用农杆菌转化

13、水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化.人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性.与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是水稻是真核生物,具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工.为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与HSA的生物学功能一致.【解答】解：(1)为获取HSA基因，可通过反转录法，首先需采集人的血液，提取合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因.由于DNA两条链是反向平行的，复制时也是方向相反，如图2中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，则另

14、一条引物位于另一条链的相反一端如图所示HSA搅冋_启动子通常具有物种及组织特异性，故若构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是水稻胚乳细胞启动子利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化由于大肠杆菌为原核生物，无生物膜系统，而水稻为真核生物，具有生物膜系统，故在人体合成的初始HSA多肽，与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工.为证明rHSA具有医用价值，需对基因工程的产物进行鉴定，即确认rHSA与HSA的生物学功能一致.故答案为：(1)总

15、RNA(或mRNA)=3HSA农冋B(3)吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工(5)HSA(2016新课标I)某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tet中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tet表示四环素抗性基因).有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌回答下

16、列问题：质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有能自我复制、具有标记基因(答出两点即可).而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长.在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有原因是雲环旦的固基因工程中，某些噬菌体经改造后可

17、以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于受体细胞【解答】解：（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有具有标记基因、具有一个或多个限制酶切点、能在受体细胞中复制并稳定保存（2）由于未被转化的和仅含有环状目的基因的大肠杆菌中不含有氨苄青霉素抗性基因，因此如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，未被转化的和仅含有环状目的基因的大肠杆菌均不能存活，因此两者是不能区分的；含有质粒的大肠杆菌和含重组质粒的大肠杆菌的细胞由于均含有氨苄青霉素抗性基因，在含有氨苄青霉素的培养基上都能生长，因此两者也是不能区分的在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有四环

18、素的固体培养基，即含有重组质粒的大肠杆菌在其中不能生长，而含有普通质粒的大肠杆菌能生长（3）噬菌体属于病毒，病毒没有细胞结构，其DNA复制所需的原料来自于受体细胞（1）能自我复制、具有标记基因（2）二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒（或答含有重组质粒）二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长四环素（3）受体细胞（2016江苏）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注请回答下列问题：限制酶BamHIBelISau3AIHindillfkwj|ihrtlJIII

19、氨茱青霉素抗性基因图1（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用BelI和Hindill两种限制酶切识别序列及切割位GGATCC1占八、lT（；A!CAGATCGATCACTAi|TCTAGjCTAGj割，酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒.为了扩增重组质粒，需将其转入处于态的大肠杆菌.（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中引物甲和引物3）若BamHI酶切的DNA末端与BelI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个（GGATCTGATCCH；CT（；7碱基对序列为（填“都能”“都不

20、能”或“只有一种能”）切开.，对于该部位，这两种酶都不能（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得种大小不同的DNA片段.【解答】解：（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHl可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选Bell和Hindlll两种限制酶切割酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒.为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌.2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素.PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙.（3）根据Ba

21、mHI和Bell的酶切位点，若BamHI酶切的DNA末端与Bell酶切的DNA第 页tG/Vr岱吊融编即序列皿就塞丙片也傭株滇檢n瀏樣m葡探rv据图回答：（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是B（或C）或C（或B）A.B.C.D.*+AGATCTAVCGATTCCGGACCTACCTCTAG!ATACCiTAACCCTI讯制晦陀制朋屯制晦设置菌株I为对照，是为了验证质粒DNA和酵母菌基因组不携带纤维素酶基因纤维素酶基因的表达包括转录和翻译过程，与菌株II相比，在菌株III、W中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有内质网、高尔基体

22、.在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株II、III、W,菌株II不能存活，原因是缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到胞外，细胞无可利用的碳源.酵母菌生产酒精的细胞部位是细胞质基质，产生酒精时细胞的呼吸方式是无氧呼吸，在利用纤维素生产酒精时，菌株W更具有优势，因为导入的中重组质粒含有A基因片段.使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新二造成的酶的流失，提高酶的利用率【解答】解：(1)为防止酶切片段的自身连接，选用的限制酶组合产生的黏性末端应不同，而限制酶产生的黏性末端相同，限制酶产生的黏性末端也相同，因此可选用的限制酶组合为或(或).菌株I不能合成纤维素酶，说明质粒DNA和酵

23、母菌基因组不携带纤维素酶基因基因表达包括转录和翻译过程.菌株II的纤维素酶不能分泌到细胞外，而菌株III的纤维素酶分泌到细胞外，菌株W的纤维素酶分布在细胞壁上，因此与菌株II相比，在菌株III、W中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有内质网和高尔基体.在以纤维素为唯一碳源的培养基上菌株II不能存活，原因是菌株II缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，细胞无可利用的碳源酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌生成酒精的部位是细胞质基质.由于菌株W导入的重组质粒含有A基因片段,使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，酶不会因培养液的更新而流失，因此在利用纤维素生产酒精时，菌株W更具优势.故答案为

24、：（1）B（或C）C（或B）（2）质粒DNA和酵母菌基因组（3）转录翻译内质网、高尔基体（4）II缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到胞外，细胞无可利用的碳源（5）细胞质基质无氧呼吸A基因片段（2015江苏）胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示0-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白），请回答下列问题：A或R粧编码区（1）图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是终止子.（2）图1中启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达，氨苄青霉素抗性基因

25、的作用是作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来.（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有限制酶和DNA连接酶.（4）0-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解.（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且0-半乳糖苷酸被切成多个肽段，这是因为B-半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸.（6）根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量，你得推测结果是至少2个,理由是两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨

26、基酸R基团中可能还含有游离的氨基.【解答】解：（1）根据题意和图示分析可知：图1基因表达载体中已有目的基因、启动子和标记基因，所以没有标注出来的基本结构是终止子（2）图1中启动子是RNA聚合酶酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达即转录过程；氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来（3）构建基因表达载体的过程中，必须用相同的限制酶切割（含目的基因的外源DNA分子）和运载体，以产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子.（4）0-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，这样可以

27、防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解.（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，由于0-半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸，所以用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且0-半乳糖苷酸被切成多个肽段.（6）由于一个肽链中至少有一个游离的氨基和一个游离的羧基，在肽链内部的R基中可能也有氨基和羧基，而胰岛素含有A链和B链，所以每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量至少是2个故答案为：（1）终止子（2）RNA聚合酶作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来（3）限制酶和DNA连接酶（4）防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解（5）0-半乳糖苷酶中含有多个甲

28、硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸（6）至少2个两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸R基团中可能还含有游离的氨基（2014天津三模）肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图.jss-jr.im*1iiff旳f.Y裤凶嘖-7tU加I兀HASmR?JAMJ讦气jsthas朋仃（1）基因工程的步骤中，进行过程为基因表达载体的构建（2）进行过程时，需用蛋白亘酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞培养（3）研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS

29、的表达，其影响机理如图2.据图分析，可从细胞中提取RNA进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中RAS蛋白（RASmRNA/RAS蛋白质）含量减少引起的.（4）某线性DNA分子分别用限制酶Hindlll和SmaI处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段（kb为千个碱基对）：Hindlll：2.5kb，5.0kb；SmaI：2.0kb，5.5kb；Hindill和SmaI：2.5kb，3.0kb，2.0kb；限制酶Hindill和SmaI在此DNA分子中各有1个识别序列.两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoRI处理，结果导致凝胶上3.0kb的

30、片段消失，产生了1.5kb的新片段.请在给出的DNA分子上标注限制酶Hindlll、SmaI、EcoRI的切割位点：HindOSnia.I1511.5MJ在生物工程中，为了获得足够数量的受精卵，先利用促性腺激素刺激供体雌性鼠超数排卵胚胎干细胞形态上具有体积较小，细胞核大，核仁明显的特性.【解答】解：(1)基因工程的步骤中，进行过程将let-7和载体形成重组DNA,即基因表达载体的构建过程表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取mRNA和用放射性同

31、位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交根据题中信息“肺组织细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”导入Iet7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制线性DNA分子在限制酶Hindlll的切割下形成2.5kb和5.0kb的片段，因此限制酶Hindill在该DNA分子上具有一个酶切位点；同理可得，限制酶SmaI在该DNA分子上也具有一个酶切位点两种酶同时切割时，根据所得片段可以判断，限制酶Hindlll的酶切位点在DNA分子左侧的2.5kb处，限制酶SmaI的酶切位点在DNA分子右侧的2.0kb处，

32、中间刚好有个3.0kb的片段再用限制酶EcoRI处理，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生一个1.5kb的新片段，说明限制酶EcoRI的酶切位点就在3.0kb片段的中间位置具体位置如下：HindO沁-J131却MJ在生物工程中，利用促性腺激素刺激供体雌性鼠超数排卵，获得足够数量的受精卵胚胎干细胞形态上具有体积较小，细胞核大，核仁明显的特性故答案为：基因表达载体的构建胰蛋白酶RNARAS蛋白用嗣Smil1j2311.5b1川(4)L趙(5)促性腺激素(6)体积较小，细胞核大，核仁明显8(2012泰州三模)许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，