归芪生血颗粒质量标准研究

1、归芪生血颗粒质量标准研究【摘要】目的建立归芪生血颗粒黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子等质量标准。方法采用薄层色谱法对颗粒中的黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子进展了定性鉴别；采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器HPL-ELSD测定了制剂中黄芪甲苷的含量。结果薄层斑点明晰，黄芪甲苷在0.500110.002g范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.83%，RSD=1.13%。结论方法简便，准确，可供本品质量控制。【关键词】归芪生血颗粒；薄层色谱；高效液相色谱-蒸发光散射检测器；黄芪甲苷StudynQualityStandardfrGuiqishengxueGranulesAbstrat：bje

2、tiveTestablishthequalityntrlstandardfGuiqishengxueGranules(RadixAstragali,FrutusLyii,Frutusannabis,RadixAngeliaeSinenis,FrutusShisandra-e,et.).ethdsRadixAstragali,FrutusLyii,Frutusannabis,RadixAngeliaeSi-nenis,FrutusShisandraeereidentifiedbyTL.ThententfAstragalsideIVasdeterinedbyHPL-ELSD.ResultsTheT

3、Lsptsdevelpedasfairlylear.TheAstragalsideIVshedgdlinearrelatinshipatarangef0.500110.002g.Theaveragereveryas98.83%ithRSDas1.13%.nlusinTheethdissiple,aurateandanbeappliedtthentrlftheprdutseffetively.Keyrds：GuiqishengxueGranules;TL;HPL-ELSD;AstragalsideIV归芪生血颗粒主要由黄芪、枸杞子、生地、天冬、火麻仁、当归、桃仁、红花、五味子等9味中药组成。具有

4、健脾益肾，调畅气血的作用，适用于脾肾缺乏、气血亏虚、肌肤失养所致颜面皮肤干黄，弹性降低，皮肤松弛等症。为了有效控制药物质量，对归芪生血颗粒中黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子进展定性研究，采用HPLELSD法对黄芪的主要成分黄芪甲苷进展含量测定，以期更好地控制该药物的质量。1仪器与试药仪器：岛津L-10AT，7725i定量进样阀，岛津-R7Ae型数字处理机，法国SEDEX55型蒸发光散射检测器ELSD；对照品黄芪甲苷含量测定用，枸杞、火麻仁、当归、五味子对照药材以上对照品和对照药材均购于中国药品生物制品检定所；使用的化学试剂均为分析纯，硅胶G青岛海洋化工厂，自制硅胶板10100.6；试验样品归

5、芪生血颗粒自制；阴性样品依处方除去被检药材按制备工艺制成。2方法与结果2.1定性鉴别2.1.1黄芪的鉴别取本品20g，研细，加温水50l使溶解，放冷，离心，取上清液，加乙醚提取3次，20l/次，合并乙醚液，另器搜集；挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇提取3次，20l/次，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的1%NaH溶液洗涤3次，20l/次，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，30l/次，正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1l使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪阴性样品20g，同法制成阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法?中国药典?2022年版部附录VI

6、B试验，汲取供试品溶液、阴性对照溶液各10l,对照品溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水102011510下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显一样颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图1。2.1.2枸杞子的鉴别取本品10g，研细，加热水50l使溶解，放冷，离心，取上清液用醋酸乙酯40l振摇提取，提取液浓缩至约1.5l，作为供试品溶液。另取枸杞子阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取枸杞子对照药材0.5g，加水35l，煮沸15in，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15l振摇提

7、取，提取液浓缩至约1l，作为对照药材溶液。照薄层色谱法?中国药典?2022年版部附录VIB试验，汲取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸320.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365n下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显一样颜色的荧光斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图2。图1黄芪的鉴别略图2枸杞子的鉴别略2.1.3火麻仁的鉴别取火麻仁对照药材0.5g，加醋酸乙酯20l，超声提取30in，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1l使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法?中国药典?2022年版部附录VIB试验，汲取

8、定性分析2.2项下供试品溶液20l，对照药材溶液、阴性对照溶液各5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF-254薄层板上，以环己烷-丙酮233为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显一样颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图3。2.1.4当归的鉴别取定性分析2.1项下另器搜集的乙醚液，自然挥干，残渣加乙醇1l使溶解，作为供试品溶液。另取当归阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取当归对照药材1g，加乙醚20l，超声提取15in，滤过，滤液自然挥干，残渣加乙醇1l使溶解，作为对照药材溶液。照薄层

9、色谱法?中国药典?2022年版部附录VIB试验，汲取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯91为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365n下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显一样颜色的荧光斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图4。2.1.5五味子的鉴别取本品20g，加氯仿100l，回流提取1.5h，滤过，滤液浓缩至约1l，作为供试品溶液。另取五味子阴性样品20g，同法制成阴性对照溶液。再取五味子对照药材0.5g，加氯仿100l，回流提取1.5h，滤过，滤液浓缩至约1l，作为对照药材溶液。照薄层色谱法?中国药典?2022

10、年版部附录VIB试验，汲取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF-254薄层板上，以石油醚3060-甲酸乙酯-甲酸1551的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显一样颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图5。图3火麻仁的鉴别略图4当归的鉴别略图5五味子的鉴别略2.2定量分析2.2.1色谱条件美国Phenenex公司LUNA5u182色谱柱4.6250，5，流动相采用甲醇-水7525，流速为1.0l/in，ELSD检测器漂移管温度为40，载气

11、氮气流速为2.0bar。2.2.2溶液的制备精细称定黄芪甲苷对照品适量由中国生物制品鉴定所提供，批号0781-9908，加甲醇配制成浓度为0.5001g/l的对照品溶液。供试品溶液的制备:取本品约5g,精细称定，加水50l，溶解，离心，滤过，滤液置分液漏斗中，用氯仿-正丁醇21提取4次，第1次50l，其余3次30l/次假设出现乳化现象，将乳化层离心处理，取下层清液，合并提取液，蒸干，残渣加2%氢氧化钾的甲醇溶液20l，并转移至锥形瓶中，水浴回流1h，提取液蒸干，残渣加水20l溶解，移至分液漏斗中，用氯仿-正丁醇21提取4次，20l/次，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶液使溶解并转移至5l量瓶中，

12、加甲醇至刻度，摇匀。阴性对照品溶液的制备:取按处方比例及制备工艺制备的不含黄芪的阴性样品，照3.3项下操作，同法制成阴性对照溶液。2.2.3空白实验将黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液分别注入液相色谱仪，按上述条件进展测定，结果见图68。从色谱图可见，样品中的其他成分对黄芪甲苷的测定不会产生干扰。2.2.4线性关系与考察取对照品溶液分别进样1，5，10，15，20l，以进样量Xg的对数X为横坐标，峰面积Y的对数Y为纵坐标，绘制标准曲线。按照最小二乘法原理进展回归，黄芪甲苷在0.500110.002g范围内线性关系良好。回归方程为lgY=5.8409+2.2144lgX(r=0.999

13、5)。见图9。图6黄芪甲苷对照品的HPL图谱略图7归芪生血颗粒样品的HPL图谱略图8缺黄芪阴性对照的HPL图谱略图9标准曲线略2.2.5稳定性实验取供试品溶液，分别于0，1，2，3，4h进样，10l/次，记录色谱峰峰面积，结果说明，归芪生血颗粒中黄芪甲苷的含量测定在4h内稳定，RSD=0.005n5。2.2.6精细度实验取上述对照品溶液，连续进样5次，10l/次，黄芪甲苷峰面积的相对标准偏向分别为0.22%。2.2.7重复性实验取归芪生血颗粒样品批号000601，精细称取5份，按样品测定方法分别测定其黄芪甲苷的含量，RSD=0.22%n5。2.2.8回收率实验取归芪生血颗粒000701批，已测

14、定含量，黄芪甲苷含量为0.10049g/g6份，精细称定置于具塞锥形瓶中，依次精细参加黄芪甲苷对照品溶液0.1006g/l于上述具塞锥形瓶中，分别参加水50l溶解，离心，滤过，滤液置分液漏斗中，用氯仿-正丁醇21提取4次，第1次50l，其余3次30l/次假设出现乳化现象，将乳化层离心处理，取下层清液，合并提取液，蒸干。残渣加2%氢氧化钾的甲醇溶液20l，并转移至锥形瓶中，水浴回流1h，提取液蒸干，残渣加水20l溶解，移至分液漏斗中，用氯仿-正丁醇21提取4次，20l/次，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇使溶解并转移至10l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经孔径0.45微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液作

15、为供试品溶液。按照拟定色谱条件，各取10l注入液相色谱仪，测定，每份测定两次，取平均值，计算回收率，结果见表1。表1加样回收率实验略2.2.9样品测定按照拟定方法，共测定7批样品的黄芪甲苷含量，每批平行两份测定，结果见表2。表2归芪生血颗粒中黄芪甲苷含量测定略3讨论黄芪甲苷成分紫外吸收较差，最大吸收波长为200.8n。如用紫外检测器受试剂影响较大，使分析难以进展，该质量标准目前多采用薄层扫描法进展定量。薄层扫描法的别离效果不理想，背景噪音大，且操作繁琐。ELSD检测器为质量型检测器，不受外部环境干扰，试剂在检测器中全部挥发，不干扰检测，是一种检测黄芪甲苷成分的有效方法1。由于处方中成分复杂，在对样品前处理过程中，发现用5%碳酸钠溶液和氨试液洗涤，所得的杂质较多，黄芪甲苷的含量较低，经比拟将5%碳酸钠溶液和氨试液改为用2%氢氧化钾的甲醇溶液来处理氯仿-正丁醇提取物，再用氯仿-正丁醇萃取，测得黄芪甲苷含量明显进步。本法采用高效液相色谱法快速别离测