《医学形态学实验》

1、医学形态学实验课程教学大纲山东大学医学院 医学形态学实验课程教学大纲课 程 名 称： 医学形态学实验 英 文 名 称： Medical morphological Experiment课 程 编 号： 实 验 课 性 质：融合创新性实验课 程 负 责 人： 开放实验项目数：8大 纲 主 撰 人： 武玉玲、张庆慧、郝晶等人大 纲 审 核 人： 一、学时、学分课程总学时： 32 实验学时： 32 课程总学分： 实验学分：二、适用专业及年级供基础、临床医学、预防、口腔医学、护理学5、6、7年制专业用三、实验教学目的与基本要求通过医学形态学融合性实验教学，将人体解剖学、组织胚胎学和病理解剖学三个相关学

2、科的交叉内容进行有机整合，形成系统化的知识。通过创新实验的学习，使学生学会使用医学形态学实验常用的仪器，熟悉科研常用的技术方法，培养学生动手能力、提高学生利用所学知识解决实际问题的能力，启迪学生的科研思维和创新精神，以适应研究型大学培养人才的要求。四、主要仪器设备1动物： Wistar大鼠，昆明小鼠2仪器设备：显微图像观察系统、恒温培养箱，手术器械、微量注射器、常用染料。 五、实验课程内容和学时分配序号实验项目名 称实 验 内 容学时分配实验要求指导教师已开/未开1淋巴系统的组成1第1、2趾蹼间隙皮下注射0.2ml Patent blue，10分钟后在腘窝及腹股沟处切开皮肤，寻找蓝染的淋巴管及

3、淋巴结（可追踪至腹膜后隙）。观察淋巴管及淋巴结的形态和分布。2将一段小肠系膜平铺于透明的载物台上，用显微图像观察系统观察小肠系膜内淋巴管的运动。注意寻找淋巴管的瓣膜。3小肠浆膜下注射适量Patent blue。观察淋巴管的吸收功能及引流。4追踪腹膜后隙染色的淋巴结。5在腹股沟处结扎、切断腹股沟淋巴结和淋巴管，造成淋巴引流障碍，观察淋巴淤滞和淋巴水肿的形成。6观察淋巴引流注射标本，淋巴结和淋巴管组织切片。总结淋巴系统的组成和功能。4分小组进行丁兆习未开2脊髓半切损伤的手术试验观察将Wista大鼠麻醉固定于手术台。切开背部皮肤，暴露脊柱，打开椎管，剪断一半脊髓。缝合背部肌及皮肤。待大鼠清醒后，观察

4、大鼠损伤后的临床表现。讨论并写出试验报告4分小组进行邢子英未开3肥大细胞的制作与观察肥大细胞的制作与观察：取健康大鼠一只，脱臼处死。随后剪取皮下组织，平铺置于载玻片上。用95乙醇溶液固定、甲苯胺蓝染色，最后树胶封片。镜下观察肥大细胞形态、颗粒染色特点及肥大细胞走形分布特点。大鼠型超敏反应动物模型的建立取马血清用生理盐水按一定的比例稀释，然后给大鼠腹腔注射进行被动致敏。致敏后14 日再用马血清进行腹腔注射进行大鼠致敏实验。随后剪取皮下组织，观察肥大细胞脱颗粒情况。4分小组进行张艳敏未开4小鼠活精子标本的制作与精子低渗肿胀试验1活精子标本的制备与观察 取育龄期雄鼠附睾，将其剪成小块，制作小鼠活精子

5、悬液。将悬液滴于载玻片上，低倍镜观察精子的活动情况。另取精子悬液涂片，用0.3甲苯胺蓝液染色，光镜观察精子的形态结构。2体外抑精子实验实验分组：（1）实验组：在37恒温条件下，取50l精子悬液与等量一定浓度的抑精子药液充分混合，分别于混合后30 sec、5 min、10 min和30 min 时，取一滴混合液滴于载玻片上，显微镜下计数10个视野，记录活动精子百分率（或用伊红染料染色，计算精子存活率）。（2） 对照组：取50l精子悬液与等量生理盐水混合，其余操作方法同上。比较在处理后不同时间内两组活动精子的百分率。同时，分别取处理10 min分钟后的实验组及对照组的精子悬液，以10001500r

6、/min 离心 5min，弃上清液，取沉淀于管底的精子涂片，用0.3甲苯胺蓝液染色，光镜观察两组精子形态结构的不同。3精子低渗肿胀试验 （1）将 735 mg 柠檬酸钠2H2O 和1351 mg 果糖 溶于100 ml 蒸馏水中，配制成150 mol的低渗溶液（可考虑用蒸馏水代替低渗液）。（2）取0.1ml 处理后的精子混悬液 与 1ml 低渗液混合，于37 下培养 30 min，然后在显微镜下观察100个精子，计算精子尾肿胀百分率，以确定其低渗肿胀能力。然后，比较两组精子的膜功能。4分小组进行武玉玲未开5小鼠体外受精实验 精子获能实验取12-16周龄ICR雄鼠的附睾尾放在石蜡油中，用眼科剪在

7、其顶端剪一小口，然后用眼科镊子挤压附睾尾部精子，将其挑到200ul平衡过夜的HTF受精获能液滴中，置于37、5CO2饱和湿度条件下培养1h使精子获能，显微镜下观察精子的形态和运动。 . 超排卵及收集卵细胞：取6-8周龄ICR雌鼠，腹腔注射7.5IU只 PMSG，间隔48h后再注射7.5IU只 HCG，进行超排处理（实验老师课前准备）。注射HCG14h后，颈椎脱臼处死雌鼠，取出输卵管在滤纸上除去血迹，放入培养皿中，用解剖针刺破输卵管的膨大部，将流出的卵子团引入到HTF培养液滴中，显微镜下观察卵丘复合体的形态。 3观察受精过程: 在卵子HTF培养液滴中,加入51Oul获能精子(200个精子u1)，

8、显微镜下观察精子向卵细胞周围集聚。放入CO2培养箱培养。 4观察精、卵原核: 精卵共同孵育12-16h后,将受精卵移至玻片上（多聚赖氨酸预处理），空气干燥5min, 向玻片上滴加数滴甲醇-冰醋酸溶液（3:1）室温（25）下固定5min，滴加1%美蓝染色液室温5min，水洗，90%、 95%和纯酒精脱水各2分钟，二甲苯透明，树胶封片，高倍显微镜下观察受精卵的卵原核和精原核。4分小组进行郝晶未开6结缔组织增生与肝硬化1. 肉眼及镜下观察正常肝脏的大体形态特点及正常组织结构。2. 镜下观察固有结缔组织的形态特点。 3. 肉眼及镜下观察肝硬化的标本及病理切片，对照肝脏正常结构找出肝硬化的病理组织学特点

9、。4. 互动式讨论：肝脏结构与功能的关系，固有结缔组织的功能以及在创伤愈合中的作用，结缔组织增生与肝硬化的关系，肝硬化时肝脏多种功能降低的结构基础以及如何防止肝硬化的发生。4分小组进行张庆慧，甄军晖未开7巨噬细胞与矽肺、尘肺的发生肉眼观察矽肺、尘肺的病理标本；2. 显微镜观察活体染色的疏松结缔组织铺片，重点观察吞噬了染料颗粒的巨噬细胞，成纤维细胞和胶原纤维；3显微镜观察正常肺切片，熟悉肺组织的正常结构，观察肺间质中的尘细胞；4显微镜观察矽肺、尘肺的病理切片，与正常肺切片对照比较，以理解巨噬细胞与矽肺、尘肺发病的关系；5学生自己动手，给小鼠腹腔注射或皮下注射台盼蓝，2小时后取腹腔液制作涂片，或取

10、皮下组织制作铺片，伊红染色，显微镜观察吞噬了染料颗粒的巨噬细胞；6教师和学生互动式讨论巨噬细胞的形态结构和生理功能，矽肺、尘肺的病理过程，巨噬细胞与矽肺、尘肺病理过程的相关关系，吸烟的危害；7教师和学生互动式讨论巨噬细胞在特异性免疫和非特异性免疫中的作用，讨论巨噬细胞在矽肺、尘肺、结核病、动脉粥样硬化等疾病发生、发展和归宿中的意义；4分小组进行甄军晖未开8肺组织结构特点与急性肺淤血、肺水肿的观察取大鼠称重。一组腹腔注射肾上腺素22.5mg/kg体重，另一组腹腔注射相同量的生理盐水做对照，注射后观察记录两只大鼠的一般情况和呼吸等临床表现。15min20min后处死动物（注意结扎气管以免液体外溢），取出肺和心脏。用滤纸吸去肺表面的液体，用天平称两肺的重量，计算肺重系数（肺重量g/体重kg*100%），若肺重系数1%，比较两组大鼠的肺重系数。若肺重系数1%，表明肺水肿已形成。对比观察2组大鼠肺的外观，记录包括大小、颜色、质地、及切面外观，将2组大鼠的肺脏用10