医疗器械产品无菌检验操作规程

1、医疗器械械产品无无菌检验验操作规规程 1 目的的通过无菌菌检验，确保灭灭菌后产产品能够够达到无无菌的要要求。2 适用用范围适用于灭灭菌后医医疗器械械产品（列举）的无菌菌检验。3 检验验依据本厂产品品注册标标准（编编号）EN11174-19996 医医疗器械械灭菌产产品中微微生物数数量的评评估中国药药典（20005年版版）GB1442333.2-20005 医医用输液液、输血血、注射射器具检检验方法法第二部部分：生生物试验验方法GB1559800-19995 一次性性使用医医疗用品品卫生标标准4 仪器器、设备备百级层流流超净工工作台、电热干干燥箱、电热恒恒温培养养箱、霉霉菌培养养箱、压压力蒸汽汽

2、灭菌器器、集菌菌仪（器器）、电电子天平平、PHH计、冰冰箱、恒恒温水浴浴锅、酒酒精灯、三角烧烧瓶，接接种环、无菌棉棉签、镊镊子，试试管架，大试管管若干等等。5 无菌菌检验室室的环境境要求5.1 无菌检检验应在在环境洁洁净度1100000级下下的局部部百级的的单向流流空气区区域内进进行。5.2 缓冲区区与外界界环境、无菌检检验室与与缓冲区区之间空空气应保保持正压压，阳性性对照室室与缓冲冲区之间间空气应应保持负负压。无无菌检验验室与室室外大气气之间静静压差应应大于110Paa。无菌菌检验室室的室温温应保持持1826，相对对湿度：4565%。5.3 无菌检检验室的的单向流流空气区区、工作作台面及及环

3、境应应定期按按医药药工业洁洁净室（区）悬悬浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的测试方方法的的现行国国家标准准进行悬悬浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的监测。每年至至少检测测一次。5.4 无菌检检验过程程中应同同时检查查超净工工作台单单向流空空气中的的菌落数数：每次次操作时时在层流流空气所所及台面面的左中中右置33个营养养琼脂平平板，暴暴露300minn，于330335培养448小时时，菌落落数平均均应不超超过1CCFU/平板。6 无菌菌检验前前的准备备6.1 器具灭灭菌、消消毒6.1.1 灭灭菌：试试验过程程中与供供试品接接触的所所有器具具必须采采用可靠靠方法灭灭菌。可可经电热热干燥箱箱1600以上

4、干干烤2小小时，或或置压力力蒸汽灭灭菌器内内1211蒸汽灭灭菌300分钟后后使用（根据灭灭菌效果果验证决决定灭菌菌参数）。所有有的灭菌菌物品不不应超过过2周即即用毕，否则应应重新灭灭菌。6.1.2 消消毒：凡凡检验中中使用的的器材无无法灭菌菌处理的的，使用用前必须须经消毒毒处理。如无菌菌检验室室的试管管架、电电子天平平、工作作台面、工作人人员的手手、橡胶胶吸头等等。可采采用消毒毒剂浸泡泡或擦拭拭。消毒毒剂应每每月更换换，以防防止产生生耐药菌菌株。6.1.3 标标识：器器具的灭灭菌、消消毒后必必须做好好标识，标明灭灭菌、消消毒时间间和使用用有效期期。6.2 人员、物料进进入无菌菌检验室室6.2.

5、1 开开启紫外外线灯或或臭氧发发生器进进行空间间灭菌处处理，消消毒时间间不得少少于300minn。6.2.2 物物料进入入无菌检检验室流流程6.2.2.11 脱包包：进入入无菌检检验室的的物品若若有双重重包装的的，需将将外包装装在传递递窗/缓缓冲间拆拆除后，传入试试验室。6.2.2.22 消毒毒：进入入无菌操操作室的的所有培培养基、供试品品等的外外表都应应采用适适用的方方法进行行消毒处处理，以以避免将将外包装装污染的的微生物物带入无无菌检验验室。6.2.2.33 传递递：查看看所有进进入无菌菌检验室室的器具具上的灭灭菌、消消毒标识识，是否否在有效效期内。符合要要求的经经传递窗窗传入无无菌检验验

6、室。6.2.3 人人员进入入无菌检检验室流流程6.2.3.11 更鞋鞋脱衣：在一更更区脱去去一般区区工作鞋鞋，穿上上无菌检检验室工工作鞋；脱去一一般区工工作服。6.2.3.22 洗手手：首先先用肥皂皂或洗手手液在手手上揉擦擦出泡沫沫，再用用流水连连续冲洗洗20秒秒，洗净净泡沫。6.2.3.33 更衣衣：在二二更区按按照从上上到下的的顺序穿穿戴无菌菌工作服服（包括括衣、帽帽、口罩罩等），要求裤裤子掖在在上衣里里，口罩罩掩住口口鼻，帽帽子包裹裹所有头头发。6.2.3.44 手消消毒：用用消毒液液浸泡双双手5秒秒以上或或用浸过过消毒液液的棉球球擦拭双双手。消消毒液可可用洗必必泰、新新洁尔灭灭、碘伏伏

7、、755%酒精精等。6.2.3.55 人员员进入：经缓冲冲间进入入无菌检检验室。6.2.4 人人员进入入无菌检检验室后后，进一一步用消消毒液擦擦拭工作作台面，戴无菌菌手套。7 无菌菌检验操操作要求求7.1 全过程程必须严严格执行行无菌操操作，防防止微生生物污染染。7.2 使用玻玻璃器皿皿应轻取取轻放，避免破破损，以以防培养养物扩散散。7.3 所有操操作均应应在近火火焰区进进行，且且不得有有大幅度度或快速速动作，以免搅搅动空气气中的尘尘埃微粒粒。7.4 使用金金属接种种器具时时，用前前、用后后均需灼灼烧灭菌菌。7.5 在接种种培养物物时，动动作应轻轻、准，防止培培养物溅溅出，产产生汽溶溶胶，造造

8、成污染染。7.6 操作过过程中所所有的带带菌物品品，用后后均应作作消毒、灭菌处处理。可可在检验验过程中中随用随随时放入入消毒液液缸内浸浸泡或消消毒桶内内，或在在检验完完成后经经传递窗窗传至一一般区，立即用用压力蒸蒸汽灭菌菌锅1221灭菌330分钟钟。8 培养养基制备备8.1需需气菌、厌气菌菌培养基基（硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基）的制备备8.1.1 所所用试剂剂酪胨（胰胰酶水解解）155.0gg葡萄糖55.0ggL-胱氨氨酸0.5g硫乙醇酸酸钠0.5g（或硫乙乙醇酸）（0.3mll）酵母浸出出粉5.0g氯化钠22.5gg新配制的的0.11%刃天天青溶液液1.00ml琼脂0.75gg水10000m

9、ll8.1.2 制制备除葡萄糖糖和刃天天青溶液液外，取取上述成成分混合合，微温温溶解，调节ppH为弱弱碱性，煮沸，滤清，加入葡葡萄糖和和刃天青青溶液，摇匀，调节ppH为77.10.22。8.1.3 硫硫乙醇酸酸盐流体体培养剂剂氧化层层的颜色色要求在供试品品接种前前，培养养基氧化化层的高高度不得得超过培培养基深深度的11/5，否刚需需经1000水浴加加热到粉粉红色消消失（不不超过220分钟钟）迅速速冷却，只限加加热一次次，并应应防止被被污染。8.2 霉菌培培养基（改良马马丁培养养基）的的制备8.2.1 所所用试剂剂胨5.00g酵母浸出出粉2.0g葡萄糖220.00g磷酸二氢氢钾1.0g硫酸镁00

10、.5gg水10000 mml8.2.2 制制备除葡萄糖糖外，取取上述成成分混和和，微温温溶解，调节ppH值约约为6.8，煮煮沸，加加葡萄糖糖溶解后后，摇匀匀，滤清清，调节节pH为为6.440.22。8.3 还可使使用按处处方生产产的符合合规定的的脱水培培养基，按照使使用说明明书配制制。8.4 培养基基配制后后应尽快快灭菌，避免微微生物繁繁殖。一一般采用用高压蒸蒸汽1221灭菌330分钟钟。8.5 制备好好的培养养基应在在2225保存，在3周周内使用用。8.6 培养基基的无菌菌性检查查每批配制制的培养养基均应应进行无无菌性检检查（可可与产品品无菌检检验同步步进行）。检查查时，每每批培养养基随机机

11、取不少少于5支支（瓶）培养114天，应无菌菌生长。9 稀释释液、冲冲洗液的的制备9.1 0.11%蛋白白胨水溶溶液取蛋白胨胨1.00g，加加水10000mml，微微温溶解解，滤清清，分装装后置入入压力蒸蒸汽灭菌菌器内，1211灭菌330分钟钟后，于于4保存备备用。, 分装装后置入入压力蒸蒸汽灭菌菌器内，1211灭菌330分钟钟后，于于4保存备备用9.2 pH77.0 氯化钠钠-蛋白白胨缓冲冲液取磷酸二二氢钾33.566g、磷磷酸氢二二钾7.23gg、氯化化钠4.30gg、蛋白白胨1.0g，加水110000ml。微温溶溶解，滤滤清，分分装后置置入压力力蒸汽灭灭菌器内内，1221灭菌330分钟钟后

12、，于于4保存备备用。9.3 浸提介介质：99g/LL无菌氯氯化钠溶溶液，可可直接从从有证单单位采购购大输液液。10 对对照菌液液制备10.11 无菌菌检验所所用的菌菌株传代代次数不不得超过过5代。10.22取金黄黄色葡萄萄球的普普通琼脂脂斜面培培养物，接种一一白金耳耳至营养养琼脂培培养基内内，在330335培养118224h后后备用，同时制制备0.9%氯氯化钠溶溶液加入入在6支支小试管管内，每每支试管管内加99.0mml的00.9%氯化钠钠溶液，在压力力锅内经经1211灭菌330miin备用用。将已已配好的的金黄色色葡萄球球菌培养养菌液取取1.00ml加加入第一一支小试试管内，稀释成成浓度11

13、:100的菌液液；取第第一支试试管内11.0mm l菌菌液加入入第二支支小试管管内，稀稀释成浓浓度1:1000的菌液液，同法法稀释成成浓度11:1006（每mml含菌菌量1000CFUU）即可可。10.33 采用用平皿计计数法测测定活菌菌数。11 无无菌检验验培养温温度硫乙醇酸酸盐流体体培养基基，置330335培养。改良马丁丁培养基基，置223228培养。12 无无菌检验验12.11 如产产品注册册标准中中明确“产品应应经过一一个确认认过的灭灭菌过程程”，则执执行122.1项项下各项项。12.11.1 放样每个灭菌菌批次按按已验证证的灭菌菌工艺，在灭菌菌柜内相相应的位位置放置置适量菌菌片，灭灭

14、菌后对对菌片进进行无菌菌检验。12.11.2 菌片贮贮存灭菌前、后菌片片应按菌菌片说明明书规定定条件保保存。（REVVEN公公司菌贮贮存温度度为155277）12.11.3 接种开启超净净工作台台单向层层流，在在此环境境下，分分别将灭灭菌后的的菌片成成对放入入已灭菌菌的硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基中中。同时时以未灭灭菌的菌菌片作阳阳性对照照，以未未接种的的硫乙醇醇酸盐流流体培养养基和未未接种的的改良马马丁培养养基作为为阴性对对照。12.11.4 培养阳性对照照管于330335细菌培培养箱培培养488722小时。其余硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基于于3035培养77天。改良马丁丁培养基基于233288

15、培养77天。12.11.5 结果判判定培养后，阳性对对照应有有菌生长长，阴性性对照和和被检样样品未见见需气菌菌、厌气气菌和霉霉菌生长长的为合合格。12.22 如产产品注册册标准中中明确产产品应进进行无菌菌检验，则执行行12.2.11122.2.5。12.22.1 抽样根据各自自的产品品注册标标准和相相应产品品出厂检检验规程程的规定定，对成成品库内内的产品品进行抽抽样。一一般同一一个灭菌菌批产品品检验33111个单位位供试品品。12.22.2 供试液液准备优先采用用将供试试品或其其有代表表性的各各部分直直接投放放入培养养基内培培养的方方法，如如供试品品不适宜宜直接投投放，可可按下列列方法制制备供

16、试试液，应应使浸提提介质充充分洗提提供试品品的浸提提表面，供试液液制备应应按无菌菌操作法法进行，在制备备后2小小时内使使用。根据供试试品具体体特性选选择下列列方法：a) 管管类器具具：按管管内表面面积每110cmm2流过管管内腔11ml浸浸提介质质，流量量约为110mll/miin，收收集到无无菌的容容器内。b) 容容器类器器具：按按容器内内表面积积每100cm22加入浸浸提介质质1mll的比例例，振摇摇数次。 c) 实实体类器器具：实实体类器器具按表表面及每每10ccm2加入浸浸提介质质1mll，振摇摇数次。收集上述述冲洗液液或浸提提介质于于无菌容容器中。12.22.3 接种12.22.3.

17、1 薄薄膜过滤滤法：优优先采用用封闭式式薄膜过过滤器（集菌器器），也也可使用用开放式式薄膜过过滤器。滤膜孔孔经不大大于0.45。滤滤器和滤滤膜使用用前应采采用适宜宜的方法法灭菌，或直接接采用无无菌集菌菌器。a、如采采用封闭闭式薄膜膜过滤器器，取一一副三联联式集菌菌器，将将供试液液通过集集菌仪过过滤，使使通过每每只培养养管的量量基本均均匀。然然后通过过集菌仪仪一只加加1200ml改改良马丁丁培养基基，另两两只分别别加入1120mml硫乙乙醇酸盐盐培养基基（其中中一只做做阳性对对照，内内加金黄黄色葡萄萄球菌液液1mll）。另另取一副副二联集集菌器，用同批批的冲洗洗液或浸浸提介质质1200ml通通过

18、集菌菌仪过滤滤（每只只约500ml），同法法一只加加硫乙醇醇酸盐培培养基1120mml，另另一只加加改良马马丁培养养基1220mll分别作作阴性对对照。b、如用用一般薄薄膜过滤滤器，将将供试液液过滤后后取出滤滤膜，将将其剪成成3等份份，分别别置于含含50mml硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基及及改良马马丁培养养基的容容器中，其中两两份作检检验，一一份作阳阳性对照照。12.22.3.2 直直接接种种法：适适用于一一次性使使用注射射针、一一次性使使用静脉脉输液针针（包括括输液器器、输血血器、注注射器配配套使用用注射针针）。a、敷料料供试品品：取规规定数量量，每个个包装以以无菌操操作拆开开，于不不同部位位

19、剪取约约1200mg或或1cmm3cmm的供试试品，接接种于各各管足以以浸没供供试品的的适量培培养基中中。b、无菌菌针头：直接投投入含115mll以上硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良良马丁培培养基的的容器中中。c、一次次性使用用的材料料：拆散散或切成成小碎断断，接种种于各管管足以浸浸没供试试品的适适量培养养基中。供试品按按规定量量分别接接种至各各含硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基及及改良马马丁培养养基的容容器中，其中一一份作阳阳性对照照。每个容器器中培养养基的用用量应符符合：接接种的供供试品体体积不得得大于培培养基体体积的110%，或培养养基的装装量足以以浸没供供试品。每管培养养基的最最低用量量硫

20、乙乙醇酸盐盐流体培培养基每每管装量量不少于于15mml，改改良马丁丁培养基基每管装装量不少少于100 mll.12.22.4 培养、观察上述含培培养基的的容器分分别置规规定温度度的恒温温培养箱箱中，除除阳性对对照管培培养488722小时外外，其余余管培养养14天天。培养养期间应应逐日观观察并记记录是否否有菌生生长。如在加入入供试品品后、或或在培养养过程中中，培养养基出现现浑浊，培养114天后后，不能能从外观观上判断断有无微微生物生生产，可可取该培培养液适适量转种种至同种种新鲜培培养基中中或划线线接种于于斜面培培养基上上，细菌菌培养22天，真真菌培养养3天，观察是是否再出出现浑浊浊或斜面面有无菌菌生长；或取培培养液涂涂片，染染色，镜镜检，判判断是否否有菌。12.22.5 结果判判断培养结束束后，阳阳性对照照管应有有菌生长长，阴性性对管应应澄清。否则，就判结结果无效效。所有供试试品管均均澄清，或虽显显浑浊但但经确证证无菌生生长，判判供试品品符合规规定。若供试品品管中任任何1管管显浑浊浊并确证