医学机能实验学：离体蛙心灌流

1、离体蛙心灌流Effect of drugs on animal heart in vitro北京协和学院基础学院闫 莉奥托 洛伊维(Otto Loewi) 1921年做了个奇妙无比的梦 心脏受心迷走神经与心交感神经的双重支配，且两者都有紧张性活动。 在动物实验中,如同时刺激心迷走神经和心交感神经,常出现心率减慢效应。Otto Loewi 1921年的蛙心实验原理示意图 神经末梢通过神经冲动向其所支配的器官传递信息 神经冲动化学传递学说 /Physio7/1d.html背景知识 心脏具有自动节律性。 离体心脏用理化性质近似有血浆的生理溶液（任氏液）进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可

2、维持较长时间。心脏正常节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，因此改变灌流液成分，则可引起心脏活动的改变。心脏细胞生物电活动的基础是Na+、K+、Ca2+等跨膜离子流。背景知识调节心脏活动的神经、体液因素对心脏活动的直接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应受体结合，导致心脏活动的增强或减弱。乙酰胆碱与去甲肾上腺素就是通过这种方式发挥作用。 学习离体蛙心的灌流方法。 观察灌流液中几种离子(K+, Ca2+)浓度的改变, 相应受体激动剂和阻断剂对心脏活动的影响。实验目的实验材料实验动物 蟾蜍实验试剂与器材 RM6240生物信号处理系统、计算机、张力换能器、蛙心夹、木质试管夹、铁支架、蛙心插管、玻璃

3、分针、蛙板、滴管、蛙类手术器械、烧杯、棉球、棉线、滑轮。 任氏液、0.65%的NaCl溶液，1%的KCl溶液，1%的CaCl2溶液，1:10000的肾上腺素，1:10000乙酰胆碱和1:2000阿托品。蛙心结构正面观背面观标本的制作1、将毁损脑脊髓后的蟾蜍固定在蛙板上， 从腹上部正中至两前肢剪开皮肤，打开胸腔，暴露心脏。2、用眼科剪剪开心包膜。3、用蛙心夹夹住心尖部（舒张期）。4、插管： 在左、右主动脉干下方穿一线，静脉窦与腔静脉交界处做一结扎，结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦。 在总主动脉下穿一线，打活结(用于固定心脏插管)；左侧主动脉穿一根线并结扎之。 用左手提起结扎线，右手用眼科剪在左侧

4、主动脉距分叉部3mm处剪一“V”型口。将盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指将套管堵住，以防套管中的任氏液流出)从“V”型口插入动脉球底部，然后稍后撤套管，再转向心室中央方向插入，可见液面随心搏升降即可。 将分支前主动脉下的松结扎紧，并固定在套管的小突上。 小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支及腔静脉，将心脏游离。连接装置1、将蛙心插管用木夹子固定在铁三脚架上。2、在木夹子的下方，将张力传感器、滑轮固定在铁三脚架上。3、将夹在蛙心尖上的蛙心夹上的丝线系在张力传感器的簧片小孔上。线的松紧适度。4、张力传感器与RM6240B通道1相连。打开循环实验蛙心灌流，开始实验。观察项目 正常的蛙心搏动曲线用0

5、.65%NaCl替换任氏液在任氏液中滴加1%CaCl2 1-2滴在任氏液中滴加1:10000肾上腺素1-2滴在任氏液中滴加1%KCl 1-2滴在任氏液中滴加1:2000阿托品 1-2滴先加入1：2000阿托品，再加入1:100000乙酰胆碱注意事项关于静脉窦： 避免过度牵拉静脉窦，否则离体后的心脏可能出现搏动异常； 注意保留静脉窦的完整性，为防止误伤静脉窦，剪取心脏时可将剪尖朝下进行剪切；关于蛙心插管： 插管内液平面应保持一致。 蛙心插管不要插得太深，防止损伤心脏。药物处理时需要注意 各药品的滴管分开使用，做好标记，不能混淆； 每次给药前要有正常心博曲线和给药标记； 药效出现后立即将药吸出,并冲洗干净等心脏搏动恢复正常以后再进行下一项实验。可能遇到的问题注意常用任氏液湿润蛙心表面。换能器头段保持向下倾斜，防止进水。蛙心离体后若搏动不良，蛙心管内液面不波动，多为固定线