创新类中期进度报告

1、华技大学中期进项目名称：MMP-1 癌放射性肺损伤的分析项目华技大学中期进项目名称：MMP-1 癌放射性肺损伤的分析项目性 男2010教授性 男2010教授医 分 否否是过对非小细胞癌 放射性治疗后肺损伤情况与MMP-1启动子单核苷酸多态点，以及 ，学术上 一篇高质量SCI应用于非小细胞肺癌肺部放疗后肺损伤的预后分析，通过发现遗传多态性靶点和标志物为临床非小细癌的精治以及放疗后提供姓 10 级八年样本搜肿瘤学博技术指肿瘤学博数据分肺癌是人类最常见的 之一，其 率已位居全部 死因的首位1。放射治疗是非小细胞肺癌重要的局部治疗 ，但放射线在杀灭肿瘤细胞的同时，不可量造成极大影响，甚至可导致患者 。

2、既往对放射性肺损伤的研究主要局限于临床和放射物理参数方面,但这些参数仅占放射性肺损伤 的三分之一5。同样的照射方法MMP-1是一类依赖金属锌离子的蛋白水解酶，对细胞外基质(ECM)的降解、组织重相关的蛋白水解酶，与许多 的发生密切相关。MMP-1 已经证实在一些炎症反应以及 化病理过程中高表达，发生机制与反射性肺损伤类似，其表达的量与启动子的单核苷酸多态性相关，但在非小细胞肺癌患者的体内，MMP-1 (一) 项目背(一) 项目背既往对放射性肺损伤的研究主要局限于临床和放射物理参数方面,如患者 、吸烟状3,4。但这些参数仅占放射性肺损伤 的三分之一5。同MMP-1 全称matrix metall

3、opeptidase 1，基质金属蛋白酶1，位于第11 号全长8.2kb，mRNA 全长1,973nt，共有10 个外显子，编码由469 个氨基的发生密切相关8-10。MMP-1 已经证实在一些炎症性位点：-1607（rs1799750，519AG (rs1144393)，422AT (rs475007)， 340 AG(rs514921)320TC (rs494379)MMP-1 的表达相关7-9，但在非小细胞肺癌患者的体内，MMP-1 单核苷酸多态性是否会影响反射性肺损伤的易感性还鲜为人知，明确单核苷酸的多态性与放射性肺损伤的靶向位点，对于肺癌 放疗的预后的 有很大的临床意向位点，对于肺癌

4、 放疗的预后的 有很大的临床意义。本研究通过对非小细胞肺癌放疗后的 的肺损伤发生率以及 MMP-1 启动子位点MMP-1MMP-1 启动子单核苷酸多态性在非小细胞肺癌放射性肺损伤的 分析的价值。(二) 立项依1、(二) 立项依1、研究证实放射性肺损伤的发生不仅与临床和放射物理参数方面,如患者2MMP-1对细胞外基质(ECM)3、MMP-1 已经证实在一些炎症反应以及4MMP-1 表达的量与其启动子的单核苷酸多态性相关，不同人群由于多态性的差异会使(三) 项目目的与创新1、探索MMP-1的表达量在非小细胞肺2MMP-13、 分析比较不同MMP-1 启动子单核苷酸多态性分子靶点在不同非小细胞肺癌

5、后评(四) 国内1、 目前对放射性肺损伤的研究主要局限于临床和放射物理参数方面,如患者 、吸烟状(四) 国内1、 目前对放射性肺损伤的研究主要局限于临床和放射物理参数方面,如患者 、吸烟状2MMP-1 已经证实在一些炎症反应以及 化病理过程中高表达，如：风湿性动脉炎以及肺 化等，发生机制与反射性肺损伤类似。3MMP-1 -1607（rs1799750， 519AG (rs1144393)422AT (rs475007)， 340 AG (rs514921)， 320TC (rs494379)MMP-1 的表达相关4MMP-1 单核苷酸多态性是否会影响反射性肺损伤的易(五) 相关技术的未来发展趋

6、1、 通过发现遗传背景差异对放射性肺损伤的影响在临床中对于放疗 (六) 市场分1MMP-1 启动子单核苷酸多态性与放射性肺损伤相关的分子靶点设计的靶点药物用于预2(七) 研究基础及条件（包括已具(七) 研究基础及条件（包括已具备的研究条件和需要其提或须新添置的研究设备等3 (八) 研究内1、探索MMP-1的表达量在非小细胞肺2MMP-13、 分析比较不同MMP-1 启动子单核苷酸多态性分子靶点在不同非小细胞肺癌2CT2CTX3CommonTerminologyCriteriaforAdverseEvents4.04HapMapHCBdata 数据库的使用 5theMassArraysystem

7、检测 型 6PCR 扩增技术7SpectroCHIParray9ELISA10、SPSS统计的使(十) 预期成12MMP-134一篇高质量(十一) 进度(十一) 进度 材料准备与预实验 临床实验20161月-2016 12 月间接受放射性剂量45Gy 的非小细胞肺癌的 ，肿瘤科放疗室医生对所有 放疗后 1 个月进行评估，第一年，每三个月进行一次随访,以后每六 Common Terminology Criteria for Adverse Events 4.0 评分法进行损伤分级。 分子生物学实验通过 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-15个位点（rs

8、1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位点在HapMap HCB data 数据库中差异有统计学意义， 型通过 MassArray system检 估，DNAPCRSpectroCHIParray来检测单核苷酸多的肺癌领近组织，固定后包埋切成4mm厚度，对观察部分脱蜡后进行一级抗体孵化，使用抗 MMP-1 抗体进行靶区免疫组化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 显微镜下观察染况，并使用Image-Pro Plus 6.0C.ELISA 分析：放疗 3-6 个月后同一相对时间选取队列研究中满足条进行 MMP-1 蛋白ELI

9、SA定量分析，收集数据后使用SPSS统计进行分析 撰写(十二)已完(十二)已完成的进度计1、实验前准备（已完成 材料准备与预实验 临床实验（已完成20161月-20166月间接受放射性剂量45Gy的非小细胞肺癌的 （n=84，肿瘤科放疗室医生对所有 放疗后 1 个月进行评估，第一年，每三个月进行一次随访,以for Adverse Events 4.0 评分法进行损伤分级。 分子生物学实验（通过 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-12个位点（rs1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位点在HapMap HCB data 数据库中差异有统计学意义， 型通过 MassArray system检 估，DNAPCRSpectroCHIParray来检测单核苷酸多阳性位点 免疫组化分析（部分完成14 位 的肺癌领近组织，固定后包埋切成 4mm 厚度，对观察部分脱蜡后进行一级抗体孵化，使用抗 MMP-1 抗体进行靶区免疫组化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 显微镜下观察染 况