AgilentLC色谱及色谱柱疑难解答

1、 如何避免基线飘移？后使用新溶剂。 向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC 级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。如何减少基线噪音？处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。 连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵， ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检伦科技公司联系。在中国，请拨打 800 820 3278。什么原因导致基线毛刺？这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认如果毛剌 800 8203278。什么原因导致基线波动？及湿度稳定，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细

2、管进行隔热保温。我的色谱图上的峰有拖尾现象。如何改善峰形？可能的原因： 1. 系统内的死体积大2. 样品在色谱柱上有吸附3. 色谱柱适用时间很长建议用户： 1. 尽量减少流动相管线的死体积，确保管线接头的圈有可能不一样，尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。2. 使用洗脱更强的流动相3. 更换新色谱柱如何排除流动相中的气泡？如何排出流动池中的气泡？避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动

3、相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。 直到基线上看不到毛刺为止。气泡就应该清除掉了。把甲苯（）用作衡量 GPC色谱柱效率的标准是否恰当？ GPC 色谱柱填料的所有细孔中。填充效果如何。 这些是衡量效率时需要了解的内容。大多数制造商通常推荐用这个样品来实验这些色谱柱的效率。还能通过其它标准来确定 GPC 色谱柱的其它特征，例如排斥体积。HPLC 色谱中的峰板（peak plate）有什么作用？peak ）可以让您比较不同色谱柱的效率，衡量方法是对比色谱图中的峰宽和保留的峰宽。 一般而言，对于相同的保留时间，峰越窄，色谱柱的效率越高，效率越高，色谱柱peak ）。 HPLC 仪器一

4、般通过测量峰宽（通常是半高）来确定色谱板或效率，采用的公式如下：N = efficiency = plates = 5.54(tR/w1/2)2w1/2 = peak width at half-height in min.tR = retention time in min.色谱柱制造商会提供色谱柱的效率，通常包含在色谱柱报告中。有关色谱板和色谱柱效率与分离度和被分析物之间关系的详细 Practical HPLC Method Development 微粒 HPLC 方法开发），作者是 Lloyd R. Snyder、Joseph J. Kirkland和 Joseph L. ， Wiley

5、-Interscience 1997年。HPLC 中为什么会出现有节奏的波浪状基线？这通常不是色谱柱的问题。 最可能的原因是泵系统出了故障。a) 通常您的泵会有两个活塞和密封圈。 其中一个密封圈可能比另一个磨损得更厉害，这会导致流速和压力发生非常有节奏的变化，检测器同样能看到这个变化。 通过改变流速，可以确认泵密封圈是否已磨损。 如果泵密封圈已磨损，基线波动频率（以时间为单位）会与流速的增加降低成比例。 解决方法就是更换泵密封圈。b) 如果您有多个泵系统（二元、三元或者四元），那么可能是泵密封圈出了问题，但也可能是混合不充分或比例阀出了故障。建议）， 比例阀出故障的话就呼叫维修中心。足以证明泵

6、出了故障。 通过上面介绍的流速实验可以确认是否泵出现故障。 如果流速变化时，信号波动频率（以时间为单位）没有发生变化，那么可能是泵出了故障。什么时候会看到伸舌峰（peak ）？ 如何排除故障？伸舌峰（peak ）可能由多种情况引起。 最有可能导致peak 在这种情况下，通常会发现峰保留时间稍稍缩短。 这也是最简单的检查方法，因为只要注射少量样品并检查峰形就能发现问题。但是至少还有其它四种原因导致伸舌峰（peak ）。 这四种原因分别是色谱柱沟流、被分析物和硅之间的离子干扰、被分析物在流动相中溶解性差以及流动相和键合相之间的湿润性问题。 色谱柱沟流会导致所有的峰都变为伸舌峰（peak ），或者至

7、少让色谱图中最大的峰变成伸舌峰（peak ）（如果其它峰过于小的话）。 如果出现这种问题，需要更换色谱柱。 用一根新色谱柱来研究这个问题。增加缓冲液离子强度或者改变流动相的 pH值，通常能改善引发伸舌峰（peak ）的离子相互作用。 增加离子强度能够降低硅和离子被分析物之间的相互作用，而改变 pH值能起到同样的效果。需要评定溶解性，尽力提高被分析物的溶解性并评估最后的色谱图。 例如，可以增加样品的声处理时间并把它重新注入或者让它溶解在溶剂中（在该溶剂中样品具有很好的溶解性），然后稀释并注入流动相。 此外，所有怀疑出现溶解性问题的样品都应进行过滤。 还可以通过脱机方式混合样品和流动相，观察在流动

8、相中是否明显溶解。湿润性是指流动相完全渗透键合相的能力，在这种情况下，被分析物能与所有的键合相发生相互作用。 如果 C18 色谱柱结合使用高度水性的流动相，可能不会到达完全的湿润性。 键合相会自己折叠起来。 结果就可能会丢失保留时间并导致峰变形。 如果可能的话，增加流动相中的有机量并重新评估峰形。 否则，您可能需要考虑选择专门为极高水性流动相而设计的色谱柱。这些是导致伸舌峰（peak ）的主要原因及其解决方法。请注意，这些问题可能会导致峰拖尾，解决方法与伸舌峰（peak ）的解决方法相同。HPLC 样品过滤得最好的膜过滤器是什么?再生纤维素 过滤器时推荐的 HPLC样品过滤器，因为这种过滤器提

9、供能防止样品过滤问题的单一、近乎通用的膜过滤方法.安捷伦的再生纤维素注射器过滤器产品有如下很多优点的回收率.2. 提供一种类型的过滤器取代多种滤膜的方法效率不降低.3. 对于生物样品，在流行的示售膜中安捷伦的膜过滤器具有最低的蛋白键合性能.4. 经过 HPLC 分析验证，具有低的可萃取性，包含一份分析证明.如何选择液相色谱保护柱？保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞及在色谱分析柱不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里，将分析柱和与

10、其配套的保护柱列在一起。色谱图上出现鬼峰。如何消除？可能的原因： 1. 上次进样遗留组分产生2. 有污染3. 有气泡4. 色谱柱问题5. 保护柱失效建议用户： 1. 做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。2. 洗脱原色谱柱中的原有污染。3. 为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。4. 更换色谱柱。5. 更换保护柱。6. 检查流动相纯度。7. 检查样品中的其他成分。为什么 HPLC分析的样品要过滤?1. 样品过滤保护您的色谱柱, 特别是新的 5微米以下粒径填料的色谱柱, 毛细管柱和柱入口筛板, 以防止样品中的颗粒物堵塞色谱柱. 延长柱寿命.它防止您的进

11、样阀组件被样品颗粒物损坏、刻划或增加磨损.最小化仪器的停机时间.怎样知道液相分离对流动相的 pH值敏感？测试方法对流动相 pH值变化的灵敏度。不是所有的组分，也不是所有的方法对流动相的 pH值敏感。中性组分的保留不受流动相 pH值的影响。然而，离子化的组分的保留碱性的和酸性的组分在 pH值变化时明显地变化。碱性组分的保留变化最明显，pH值超过 5化在 pH值 3到 5之间。因此，如果有碱或酸性组分，则建立一个健全的方法，需要在几个不同的 pH值之间，分别作出评价。在保持所有其它条件不变时，改变流动相的 pH值，并且测试对分离的影响。如何减小方法对 pH值敏感的复制问题？1. 尝试在低的 pH,

12、 如果你正在分离碱性组分，使流动相的 pH值低于 3，此时因 pH值的小的变化，其保留受影响很小。通常要使分离不敏感，改变流动相 pH值时，至少不超过分析物的 pKa 的 1个 pH单位。2. 选择流动相 pH冲液的 pH pH值相匹配。 也就是说，使用适当含量的缓冲液，通常为 25到 50 mM, 具有良好的缓冲能力。3. 动相的 pH值。例如反相 HPLC色谱柱的推荐再生步骤是什么？1. 取下色谱柱，然后重新连接到色谱仪上，让液体气体反方向流过色谱柱。2. 用 HPLC 级水冲洗掉盐缓冲液。 以 1毫升分钟的速度把 25 毫升水泵入色谱柱。3. 用 25 毫升异丙醇冲洗色谱柱。4. 用 2

13、5 毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。5. 用 25 毫升正己烷冲洗色谱柱。6. 再次用 25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。7. 用 25毫升异丙醇冲洗色谱柱。8. 按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上。 用不含缓冲液的流动相冲洗色谱柱，然后重新倒入缓冲液。9. 用 25 到 50 毫升流动相平衡色谱柱。10. 注入标准物或样品，检查性能是否恢复。注释： 对于某些污染色谱柱的残留化合物，二甲基甲酰胺正相 HPLC 色谱柱的推荐再生步骤是什么？1. 按相反的流动方向，把色谱柱连接到色谱上。2. 用 50毫升 50:50 甲醇：氯仿（methanol:chloroform）溶液冲洗色谱柱。3. 用 50毫升

14、乙酸乙酯（ethyl acetate）冲洗色谱柱。4. 按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上。5. 用 50 毫升流动相平衡色谱柱。6. 注入标准物或样品，检查性能是否恢复。小心： 总的来说，在考虑更换滤头之前，用适当的溶剂清洁和反冲 HPLC色谱柱值得一试。 总是存在这样的风险，就是更换此 0.5?m串联过滤器捕获微粒材料并且使用适当的强溶剂来清洗色谱柱。如何正确清洁 GPC HPLC 色谱柱（安全的方法）？一的推荐流速进行冲洗（让压力保持在推荐最大值以下）。 首先，选择一种可以溶解色谱柱中污染物的溶剂。 大多数 GPC 色谱柱是 PS-DVB 兼容性。 与常规洗提溶剂相比，许多清洁溶

15、剂具有较高的黏性，因此必须采用较低的流速并且需要特别注意压力。阴离子样品能吸附到 PS-DVB 上，如果这些样品污染了您的GPC色谱柱，那么建议您使用含盐的清洁溶剂。 查看这种色谱柱适合使用哪类盐。 在某些情况下，根据吸附材料的极性，清醋酸）或碱性物（三羟乙基胺）（检查 pH范围）或一些水改性后的有机溶剂。 如果更多的疏水性材料被保留，推荐提高温度并使用适当的有机溶剂。 您需要再一次核对色谱柱允许的最大温度范围。如果仔细地进行清洗，色谱柱不会因为溶剂转换而导致性能下降。哪类色谱柱会在高于 pH 7的酸碱度环境下溶解？市面上销售的许多硅基 HPLC填料会在 pH 7 条件下溶解，因为硅会在 pH

16、 7 条件下溶解。因此，安捷伦开发出一种技术，可以显著降低硅溶解并且扩展硅基色谱柱的可用 pH值范围。ZORBAX Extend-C18 可以在高于 pH 8 （甚至高达pH ）的条件下使用。 双齿键合是增强稳定性的关键，同时确保只有硅才能提供的高效率。如何估计是否出现色谱柱塌陷？首选检查您的方法并确定色谱柱的操作 pH值是否超过推荐标色谱柱塌陷。此时需要考虑样品注射溶剂以及流动相。如果出现色谱柱塌陷，您会看到色谱图中的每个峰值上，峰形都会发生变化（峰拖尾、加宽或分叉）。色谱柱塌陷通常不会只让色谱图中的一个峰值发生变化。此外，通常也不会导致分析物保留度发生变化。您还可以转动色谱柱，如果出现色谱

17、柱塌陷，那么峰形也应发生变化。是排除色谱柱故障时最后才能采取的方法。如果色谱图中的一个峰出现拖尾，但是其它峰正常，可能出现什么故障？由于我不了解样品的化学性和有关流动相或色谱柱的详细情况，所以我很难回答这个问题。峰拖尾可能由多种原因引起，在回答您的问题之前，我想问您几个有关样品的问题。由于您色谱图中大多数峰的形状都是完好的，只有一个峰出现拖尾，我猜想色谱柱和样品的化学性引起二次反应，从而导致峰拖尾。更改流动相或选择另一个 HPLC 色谱柱能够减少这些二次反应。能否用一些洗涤剂来清洁 HPLC色谱柱？不推荐用洗涤剂来清洁反相（）HPLC 色谱柱。 离子洗涤剂对试剂。如，C18 反相色谱柱柱的键合

18、相能牢固地保留洗涤剂的长碳链), 因此很难清除洗涤剂。有些制造商说可以倒过来使用（较新的）色谱柱，这样能去从色谱柱前面清除堵塞物？ 这是不是常规推荐方法？或者是否取决于色谱柱？HPLC 色谱柱比以前更有效并且填充得更好，因此，通常建议大多少倒相和正相硅基色谱柱采用这个方法。粒，但是并不是每次都起作用。 由于这不需要打开色谱柱，所以值得一试。塞色谱柱的微粒不会从 HPLC系统进入，或者您可以把滤头插到色谱柱的后端，但这可能无法再放回去。 还可以把色谱柱倒这样做有一个好处，就是色谱柱的其余部分不会受污染物影响。在这个过程中，不要把色谱柱连接到检测器上。H3PO4 清洗 HPLC 色谱柱有什么目的？

19、经证明，磷酸洗涤剂能有效减少由于样品与 HPLC系统中的金属络合而导致的拖尾。一般建议用 1% 磷酸来清洗系统和色谱柱，以此消除这种拖尾现象，这很有效。在安捷伦 ZORBAXStableBond 反相 HPLC 产品上使用这些推荐的清洗条件会取得非常理想的效果。StableBond HPLC 色谱柱在低 PH条件下性能非常稳定 - SB-C18 色谱柱在 0.8 PH值和 90度条件下可N或 O原子上的孤对电子能否与金属螯合并形成 5 或者 6元环。金属络合物是一个普遍被忽视的峰拖尾成因，每个 HPLC系统中都存在金属。能否提供一种与我使用的 LC 色谱柱相同的色谱柱？保留时间。虽然这里提供了

20、一些不同厂商的色谱柱的参考数据，提供以下信息：1. 分析物的详细信息（样品的成分和要分析的成分）；2. 是否可以接受液相色谱条件的改变；3. 能否对您的方法进行一些调整。如果您不能接受分析条件和或保留时间的改变，则应该继续使用目前的色谱柱。如何选择液相色谱保护柱？保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞及在色谱分析柱不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离

21、有什么影响？如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。 如果柱长着柱长增加，柱压也线性地增加。 以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例： 一个装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱可生成 6000 块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由 10um 减小到5um 12000 成 12000 6000 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱高两倍。改变色谱柱直径对液相色谱分析有什么影响？如果色谱柱直径减半，则灵敏性增加四到五倍（假设进样量不 2.1mm 的色谱柱比进样到内径为 4.6m

22、m 的色谱柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要线数均与色谱柱内径的减小无关。改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔 4.6mm 10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为1.5ml/min 时，塔板数最多。什么原因导致柱效（理论塔板数）下降？与色谱柱有关的原因：色谱柱出现间断 使用类似的填料填充空隙或更换色谱柱保护柱无法再用 更换保护柱其他可能的原因： 柱外体积大、进样的样品量大、样品溶剂强度比流动相大、流动相的改变。什么原因导致液相色谱

23、分析的神秘峰？与色谱柱相关的原因：原因色谱柱污染 清洗或更换色谱柱保护柱失效 更换保护柱与色谱柱无关的原因： 流动相不纯、样品里有其他成分、系统里有气泡、电路问题。如何避免峰拖尾和峰分叉？与色谱柱相关的原因：色谱柱填料有问题 反冲色谱柱或更换进样口过滤片色谱柱出现间断 更换色谱柱或填充空隙保护柱失效样品分布差改进色谱柱进样口的设计与色谱柱无关的原因： 超柱体积过大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲浓度）改变。当购买开更新不同批号的色谱柱后如何对分析方法进行测试并确认可用此柱？通常在条形码的下面。批号通常以字母B头，后面是 5 位阿拉伯数字。例如，下面示例中的色谱柱批号为 B99091

24、。 如果找不到包装盒，则查看色谱柱标签上的序列号。要从序列号来确 HPLC 色谱柱技术支持的电话，号码为 800-820-3278。他们会请公司生产部门来查询批号，同时确定其它哪些批号的色谱柱可用。 获得所需的批号或知道您的批号后，可使用以下步骤进行订购：1.2.通过安捷伦科技公司或首选的经销商进行订购。使用特殊的部件号 899999-888, 该号码表示此订单是专用色谱柱。3.括通用部件号。4.不能用。示例说明 部件号 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色谱柱，4.6mm x ，(963967-902) 除了批号为 B99091 和B99079 的专用色谱柱 用于方法

25、确认目的的色谱柱StableBond SB-C8 和 Rx-C8 色谱柱有何不同？SB-C18 与Rx-C18 呢？StableBond SB-C8 与 Rx-C8 没有什么区别。这两种色谱柱是一样的。Rx-C8 色谱柱首次将空间位阻保护键合到纯羟基硅酸 pH 值较低生成的峰形较好。键合剂是二异丙基辛基硅烷。二异丙基化合物侧链比较大，因此可以对键合相产生位阻保护以防止被酸水解。空间位阻保护的键合相不断发展，逐渐形成了包含 SB-C18、SB-C8 SBSB-CN 和 SB-C3 众所周知的 StableBond 系列色谱柱。为了保持一致性，将SB-C8 加入到此系列中，但是没有取消 Rx-C8

26、，这主要是为了方便目前使用 Rx-C8 的用户。什么原因导致反相 HPLC 的峰拖尾，应采取什么措施？电荷的碱性化合物与带负电荷的色谱柱表面硅羟基之间的离子交换。当流动相的 pH 值大于 4.5-5.0 时， 色谱柱表面的硅羟 pH 值小于 4 的缓冲流动相。由于硅羟基的活性和离子化会降低，因此选择更换新的高纯羟基化硅胶色谱柱也会减少峰拖尾。ZORBAX 色谱柱中使用这类硅胶的有：StableBond 色谱柱、Eclipse XDB 色谱柱、Bonus-RP 和 Extend-C18 色谱柱。这StableBond(SB) 色谱柱在低 pH pH 值的 pH 值为 5-9 时，Eclipse

27、XDB色谱柱是减少峰拖尾的首选色谱柱。这类色谱柱有双重封端，因此它可以通过覆盖色谱柱表面上尽可能多的残留硅羟基以消除 pH 值区，Bonus-RP 色谱柱也是一个减少峰拖尾的不错选择。Bonus-RP形。这类色谱柱可以在 pH 值为 2-8 的条件下使用。Extend-C18 用于高 pH pH 值为 11.5 的条件 pH 羟基的相互作用减小，峰拖尾也减少。 认真选择流动相也可以减少峰拖尾。缓冲流动相 50 mM) 可减少峰拖尾，同时首选低 pH 值 (pH 3) 流动相。这还会产生更多的可再生色谱。如果需要的话，可以添加一些流动相添加剂如三乙胺 (TEA) 以减少碱性化合物的峰拖尾。TEA

28、 相当于竞争物，占据硅羟基的位置，用于消除分析物与残留硅羟基间的相互作用。但在低 pH值时很少需要这类添加剂，仅在中间 pH 值时才偶尔需要。 如果遇到酸性化合物的峰拖尾，处理过程相同。降低流动相的 pH离子强度。最后，可以通过向流动相中加入竞争的有机酸，我们已经使用 0.1% 三氟乙酸 (TFA) 得到了比较好的结果，并且这酸性和碱性物质的峰拖尾。 现在大多数色谱柱使用球形粒子，因为这种使用球形粒子填充的色谱柱具有更高的效率。因此，从选择一个球形粒子色谱柱开始。分析分离最常用的粒子大小为5um，这是因为这种粒子比较容易使用，但现在更佳的选择为3.5um 效率，可以在更短的分析时间内进行分离。

29、如果分析时间对于您很重要，则可以考虑选择 ZORBAX 快速分析 (3.5um) 色谱柱以缩短分析时间。这个 4.6 x ，3.5um 的快速分析色谱柱与 4.6 x 250mm， 5um 间却缩短 40%。如果想进一步缩短分析时间，则还可以选择其它时间更短的快速分析色谱柱（、30mm 和 寸小于 100 的色谱柱可以用于分析分子量小于 4000 的小分 300 的色谱柱进行分析。另外，一些具有大的多环刚性结构的小分子最好采用孔尺寸为 300 的色谱柱。选择合适的孔尺寸非常重要，迅速地进出孔时，才能获得最佳的停留时间和峰宽。如何判断是否需要保护柱呢？保护柱用作一个捕集器，捕集多种颗粒物及样品和

30、 HPLC 系统本身带来的强保留组分，它直接安装在分析柱前面。使用保护柱是延长分析柱寿命（有时能提高 3 倍）的比较划算的途径。尤其是分析生物或环境样品时，建议使用保护柱。同时，当分析药物和农用化学品活性成分、中间体样品和配方样品时，保护柱也是很有用的。 为了最大程度发挥保护柱的优点，在保护柱过载保护柱更换频率的向导，另请参见此处。 然而，保护柱并不是不受填料、样品、泵密封圈和进样器阀磨损污染。制备柱嵌入式过滤器应安装在保护柱前（如果没有保护柱，直接安装在分析柱前）。Agilent 出售一种死体积很低的嵌入式过滤器，它甚至可以用在快速分析 HT 1.8 微米色谱柱前，仅损失很少的性能。如何决定

31、何时更换保护柱？损时或样品分析数量增加，而保护柱需要更换。 保护柱的更换频率通常根据经验而定，按照每个方法样品类型综合考虑，但是许多分析人员会在完成一定数量的样品分析或测试一些柱的 10% 10% 的柱效（塔板数）后更换保护柱。HILIC 是怎样工作的？HILIC 在二氧化硅方面的机理 极性分析物从吸附性含水涂层分配进去又分离出来。 硅烷组分作正离子交换 取决于 pH 值 ) 这些机理相结合建立起增强了的极性保留。 任何这些机理的缺失将使得没有极性保留。 如果发货时含有的溶剂被更换，Agilent标准的Zorbax 柱可以用于 HILIC 应用。 从非极性的 Heptane 到极性更强的溶剂都

32、可用于 HILIC 应用。 可能使用的如何清洁 C4 HPLC 色谱柱？与 RP 相色谱柱差不多，如果您使用标准流动相条件来分离小分子，我再介绍一些常规使用说明。 如果分离肽和蛋白质，或处。什么是 HILIC? HILIC 即为亲水性色谱，于 1990 年从标准的正相色谱中分离出来，成为一个术语(Alpert J.Chromatography, 499 (1990)177-196) HILIC是正相色谱的一种变种。 对极性很大的物质比反向柱提供了更大的保留。 固定相是一种极性材料，如二氧化硅，cyano, amino, diol,等。 流动相是含有少量的水成物极性溶剂的有机溶剂。 极性溶剂象

33、Acetonitrile, alcohols, water) 提供填充较短的大口径（7毫米）色谱柱是否能降低柱外体积？只要您愿意在较高的流速下进行操作。如果以 1.0 毫升分钟的速度在 4.6 2.3 毫升/分钟的速度可获得与使用 7.0 毫米直径色谱柱相同的线速度。溶剂废液可能成为一个问题。高分离色谱柱比 5 色谱柱更容易发生故障。 这是不是真的？不，这种说法不正确。高分离色谱柱 与 5 和 250 mm 色谱柱一样耐用。 使用小微粒容易发生色谱柱故障主要由两个原因引起。 但是在色谱柱顶部使用标准的 2 m滤头时，情况并非如此。 由于仔细控制微粒大小和使用 3.5 m 微粒，ZORBAX 高

34、分离度色谱柱不会包含任何 2 m小的微粒。 这意味着，可以在色谱柱上使用标准滤头，这样高分离度色谱柱就不会比 5 m 微粒色谱柱更容易发生堵塞。从而引发峰加宽和脱尾。 确实，3.5 m 微粒色谱柱比 5 m 色谱柱的操作压力稍高，但是 ZORBAX 微粒足以经受住这些增加的压力。 ZORBAX 微粒在 psi 下填充，在常规使用中能够经受高达 5000 psi 的压力。 高分离度 4.6 x 150 3.5 m 色谱柱通常在低于3000 psi的条件下操作，因此在使用 ZORBAX高分离度色谱柱时，柱床不会压缩。因此，在使用高分离度色谱柱时 ，神奇的 ZORBAX微粒和标准 2 m 色谱柱滤头

35、可确保较长的色谱柱使用寿命。步缩短分析时间。是否可以通过某种普通的色谱柱实验来跟踪 HPLC色谱柱的性能？应该多长时间执行一次这种实验？ HPLC色谱柱配套提供的 QC测试。 通过对比样品中峰的效率、保留谱柱的性能是否发生变化。 这些实验还能告诉您色谱柱的哪些性能发生变化，因为我们用相同的方法来诊断色谱柱故障。 保留时间出现明显变化表明键合相丢失，峰宽效率和压力出现明显变化表明色谱柱受污染。 峰宽和效率急剧减少表明色谱柱塌陷。大多数制造商采用类似的溶质和流动相实验条件来对他们的色谱柱进行 QC实验。 然而，不同的键合相需要改变有机改性剂的用量，以便获得适当的保留时间。 QC应用于特定的项目。

36、这样您就能了解色谱柱在系统上的性能，然后再开始注射样品，这样能避免发生问题。 如果出现问题，利用这个 QC实验来检查 HPLC系统和色谱柱是否运行良好。不再使用色谱柱时，清洗色谱柱并进行 QC实验。 不管出于何该先对色谱柱进行 QC实验，然后再注射样品。能否把安捷伦 1100 系列 HPLC系统应用于交替柱再生？可以。 您需要升级套件 - 2PS/10PT 阀套件（零件号G1316-68709 或者 G1316A 选项#057），以便升级现有的自 G1316A自动调温柱室和应用于交替柱再生的 2PS/10PT阀。该套件包含：2PS/10PT 阀 0101-1343 毛细管套件 G1316-68711 技术注释：除了该套件之外，还需要安装： - G1316A 模块固件版本 A.05.04 或以上版本 - 化学工作站软件 A.9.03 或以上版本（例如 G1656A 化学工作站软件升级版）。有关详情，请参考附带文件。如何为 HPLC 分离制备缓冲液？配制缓冲液：把盐溶解在 1或