雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义

1、雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义孟元光，韩为东，黄柯，伍志强，赵亚力，母义明，宋磊【关键词】LRP16基因；雌激素；Ishikaa细胞；EExpressinregulatinfLRP16geneby17estradilanditssignifianeinhuanendetrialanerIshikaaells【Keyrds】LRP16;estrgen;Ishikaa;Eadherin;endetrialarina【关键词】LRP16基因；雌激素；Ishikaa细胞；E钙粘合素；子宫内膜癌【中图号】Q78；Q250弁言既往研究效果证明LRP16是一个雌激素E2

2、反响性基因，E2通过其受体ER上调LRP16基因的表达，LRP16基因过表达促进内源性ER阳性的乳腺癌F7细胞增殖，而按捺其表达那么限定F7细胞的增殖，而且限定了F7细胞对E2的反响性增殖本领1-4.我们在Ishikaa子宫内膜癌细胞中探究了E2对LRP16基因的表达调控效应以及LRP16表达对E2活性的依靠性，而且研究了LRP16基因过表达对Ishikaa细胞增殖以及侵袭生长的影响，不雅察到LRP16基因表达依靠于E2活性，该基因过表达通过下调E钙粘合素Eadherin促进Ishikaa细胞侵袭生长.1质料和要领1.1质料atrigel胶、Eardherin鼠抗人单抗购于美国BD公司，G41

3、8，24Transell模子体系购于美国ster公司、纤维毗连卵白(Fibrnetin,FN)、小牛血明净卵白BSA以及17estradil购于美国Siga公司；DE造就液、胎牛血清FS购于美国Hylne公司；兔抗P2，P9，D44，鼠抗Eadherin以及atin抗体购于美国Sataruz公司；L15以及无酚红DE造就基购于协和医科大学底子所细胞中央；去除E2血清由我室自行制备；32PdTP购自北京亚辉公司；探针标识表记标帜试剂盒购自美国Prega公司；ER与LRP16真核表达载体由我室保存.II182780由军科院叶棋浓传授提供；Superfet转染试剂购自Qiagen公司；LRP16基因

4、启动子-676至-24bp驱动的荧光素酶报道子pGL3S5拜见文献3.1.2细胞造就Ishikaa，T47D以及DAB231由我室保存，造就参照AT要领.去除E2造就至少3d.1.6NrthernbltTriZl提取总RNA，每个样品取20g上样于12g/L的甲醛变性凝胶，100V电泳1.5h，毛细管法将核酸转移至尼龙膜，80烤膜2h.杂交后的尼龙膜用4SS/5g/LSDS漂洗30in，置-80放射自显影.详细历程拜见文献5.1.7esternblt40g细胞总卵白质上样于100g/L的SDSPAGE胶电泳，转膜后别离与抗人P21400，P91400，D441400，Eadherin1200及

5、atin1500孵育留宿，辣根过氧化物酶标识表记标帜的二抗杂交，放射自显影.2效果2.1LRP16基因在Ishikaa细胞中的表达程度依靠于E2活性接纳Nrthernblt要领阐发了E2对Ishikaa细胞中LRP16表达程度的影响，效果如图1A所示，E2刺激了细胞中LRP16RNA表达程度的上调；为不雅察按捺ER活性对Ishikaa细胞中LRP16表达的影响，我们接纳纯的雌激素按捺剂II182780造就细胞，不雅察到LRP16RNA程度明显下调图1B，该效果表白E2刺激Ishikaa细胞中LRP16表达，而按捺E2活性那么下调LRP16表达.为不雅察ER表达程度对LRP16表达的影响，我们将

6、ER载体瞬时转染Ishikaa细胞，转染后48h检测细胞中LRP16RNA表达量，效果如图1示，外源性转染ER显着进步了Ishikaa细胞中ER的表达量，同时上调了LRP16基因的表达程度；为进一步验证ER是否通过对LRP16基因转激活上调其表达，我们接纳差异剂量的ER表达载体与LRP16启动子驱动的荧光素酶报道子pGLS5共转染T47D,Ishikaa以及DAB231细胞，检测相对荧光素酶活性，效果如图1D示，随细胞中ER含量的增高LRP16启动子活性加强，这一效果明白证明ER具有刺激LRP16转激活效应，而且该效应依靠于ER的含量.以上效果表白LRP16的转激活依靠于E2的活性.图1LRP

7、16基因表达依靠于雌激素活性略图2LRP16基因过表达促进了Ishikaa细胞的侵袭生长略图3LRP16过表达诱导了Ishikaa细胞中Eadherin基因的RNA与卵白程度略3讨论子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，雌激素对正常子宫内膜的过分刺激以及雌激素受体的过分表达是导致子宫内癌产生与希望的重要因素，越来越多的研究资料证明雌激素通过其卑劣靶基因导致子宫内膜癌的产生与希望6，故识别新的雌激素靶基因并对其生物学成效举行研究对从分子程度研究子宫内膜癌有紧张的科学意义与埋伏的诊断治疗代价.LRP16是本研究组识别的一个雌激素反响性基因，既往研究证明雌激素通过其受体ER上调LRP16基因转录，该基

8、因过表达促进内源性ER阳性的乳腺癌F7细胞增殖，分子机制涉及了G1/S期周期转换卵白ylinE与ylinD1的表达上调1-2.但LRP16在内源性ER阳性子宫内膜癌细胞中的研究如今尚不明晰.本工程以子宫内膜癌Ishikaa为形式细胞，重点探究LRP16对雌激素的反响性以及LRP16过表达对细胞生物学举动的影响及其大概的分子学机制.效果表现雌激素刺激LRP16基因在Ishikaa细胞中的表达，而按捺雌激素活性下调了LRP16基因表达，表白LRP16表达对雌激素活性的依靠性，进一步证明LRP16是一个雌激素反响性靶基因，同时证明LRP16表达程度可以反响雌激素的活性状态以及雌激素信号通路的活泼程度

9、.子宫内膜癌的侵袭生长是瘤细胞紧张的恶性表征，其分子学机制重要涉及了P2，P9，D44以及Eadherin的表达下调7-9.我们不雅察到LRP16过表达明显增长了Ishikaa细胞的体外侵袭生长本领，分子学研究效果表现LRP16过表达下调了Eadherin基因的表达，开端表白LRP16促进Ishikaa细胞侵袭生长的分子机制重要涉及了Eadherin表达程度的变革.总之，通过本工程研究我们熟悉到雌激素调控的靶基因LRP16在子宫内膜的产生与希望中大概有紧张作用，进一步的临床病理学研究效果将充实证明这一论点.【参考文献】1HanD,uY,LuX,etal.UpregulatinfLRP16RNA

10、by17estradilthrughativatinfestrgenreeptr(ER),butntestrgenreeptr(ER),andprteshuanbreastanerF7ellprliferatin:ApreliinaryreprtJ.EndRelataner,2022,10(3):215-222.2韩为东，李琦，赵亚力,等.小滋扰RNA按捺LRP16基因表达限定了F7乳腺癌细胞增殖J.中国生物化学与分子生物学报,2022,21(1):113-119.3ZhaYL,HanD,LiQ,etal.ehanisftransriptinalregulatinfLRP16geneexpre

11、ssinby17estradilinF7huanbreastanerellsJ.JlEndrinl，2022,34(1):77-89.4赵亚力,韩为东,母义明,等.雌激素通过ER与Sp1的彼此作用上调LRP16基因的转录J.中国生物化学与分子生物学,2022,20(3):99-105.6atanabeA,KinshitaY,HskaaK,etal.FuntinfestrgenrelatedreeptralphainhuanendetrialanerJ.JlinEndrinetab,2022,7(28):679-685.7ellLK,eyerJJ,Tretiakva,etal.FuntinfestrgenrelatedreeptralphainhuanendetrialanerJ.linanerRes,2022,10(16):5546-5553.8TalvensaariattilaA,Santala,SiniY,etal.Prgnstivaluefatrixetallprteinase2(P2)expressininendetrialen