姜黄素类化合物的分离及其抗肝癌和子宫内膜癌的研究

1、姜黄素类化合物的别离及其抗肝癌和子宫内膜癌的研究【关键词】姜黄素类化合物；,肝癌；,子宫内膜癌摘要：目的从中药姜黄提取3种姜黄素类化合物并对它们进展抗肝癌细胞和子宫内膜癌作用研究。方法采用柱层析法从姜黄提取物中别离出3种姜黄素类化合物，用TT法测定其抗肝癌细胞和子宫内膜癌作用。结果3种姜黄素化合物分别鉴定为姜黄素脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素。0.01g/l双脱甲氧基姜黄素，0.01g/l和0.001g/l脱甲氧基姜黄素能明显抑制肝癌细胞的生长；0.01g/l和0.001g/l双脱甲氧基姜黄素，0.01g/l脱甲氧基姜黄素,0.01g/l和0.001g/l姜黄素能明显抑制子宫内膜癌细胞的生长

2、。结论一定浓度的姜黄素化合物能明显抑制肝癌和子宫内膜癌细胞的生长。关键词：姜黄素类化合物；肝癌；子宫内膜癌IslatinfuruinidsanditsEffetsnLiveranerandEndetrialarinaAbstrat：bjetiveTextratthreeuruinidsfrurualangaandstudythereeffetsnliveranerandendetrialarina.ethdsThreeuruinidseregtfrtheextratfurualangaithlunhratgraphyandthEireffetsnliveranerandendetrialari

3、naeredeterinedbyTT.ResultsThreeuruinidsereidentifiedasuruin,deethxyuruinandbisdeethxyuruin.Itshedthat0.01g/luruin，0.01g/land0.001g/ldeethxyuruinuldresistliveraner,0.01g/land0.001g/lbisdeethxyuruin，0.01g/ldeethxyuruin,0.01g/land0.001g/luruinuldresistendetrialarinaells.nlusinItisaneffetiveethdthaturui

4、nidsareseparatedfrurualangaithlunhratgraphyinthisexperient.Thethreeuruinidshavegdantitureffetsnliveranerandendetrialarinaells.Keyrds：uruinid;Liveraner;Endetrialarina近年来，姜黄素类化合物(uruinids)的研究工作在国内外都颇受重视。它们是中药姜黄的主要有效成分，主要包括姜黄素(uruin)、脱甲氧基姜黄素(deethxyuruin)和双脱甲氧基姜黄素(bisdeethxyuruin)3种。这3种酚类色素相近的构造使它们具有多方

5、面相似的药理作用，如抗炎、抗氧化、降血脂，特别是它的抗诱变和抗肿瘤作用1。但是构造上的微小差异又使3种姜黄素在抗肿瘤、抗氧化作用等方面的才能有较大差异2。因此从姜黄中提取出较为纯洁的3种姜黄素混合物，再进一步将它们别离，对于实际药品消费将会具有良好的指导作用和应用价值。本文就姜黄素类化合物的别离纯化和构造鉴定提供了一种很好的途径并就这3种姜黄素类化合物的抗肝癌和子宫内膜癌作用作出详细的研究。1仪器与材料XT4双目显微熔点测定仪未校正，UV用HP8453紫外光谱仪测定，S用HP5973质谱仪测定，EI离子源.VarianINV400Hz型核磁共振仪TS内标。薄层色谱硅(G)和柱层析硅胶(2003

6、00目)均为青岛海洋化工厂产品。中药姜黄购于四川仙森公司，其品种及来源为urua.LangaL的根茎。RPI1640培养液华美公司分装；TT制剂华美公司分装二甲基亚砜DS由上海金山华工厂提供，分析纯，批号：20020514。姜黄素(J1)、脱甲氧基姜黄素(J2)和双脱甲氧基姜黄素(J3)用50%DS配制，再用RPI1640培养液稀释成0.01，0.001，0.0001g/l备用；DS用RPI1640稀释成5%，0.5%，0.05%用作溶媒对照。子宫内膜癌细胞及肝癌细胞均为贴壁生长型细胞，细胞株由遵义医学院微生物教研室提供。2方法与结果2.1姜黄素类化合物的别离2.1.1提娶别离与纯化姜黄的枯燥

7、根茎，粉碎，过40目筛，用石油醚3060回流5h2次脱脂。残渣用甲醇冷浸提取12h，得黄色膏状物，膏状物进展柱色谱。于=15，L=1200的玻璃层析柱中，以氯仿、甲醇和甲酸9640.1的混合溶液为淋洗剂，分别将3个黄色色带洗脱下来。将Rf值一样的溶液合并，得到3种姜黄素类化合物溶液，记为J1,J2和J3。参照文献方法3，用少量丙酮分别溶解3种姜黄素类化合物，向溶液中快速参加三蒸水至混浊，然后剧烈振荡至混浊液透明并有絮状沉淀出现，再以13000r/in离心5in，弃去上层清液，用氮气吹干沉淀物。重复上述操作3次。2.1.2构造鉴定化合物J1：黄色晶体,p183184,UVlaxH3H422n，1

8、HNR(D3D,400Hz)pp：4.13(6H,s),6.85(2H,s),7.58(4H,dd,8.0,2.0),7.95(2H,d,2.0),8.12(2H,s),8.34(2H,d,8.0),10.41(2H,bs).EIS/z：368(+,20),350(24),320(11),272(18),232(18),217(32),202(6),177(100),145(67),117(18),89(36),52(8),32(23),14(15)，与文献4对照确定为姜黄素,其分子式为21H206。化合物J2：黄色晶体,p163185,UVlaxH3H418n，1HNR(D3D,400Hz)

9、pp：4.633H,s,7.58(2H,dd,8.0,20),7.63(4H,d,8),7.94(2H,d,2),8.13(1H,s),8.33(2H,d,2),8.38(2H,d,2),10.47(1H,s),10.86(1H,s).EI-Sz：338(+,65),320(80),305(10),277(7),242(28),217(33),191(64),177(57),161(21),147(100),119(37),91(32),69(28),43(26),18(66)，与文献5对照确定为脱甲氧基姜黄素，其分子式为20H185。化合物J3：黄色晶体,p208213,UVlaxH3H41

10、2n，1HNR(D3D,400Hz)pp：7.434H,dd,8.0,2.0,7.57(4H,s),8.32(6H,s),10.81(2H,s).EI-S/z：308(+,100),290(20),262(6),202(28),187(26),160(50),147(80),133(15),107(29),83(24),57(32),43(38),28(26)，与文献6对照确定为双脱甲氧基姜黄素，其分子式为19H164。转贴于论文联盟.ll.2.2姜黄素类化合物的抗肿瘤作用2.2.1体外抗肿瘤实验分为不同浓度的试药组、不同浓度的DS组作溶媒对照、空白对照组。取对数生长期的子宫内膜癌细胞及肝癌细

11、胞用RPI1640培养液配成5104/l的细胞悬液，接种于96孔板上，200l/孔，置37，5%2环境下培养24h，待细胞贴壁后参加不同浓度的试药及不同浓度的DS，每孔均为20l，6h后用TT法检测细胞活性。2.2.2TT法测定细胞毒培养完毕后，每孔参加5g/l的TT应用液20l/孔，继续培养4h，去上清液，参加200l/孔DS，震动，待结晶完全溶解后用酶标仪测定每孔D值，测量波长为490n。2.2.3结果各种试药对肝癌细胞的作用结果见表1。由表1可知，0.01g/l双脱甲氧基姜黄素，0.01g/l和0.001g/l脱甲氧基姜黄素能明显抑制肝癌细胞的生长。表1各种试药对肝癌细胞的影响略与空白对

12、照组比拟，*P0.05，*P0.01各种试药对子宫内膜癌细胞的作用结果见表2。由表2可知，0.01g/l和0.001g/l双脱甲氧基姜黄素，0.01g/l脱甲氧基姜黄素,0.01g/l和0.001g/l姜黄素能明显抑制子宫内膜癌细胞的生长。表2各种试药对子宫内膜癌细胞的影响略与空白对照组比拟，*P0.05，*P0.013讨论淋洗剂和展开剂中参加微量的甲酸对姜黄素类化合物起离子抑制作用，使得别离不拖尾，保证它们完全别离。关于姜黄素类化合物抗肿瘤作用报道较多，但报道大多是药材总提取物的药理活性及其在临床上的应用,而对其物质根底化学成分和药效、作用机理及二者的相关性的研究却少有报道。寻找与中医用药功能主治根本吻合的有效成分来控制药材的品质是研究的关键。我们用硅胶柱层析从姜黄中别离出3种姜黄素类化合物分别进展了抗肝癌和子宫内膜癌研究，为姜黄素类化合物的抗肿瘤作用研究提供直接根据，也为姜黄素类化合物抗其他方面的肿瘤提供了新的思路。参考文献：1AnHPT,ahlA.PharalgyfurualngaJ.Plantaed,1991，57:1.2.Rasussen,K.Kvist.ASipleandeffiientseparatinftheuruins,theAntiprt-zalnstituentsfurualngaJ.Plataed,