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文档简介

1、实验二黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导（一）实验目的掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物组织继代培养操作过程。（二）实验原理在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤组织。实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤 配制以下培养基各100ml ：MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAAMS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAAMS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L

2、 NAA取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。 各加入 1mg/ml 6-BA 200l，并不断搅拌。分别加入 1mg/ml NAA 10、50、200l，并不断搅拌。用1mol/L HCl或NaOH调节pH至5.86.0。4. 接种进入无菌室，用70乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润湿。在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。剪成510mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后剪成50mm2左右的小片），每平皿接种35段（片）。每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。光照培养箱25暗培养。作业1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种外植体的愈伤组织诱导率（形成愈伤组织的外植体数/总接种外植体数100

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