基因工程的基本操作程序第步

1、基因工程的基本操作程序第步第1页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二复习提问1.基因工程的基本操作程序的四个步骤2.目的基因主要指什么?也可以是什么?3.获得目的基因常用的方法。4.基因文库主要包括哪两种?5.PCR技术的原理、条件6.PCR与DNA复制的区别（表格）第2页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二PCR技术聚合酶链式反应原理：条件：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的两条链为模板温度控制第3页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二PCR技术与DNA复制的比较DNA复制 P

2、CR技术解旋酶催化 DNA在高温作用下变性解旋 细胞内（主要在细胞核内） 细胞外（主要在PCR扩增仪内） DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等 耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行区别 解旋方式 场所 酶 温度条件 前提有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物联系 模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成原料：均为四种脱氧核苷酸第4页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二PCR技术扩增过程a、DNA变性（90-95）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_ b、复性（55-60）：系统温度降低，引物 与DNA模板结

3、合，形成局部_。 c、延伸（70-75）：在Taq酶的作用下，从 引物的5端3端延伸，合成与模板互补 的_。 氢键单链DNA双链DNA链第5页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二1.用一定的_切割 质粒，使其出现一个切 口，露出_。2.用_切断目 的基因，使其产生_ _。 核心3.将切下的目的基因片段插入质粒的_处， 再加入适量_，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相同(二)基因表达载体的构建第6页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二基因表达载体的构建核心质粒DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目

4、的基因DNA 连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。第7页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。 资 料:第8页，共17页，

5、2022年，5月20日，12点5分，星期二基因表达载体的组成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因等第9页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二(三)将目的基因导入受体细胞借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化目的基因进入_内，并且在 受体细胞内维持_和_的过程受体细胞稳定表达第10页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二方法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射法 Ca离子处理法(三)将目的基因导入受体细胞第11页，共17页

6、，2022年，5月20日，12点5分，星期二 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上2.转化第12页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二1.下表关于基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是2、下列属于获取目的基因的方法的是( )利用mRNA反转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取 利用PCR技术 利用DNA转录 人工合成A. B. C. D.第13页，共17页，2022年，5月20日，1

7、2点5分，星期二3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B有利于对目的基因是否导入进行检测C增加质粒分子的分子量D便于与外源基因连接4. 有关基因工程的叙述正确的是A限制酶只在获得目的基因时才用B重组质粒的形成是在细胞内完成的C质粒都可作为运载体 D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料第14页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二5.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A基因枪法 B显微注射法 C.农杆菌转化法 D花粉管通道法第15页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二 胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出人的胰岛素，想一想，如何设计？ 尝试设计 第16页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二(四)目的基因的检测与鉴定检查是否成功检测鉴定检测转基因生