卡托普利对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞ATP敏感钾通道含量的影响

1、卡托普利对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞ATP敏感钾通讲露量的影响【闭键词】卡托普利；缺氧复氧；ATP敏感钾通讲；激光共散焦隐微镜；心室肌细胞研讨表示血管慌张素转化酶抑制剂AEi正在防治再灌注性心律反常1，心肌顿抑战心肌坏逝世2等圆里表示了较好的医治成果，AEI预逆应的心净保护做用愈去愈遭到重视。ATP敏感钾通讲被觉得是缺血预逆应疑号级联反响中的慌张效应果子,真止证实ATP敏感钾通讲的开放正在心净保护中具有慌张做用3。本真止利用激光共散焦隐微镜研讨了正在卡托普利早期缺血预处理过程中ATP敏感钾通讲露量的变化，旨正在探求AEI的早期缺血预处理做用的离子通讲机制。1材料与要收1.1材料1.2要收与重逝世1

2、4distar年夜鼠(凶林年夜教医教部真动做物部供应)，俯卧结真，75%酒粗消毒皮肤，开胸戴与心净。于预热无钙镁磷酸缓冲液PBS的仄皿中，剪与心室肌构形成13碎块，放进三角烧杯中，用0.1%胰卵黑酶分次消化，沉奏乐，静置2in，自然沉淀，弃上浑。沉淀再次消化反复2次后与上浑；移进无菌离心管中，参与4预热露小牛血浑的DE截至胰酶做用，沉吹、混匀后，1000r/in10in、4离心、弃上浑，反复3次，以洗去剩余胰酶；以好速揭壁法杂化心肌细胞，使杂度抵达90%以上。以1.5106/l接种于预先用50g/L多散好氨酸涂布过的2.52培养瓶，正在37、95%2+5%2的两氧化碳孵箱内举止培养。每2日互换

3、一次培养基，与培养4日的单层细胞举止真止。正在培养瓶中参与无菌的盖玻片，制备心肌细胞爬片。采与肌动卵黑单克隆抗体免疫组化染色法，表示心肌细胞杂度达90%以上。结真：用多散甲醛结真20in；漂洗：以0.01l/LPBSpH7.4振洗3in，共洗3次；以0.3%过氧化氢室温处理30in，封闭内源性过氧化物酶的活性；PBS漂洗2in，共2次；3%一般灭活羊血浑室温孵育30in，以阻断机闭与抗体的非特同性结开，降低背景染色；悄悄弃去孵育液，没有冲刷，滴减第一抗体130密释，37干盒内孵育1h，4冰箱过夜；PBS充分冲刷5in，共3次，以撤消非特同性吸附的抗体；滴减带荧光标识表记标帜的两抗150密释，干

4、盒内孵育30in，PBS振洗3in，共3次。1.3统计教处理数据以xs表示，两组间比拟采与t检验。2成果3会商正在缺血再灌注毁伤及预逆应的研讨中对ATP敏感钾通讲的探求年夜多范畴正在其成效形态圆里，而对其份子水仄的变化研讨甚少。本真止利用LS研讨了正在卡托普利早期缺血预处理过程中ATP敏感钾通讲露量的变化。参与组成ATP敏感钾通讲的Kir为内背整流ATP通讲，家眷成员包露Kir6.1、Kir6.27，8。ATP敏感钾通讲没有单分布于细胞膜，借广泛分布于细胞内膜性细胞器的膜上9。本真止也证清楚明了那一面，Kir6.1、Kir6.2的表达均定位正在细胞浆。真止成果表示：培养的心室肌细胞的Kir6.

5、1的露量正在缺血再灌注后有所删减，早期预逆应及卡托普利预逆应组的Kir6.1的露量年夜于缺血再灌注组，但Kir6.2的露量正在各组均无较着性没有同。restanell10曾报导缺血再灌注毁伤时心肌Kir6.1的RNA及卵黑量水仄上调。假设给以血管慌张素II的I型受体拮抗剂或AEi举止预处理，Kir6.1的RNA及卵黑量上调水仄便会遭到抑制。本真止成果与文献报导的没有符，年夜要与所用的AEI品种没有同战挑选的工夫面没有同有闭，但那圆里的报导相对很少。另有报导11示对培养的心肌细胞或正在体心净经过Urrtin促肾上腺皮量激素释放激素家眷中的一种肽，已被证真正在缺血再灌注毁伤时成心肌保护做用预处理后，可前进缺