高中生物实验-DNA的粗提取和鉴定市公开课金奖市赛课一等奖课件

1、课题 DNA粗提取与判定染色体成份蛋白质RNA(少许)DNA提取DNA基本思绪： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面差异，提取DNA，去除其它成份。1第1页DNA粗提取与判定 1原理、方法和目基本原理方法目标DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样，在0.14 mol/LNaCl溶液中溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀释NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，经过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液杂质当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液部分蛋白质和其它杂质DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉

2、嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶专一性）DNA不溶于酒精溶液加入冷却酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精蛋白质DNA可被二苯胺染成蓝色加入二苯胺，并沸水浴判定DNA高温DNA耐高温DNA和蛋白质对高温耐受性不一样：蛋白质、DNA热稳定性不一样。大多数蛋白质不能忍受6080高温，而DNA在80以上才会变性。DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。加入洗涤剂2第2页1）不一样浓度NaCl中DNA溶解度不一样。 2）DNA与其它细胞成份在酒精中溶解度不一样，DNA不溶于酒精，细胞中一些蛋白质则溶于酒精。3）DNA和蛋白质对酶耐受性不一样：酶专一性蛋白酶水解蛋白质。不过对

3、DNA没有影响。4）DNA和蛋白质对高温耐受性不一样：蛋白质、DNA热稳定性不一样。大多数蛋白质不能忍受6080高温，而DNA在80以上才会变性。5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不一样：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。提取DNA原理包含DNA 两个方面 溶解性和耐受性1.DNA粗提取试验原理3第3页2.试验材料动物鸡血细胞液优点提醒：人和哺乳动物成熟红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取材料，但却是提取血红蛋白理想材料。鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量DNA,既经济又易取 植物：洋葱、新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。4第4页3、方法与过程 1).制鸡血细胞液0.1g/m

4、L柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞5第5页关于DNA粗提取试验材料选择，也经过了屡次试验结果比较，最终选择鸡血做试验材料原因是什么？请回答以下问题：（1）鸡血中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞数目较多，能够提供丰富 （2）试验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做试验材料，而不用鸡全血，主要原因是（3）生活在牧区人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按试验要求完成试验步骤后，结果是 ，这是因为 ， 但若改用动物肝脏做试验材料，试验能够顺利进行，这是因为 。（4）若选取动物肝脏做试验材料，在提取之前，

5、最好增加 程序，使组织细胞更易分离。含有完整、成形细胞核红DNA量，所以普通采取鸡血 鸡全血包含血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩血细胞液，DNA相对含量提升了。在试验中极难提取到DNA哺乳动物成熟红细胞中无细胞核，反靠白细胞和淋巴细胞中少许DNA，在试验中极难提取到肝细胞中含有细胞核，而且肝组织轻易被破坏，有利于DNA提取若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一个简便易行方法。6第6页提取细胞核物质：溶解核内DNA：在滤液中加2mol/LNaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L

6、NaCl溶液溶解DNA。提取较纯净DNA：DNA判定：取两试管各加2mol/LNaCl溶液，将DNA充分溶解于其 中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热 5min后冷却，可发现DNA与试剂反应使溶液展现蓝色。滤取DNA黏稠物：过滤含DNANaCl溶液：用两层纱布过滤。2)试验方法步骤： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停顿加水（此时NaCl溶液浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA粘稠物留在纱布上。 滤液中含有DNA。所得滤液体积分数为95%冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝

7、状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸收上面水分。利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。血细胞在蒸馏水中易吸水而造成细胞膜和核膜破裂，据此可得出含核DNA溶液。7第7页 判定不变蓝对照组溶液逐步变蓝丝状物 (DNA)试验组图示结果加入物质比较均加入：4 mL二苯胺试剂2mol/LNaCl溶液5 mL判定时蓝色深浅与溶液中DNA含量多少相关。自变量你能采取其它方法对DNA进行判定吗？洋葱鳞片叶表皮细胞取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。判定所用试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。8第8页9第9页 注 意 事 项制备鸡血细胞液时

8、，要在取鸡血同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要血细胞。整个试验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”两次加蒸馏水目标不一样，一是涨破细胞，二是稀释溶液。酒精最好用95%冷酒精;加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。确保DNA分子完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。判定DNA时需沸水浴加热。二苯胺试剂要现配现用,不然会影响判定效果.二苯胺是一个有毒性试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体其它部位. 盛放鸡血细胞容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放DNA，轻易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA损失） 10第10页下列图为“DNA粗提取和判定”试

9、验相关操作。这些操作目标正确是（）A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面杂质B.是溶解DNA，去除不溶于酒精杂质C.是溶解DNA，去除不溶于2 mol/L NaCl溶液杂质D.是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液杂质是释放核物质是提纯DNA，去除溶于酒精杂质，稀释NaCl溶液，析出DNA。C11第11页甲、乙两图为“DNA粗提取与判定”试验中包括两个操作装置图。相关叙述正确是 甲 乙A图甲烧杯和图乙试管中所用溶剂都为NaCl溶液，但二者浓度不一样B图乙试管经少许加热后即可观察到一支试管中溶液显著变蓝，另一支试管中溶液不变蓝C图甲操作需用玻棒快速搅拌以使DNA成为絮状沉淀并缠绕在玻棒上D图

10、乙操作中所用二苯胺需现配现用以到达很好判定效果D12第12页植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶解细胞膜。洗涤剂能够瓦解细胞膜原因是：洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与DNA分离开来。利于DNA释放。动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）破坏，因为动物细胞膜外面没有细胞壁保护，放在清水中自然就会吸水而胀破，释放出其中DNA等物质。 4、植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。13第13页方法步骤1、将30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研钵中加入2g氯化钠，研磨直至成半流体状。3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中加入预冷10ml乙醇溶液，静置，可产生絮状DNA。4、取两支试管，分别加入5ml生理盐水，将DNA挑至其中一支试管中，轻轻搅拌使其溶解。有利于DNA溶解2、向研钵中加入10ml蒸馏水或凉开水，搅拌。然后加入10ml洗涤剂，轻轻搅拌。能溶解细胞膜，有利于DNA释放；DNA析出，除去溶于酒精蛋白质14第14页例题1：以下图示中能反应DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mol/L)之间关系是（ ）C0.14DNA溶解度0.140.140.14DNA溶解度DNA溶解度