药动学试验1大鼠口服给药药动学试验

1、【疑问回答】.血浆样品中加入甲醇的作用是什么？用HPLC法测定药物浓度时，蛋白质会沉积在色谱柱上发生堵塞，严重影响分离效果。因此为了防止分析仪器的污染、劣化，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性，必 须进行除蛋白等前处理。常用的预处理方法有有机破坏法、盐析、加热、加酸等。本次 实验加入甲醇的目的是将药物与蛋白质分离开以避免损坏色谱柱。.若实验过程中产生溶血会对实验结果有影响吗？不影响。与药物结合的血浆蛋白主要有三种：白蛋白主要与血浆中的弱酸性药物结合，a 1-酸性糖蛋白主要与血浆中的弱碱性药物结合，脂蛋白主要与血浆中的脂溶性药物结 合。此外B、丫球蛋白主要与内源性生物活性物质结合。对乙酰氨基

2、酚为弱酸性、脂溶 性药物，主要与白蛋白和脂蛋白结合。溶血使血红蛋白释放，不与对乙酰氨基酚结合。 故溶血不会影响实验结果。【思考题】.简述血药法在药动学研究中的意义。药物的药理效应往往与到达作用部位的药物浓度及维持时间密切相关，又因为绝大多数 药物需经血液循环达到作用部位，而药物在血液和组织中往往保持着动态平衡和定量关 系，所以血药浓度与药理作用有密切的相关性。如果想按照作用部位药物浓度水平定量 设计给药方案，必须掌握药物在 ADME过程中血药浓度的变化规律。药物动力学就是运 用数学原理，研究体内药量（主要是血中药量）的经时变化规律，并用数学语言加以描 述，即用一定的数学公式或坐标图象，来表示体

3、内药量（或血药浓度）和时间之间的函 数关系。这种函数图线称之为血药浓度时间曲线，简称药 -时曲线。药物动力学中常用的 基本概念如房室模型、速率常数、生物利用度、表观分布容积、生物半衰期等均是建立 在血药法下。.血浆样品处理方法有哪些？（1）去除蛋白质在测定血样时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质可使结合型的药物分离出来，以便测定 药物的总浓度；去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能（如保护 HPLC柱不被污染），延长使用期限。去除蛋白法有加入与水 相混溶的有机溶剂、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐及铜盐的沉淀剂、酶解法等。（2）缀合物的水解尿中药物多数呈缀合状

4、态。一些含羟基、竣基、氨基和琉基的药物，可与内源性物质葡 萄糖醛酸形成葡萄糖醛酸花缀合物；还有一些含酚羟基、芳胺及醇类药物与内源性物质 硫酸形成硫酸酯缀合物。由于缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂提取。 为了测定尿液中药物总量，无论是直接测定或萃取分离之前，都需要将缀合物中的药物 释出。有些药物仅需较温和条件即可使药物游离，有些则需较剧烈的方法，常用酸水解 或酶水解的方法。（3）分离、纯化与浓集提取法是应用最多的分离、纯化方法。提取的目的是为了从大量共存物中分离出所需要的微量组分一一药物及其代谢物，通过溶剂的蒸发使样品得到浓集。提取法包括液 -液提 取法（LLE）和液-固提取法（L

5、ES）。（4）化学衍生化分离前将药物进行化学衍生化的目的是：使药物具有能被分离的性质；提高检测灵敏度； 增强药物的稳定性；提高对光学异构体分离的能力等。.建立和验证生物样品分析方法包括哪些内容？一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲 线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过 程中的稳定性。有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉 及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和分 析的原则适用于所有涉及的分析物。对照标准物质：在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加

6、入到空白生物 基质中。止匕外，色谱方法通常使用适当的内标。应该从可追溯的来源获得对照标准物 质。应该科学论证对照标准物质的适用性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并 提供储存条件、失效日期和批号。对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物 质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同 位素交换反应，以避免结果的偏差。.隔室模型和统计矩方法在药动学实验结果评价方面的作用分别是什么？隔室模型的定义与分类将整个机体(人或其他动物)按药物转运速率特征划分为若干个 独立的隔室，这些隔室连接起

7、来构成的一个完整的系统，反映药物在机体的动力学特征， 称为隔室模型。机体给药后药物立即分布至全身各体液和组织中，并在体内迅速达到动 态平衡，此时整个机体可视为一个隔室，称为单室模型或一室模型。双室以上的模型称 为多室模型，它把机体看成由药物转运速率不同的多个单元组成的体系。隔室的划分具 有客观性和相对性。药物在体内的动态过程是有一定规律的，可通过一种最佳的房室模 型和参数反映其体内过程，此即为房室模型客观性。同一药物用不同的房室模型处理， 得到的药物动力学参数不同；由于实验条件或数据处理能力不同，同一药物文献报导的 隔室模型可能不同，上述现象即为隔室划分的相对性。统计矩原理，又称矩量分析或矩量

8、法，源于概率统计理论，是研究随机现象的一种数学 方法。其应用于药物动力学和生物药剂学研究的基础是基于药物体内过程的随机变量总 体效应的考虑。当一定量的药物输入体内后，在给药部位或在整个机体内，具有相同化 学结构的各个药物分子的滞留时间属随机变量，药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄， 可以看作为随机变量相应的总体效应。这样，血药浓度时间曲线可看成是某种概率的统 计曲线，即药物在体内的滞留时间的概率分布曲线，横坐标代表滞留时间，纵坐标代表 它的随机分布概率。因此统计矩用于药物动力学研究的主要计算依据是血药浓度-时间曲线下面积，且不需要对药物设定专门的隔室，也不必考虑药物的体内隔室模型特征，适 用于

9、任何隔室，故属于非隔室分析法。只要药物的体内过程符合线性药物动力学过程， 都可以用统计矩理论来进行分析。【讨论】.大鼠药代动力学实验操作细则(1)实验前的材料准备采血EP管准备，需标号、肝素化，按老鼠采血的时间点排好，建议使用1.5-2ml的EP时间安排表制备，内容包括动物的体重、每只动物的各个时间点、给药剂量、给药方式。准备一个数显带秒的电子表，最好是比较大的那种，方便观察。眼眶采血使用的毛细玻璃管，建议保留每根毛细管的平口的两端。准备好医用脱脂棉球或卫生纸，方便每次采血完毕后给动物止血。(2)实验前动物的准备 实验前一天需要给动物禁食不禁水10h以上，在给药前准确称量动物的体重，保证给药剂

10、 量的准确。如实验需要给药前的空白血，建议最好在实验前一天取，减少实验当天动物的失血量。(3)具体实验过程中注意事项不同的给药方式，在实验中所注意的点不同，针对口服给药的实验，采血时间点在前面 可以不用很密集，具体根据实验设计和参考相关文献。正式实验中最好需要2-3名操作人员，一个专门负责看时间，这个角色在整个实验中非 常重要，关系着实验的采血时间的准确性和完整性，其它的具体操作人员均需要受观察 时间的调配。一只动物给药完毕后，需立即计时，即给药零时，其后每个时间均是加上给药零时的时 间，当动物数量较多时，肯定会出现不同动物不同时间点重合问题，这个时候不要乱， 以稍后给药动物稍前的点为先采血。

11、一般每个时间点的采血量不易过多，HPLC用量建议取血不超过0.5ml,否则会使动物过 早地死亡，取血完毕后，应立即按压止血，减少不必要的血流失。装入EP管中的血要上下颠倒两次，保证抗凝，方便离心取血浆。使用玻璃毛细管向眼眶采血，建议用拇指和食指捻进玻璃管，这样容易取血。如果实验设计在2h内动物取血量超过5ml,在两小时后每100体重给生理盐水1ml,以补 充大量的体液流失。如动物需要长时间点的采血，在第一天实验完成后就给正常饮食。2.对乙酰氨基酚的药代动力学过程是什么？对乙酰氨基酚口服吸收迅速、完全，吸收后在体液中分布均匀，口服后0.52h血药浓度达峰伯:，作用维持 34h,约有25%50%f

12、血浆蛋白结合，小量时（血药浓度小于60小g/ml）与蛋白结合不明显；大量或中毒量与蛋白结合率较高，可达43%。对乙酰氨基酚90%95%在肝脏代谢，约60%与葡萄糖醛酸结合，其余与硫酸及半胱氨酸结合。中间代 谢产物对肝脏有毒性作用。t1/2为13h,肾功能不全时半衰期不受影响，但肝功能减退 时可延长12倍，老年人和新生儿也有所延长，而小儿则有所缩短。对乙酰氨基酚主要 以葡萄糖醛酸结合物的形式从肾脏排泄，24h内约有3%以原形随尿排出。【参考文献】1刘怀曾，颜青，高鸿慈.临床药物动力学简介（上）一一血药浓度的意义及药动学有关概念J. 中国医师进修杂志,1986（4）.2国家药典委员会.中华人民共和国药典S.四部.北京：中国医药科技出版社，2015: 1088.3刘建平主编；孙进，张娜，