运动加中药对骨质疏松大鼠骨计量学的影响

1、运动加中药对骨质疏松大鼠骨计量学的影响【摘要】目的观察运动与中药结合作用对骨质疏松大鼠骨组织形态计量学的影响。方法雌性SD大鼠随机分为正常对照组、去卵巢手术组、雌激素对照组、运动组、中药组、运动+中药组。正常对照组行假手术，其余各组行双侧卵巢切除术，术后3个月开场为期3个月的治疗。雌激素对照组用尼尔雌醇治疗，中药组和运动+中药组应用中药治疗，运动组和运动+中药组按要求进展运动。治疗完毕后对腰椎骨作骨组织形态计量学分析。结果运动+中药组骨小梁的数目在治疗各组中最多，骨小梁别离度在各治疗组中最小，矿化沉积率在各组最高。结论运动与中药结合治疗方法对骨质疏松大鼠腰椎骨，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重

2、作用。【关键词】骨质疏松大鼠;骨组织形态计量学;运动;中药骨质疏松是一种多因多果全身性骨骼疾病，其发病机制目前也不完全清楚，虽然各种方法对骨质疏松的预防和治疗均有一定的干预作用，但从总体上看其疗效均较为局限。运动在骨质疏松的预防、治疗和康复过程中均可发挥积极明显的作用1。中药骨康具有补肾壮骨、健脾益气、活血通络的作用，是一个较理想的防治骨质疏松的药物2。本研究旨在讨论运动与中药结合作用对骨质疏松的作用及其机制。1资料与方法1.2主要仪器硬组织切片机(德国LEiaR2155);慢速锯(美国BuehlerLTD.);碳化钨钢刀(德国LEIa)自动图像数字化分析仪(德国Leia);计算机(中国方正电

3、脑公司);骨形态计量学测量软件(美国steetris，In.)。1.3动物及分组选用6月龄安康雌性SD大鼠67只，体重260290g，清洁级(由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：2022A010)。随机分为6组，正常对照组(11只)、去卵巢手术组(12只)、雌激素对照组(12只)、运动组(11只)、中药组(11只)、运动+中药组(10只)。实验动物分笼饲养，自由进食标准饲料和饮用水。参照文献3制作去卵巢骨质疏松模型,用10%水合氯醛溶液按0.33l/100g腹腔注射麻醉，正常对照组大鼠行假手术，其余各组大鼠双侧卵巢完好切除，进展手术造模。手术后正常饲养3个月后开场治疗，治疗时间为3个月

4、。正常对照组、去卵巢手术组和运动组以蒸馏水10l/kg灌胃，1次/d;雌激素对照组按体重1g/kg的标准给予浓度为0.167g/l的尼尔雌醇灌胃，1次/，其余各天给予蒸馏水10l/kg灌胃;中药组和运动+中药组按4.8g/kg骨康(相当于临床剂量的10倍)，灌胃给药，每天1次;运动组和运动+中药组按要求给予跑步训练。本实验模拟田径运动中周期性耐力跑的形式，参照Bedfrd4的动物负荷标准，采用段氏PT98型鼠类跑台进展运动训练。训练大鼠的运动强度逐渐加大，2内到达设计负荷。开场跑速为12/in，持续20in，坡度为0，以后隔日增加运动强度3/in，增加运动时间10in。2后到达跑速2022/i

5、n，坡度为50，每天1h，每周连续训练5d，休息2d。在动物处死前14和13d，以及处死前第3天和第4天分别于背部皮下注射25g/kg盐酸四环素和5g/kg钙黄绿素进展双荧光标记，以测量骨组织动态参数。1.4骨标本制备实验完毕时，处死动物，取其第2腰椎椎体(L2)用低速锯切开暴露骨髓腔置于福尔马林缓冲液中固定24h后,经乙醇脱水后行不脱钙骨包埋。包埋块用硬组织切片机分别切成4的薄骨片和8的厚骨片。薄片用Gldner染色，透明后封片，用于测量骨形态计量学的静态参数。厚片直接透明后封片，用于测量骨小梁变化的动态参数。1.5观察指标测量和观察第2腰椎骨组织形态计量学静态和动态参数5。静态参数包括骨组

6、织面积(T.Ar,2)、骨小梁面积(Tb.Ar,2)、骨小梁周长(Tb.P,)、破骨细胞数量(.N,N)及其相应计算参数。计算参数为骨小梁面积百分数(Tb.Ar,%)、骨小梁宽度(Tb.Th,)、骨小梁数目(Tb.N,N/)、骨小梁别离度(Tb.Sp,)、每毫米破骨细胞数(.N,N/)、单位骨小梁面积破骨细胞数(.N/2,N/2);动态参数包括单荧光周长(sL.P,)、双荧光周长(dL.P,)、双荧光间距(IL.i,)及相应计算参数：荧光周长百分数(L.P,%)、矿化沉积率(AR,/d)、骨形成率(BFR/BS,/d100;BFR/BV,%/年;BFR/TV,%/年)。1.6统计学处理所有数据

7、以xs表示，采用SPSS11.0统计软件，组间比拟显著性测定用方差分析和t检验。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1各组大鼠第2腰椎骨组织形态计量学静态参数的变化从表1中可见，应用雌激素、运动、中药以及运动+中药4种治疗方法都能进步去势大鼠的骨小梁百分数，以运动+中药的疗效最好，但仍不能恢复到正常程度(P0.01)。4种治疗方法在对第2腰椎骨组织形态计量学静态参数的影响方面，雌激素以增加去卵巢大鼠腰椎的骨小梁周长为主，中药治疗主要表达在增加骨小梁的宽度上，而运动以及运动+中药的治疗作用主要表如今增加骨小梁的数目上。参数骨小梁的别离度由大到小的变化趋势为：去卵巢手术组雌激素对照组中药组运动组运动+

8、中药组正常对照组，其中仅有运动+中药组与正常对照组比拟差异不显著(P0.05)，而其他各组均明显高于正常对照组(P0.05)。2.2各组大鼠第2腰椎骨组织形态计量学动态参数的变化见表2，荧光标记百分数的变化，中药组是各组中最高的，而雌激素对照组在4种治疗组最低。运动+中药组大鼠的骨矿化沉积率明显进步(P0.05);而雌激素那么对骨矿化有抑制作用，雌激素对照组骨矿化沉积率比去卵巢手术组还低，与运动组和运动+中药组比拟差异显著(P0.05)。运动组、中药组、运动+中药组的BFR/BS明显高于正常对照组和雌激素对照组(P0.05)。去卵巢手术组、运动组、中药组、运动+中药组表1治疗3个月后大鼠第2腰

9、椎静态指标的变化表2治疗3个月后大鼠第2腰椎动态指标的变化与正常对照组相比：1)P0.01，2)P0.05;与去卵巢手术组相比：3)P0.01,4)P0.05;与雌激素对照组相比：5)P0.01,6)P0.05BFR/BV明显高于正常对照组(P0.05);运动组、运动+中药组和去卵巢手术组的BFR/BV还显著大于雌激素对照组(P0.05)。中药组、运动组、运动+中药组的BFR/TV均较高，与雌激素对照组比拟有显著性差异(P0.01)。每破骨细胞数变化趋势为：正常对照组去卵巢手术组雌激素对照组运动组运动+中药组中药组。而单位骨小梁面积破骨细胞数变化趋势为：去卵巢手术组正常对照组雌激素对照组运动组

10、运动+中药组中药组。3讨论有文献报道3：3月龄和6月龄大鼠去卵巢6个月，均可发生骨质疏松，6月龄大鼠骨质疏松程度更严重。本研究以6月龄大鼠去卵巢6个月后作为实验对象，骨质疏松敏感部位腰椎作为检测部位，对各种骨质疏松干预方法进展骨组织形态计量学评价。本实验结果显示6月龄SD大鼠在去卵巢手术后6月能较好地呈现出绝经后妇女骨质疏松的表现，从而进一步证实了去卵巢手术是复制绝经后骨质疏松实验动物模型的一个成功方法。近来研究证实68，卵巢功能衰退所引起的雌激素缺乏是导致绝经后骨质疏松发生的主要原因。雌激素已成为目前治疗P的首选药物之一。长期应用雌激素替代治疗除具有防止骨丧失和骨折的作用外，尚具有减少更年期

11、病症、预防缺血性心脏并预防痴呆等有益作用，但也可引起子宫出血，增加患者子宫肌瘤和乳腺癌的危险及增加深静脉血栓和肺栓塞的发生率。本实验结果显示雌激素对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用是通过抑制骨转换，即同时减缓骨吸收和骨形成，但以对抗骨吸收为主，从而纠正骨代谢负平衡，减少骨量丧失，改善骨构造，最终到达保护骨的目的。运动能提供力学刺激可维持或改善骨安康，有关研究显示运动能有效干预绝经后骨质疏松的形成9，10。本实验结果说明运动能有效减少大鼠去卵巢后的骨丧失，但仍不能使骨量恢复到正常对照组程度。运动对骨质疏松的治疗作用机制与雌激素治疗有明显的区别，雌激素治疗时，骨形成和骨吸收均受到抑制，以对抗骨吸收为主

12、，而运动具有增强骨形成和抑制骨吸收的双重作用。祖国医学将骨质疏松归于“骨痿的范畴，中医认为肾虚、脾虚、血瘀为本症病机。中药骨康是以“肾主骨理论为指导，针对其“多虚多瘀之病理特点而组方的。全方以淫羊藿、肉苁蓉、补骨脂补肾壮骨为君，黄芪等健脾益气为臣，丹参等活血通络为使而组成，对绝经后骨质疏松有较好的干预作用11，12。本实验说明中药骨康能降低去卵巢大鼠的骨转换，对抗其骨质丧失，对骨质疏松有一定的治疗成效。中药骨康的治疗机制既不同于西药中抑制骨吸收药物(雌激素类)，也不同于促进骨形成的药物(氟制剂类)，而是一种对机体有整体调治功能，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用的药物。中药对骨的双重作用与运动对骨的双重作用比拟，中药治疗的促进骨形成的作用弱于运动治疗。探究一种“复合防治方案，即将多种防治手段有机地结合起来，使之产生多方位的放大干预效应，是目前研究的一个方向13，14。在本次实验