免疫电泳实验报告

1、免疫电泳实验报告摘要：本实验运用火箭电泳、微量电泳、双向免疫扩散等方法测定抗体的效价。关键词：抗体效价测定； 火箭电泳；微量电泳；双向免疫扩散前言免疫电泳 (immunoelectrophoresis) 的方法很多， 主要有单向免疫扩散、 双向扩散电泳、 对流免疫电泳、微量免疫电泳、免疫火箭电泳、免疫固定电泳等几种方法。其中比较常用方法有以下三种。火箭免疫（ rocket immunoelectrophoresis ），该方法是在琼脂板内掺入适量的抗体，在电场的作用下定量的在含适量抗体的离子琼脂中泳动，当走在前面的抗原遭到琼脂板内的抗体时，形成抗原体复合物而沉淀出来，走在后面的抗原继续在电场的

2、作用下向正极泳动，在向前泳动过程中，遇到了前面抗原所沉淀的抗原抗体复合物，由于抗原的增加造成抗原过量时复合物沉淀溶解，并一同向正极移动而进入新的琼脂板内与未结合的抗体结合，有形成新的抗原抗体复合物沉淀出来，这样不断地沉淀溶解再沉淀，直到全部抗原与抗体结合，当比例合适时，可在短时间内出现锥形沉淀线，此沉淀线形似火箭，故称火箭电泳，抗原含量越高所形成的火箭峰愈长，因此依据火箭峰的长度，与标准抗原比较精确地计算抗原的浓。微量电泳， 该方法的原理是不同蛋白质颗粒所带电荷不同，在同一电场中， 因泳动速度不同而发生分离，用于抗原、抗体纯度测定，以及临床诊断。双向免疫扩散（ double immunodif

3、fuison ） , 根据出现沉淀线时抗体的最高稀释度来计算抗体的效价，或者依据沉淀线的出现定性抗原，检测疾病。2材料与方法2 1材料抗体，抗原，巴比妥钠-HCl 缓冲液（ pH8.6， 0.4M ）， 1.5%琼脂糖凝胶，7%醋酸，电泳仪，温箱，玻璃板，打孔器等。22方法2 2 1火箭电泳法配制巴比妥钠-HCl 缓冲液（ pH8.6 ，0.4M ）；制备 1.5%琼脂糖凝胶，煮沸至完全溶解；取琼脂糖凝胶约15ml ，置 55 oC 水浴中降温，并加入抗体200 L ，共同孵育；将二者混匀，铺火箭电泳板，放置冷凝倍比稀释抗原抗体；电泳板打孔(6 孔 )，加入已稀释的抗原 (约 10 L/ 孔

4、)；电泳 34h，电流： 30mA/ 块， 电压： 100120V ；待火箭电泳结束，用0.1%氨基黑染色 10min ， 7%醋酸脱色至条带清晰。2 2 2 微量电泳法用移液管取煮沸的琼脂糖凝胶铺板（7.5 2.5cm)，共 2 块，每块约铺3ml 凝胶 (双扩同样方法，铺3 块 )；给微量电泳板打抗圆孔、抗体槽，并在抗原孔内分别加入阳性抗原和阴性抗原( 约10 L) ；电泳 约4060min，(电压： 46V/cm ；电流： 15mA/cm) ；电泳结束后，取出抗体槽的凝胶，加入15 L 抗体，置37 oC 温箱过夜。2 2 3 双向免疫扩散法铺 2块板，同微量电泳；给双扩板打孔(梅花形

5、)，每板打 2组，一块板中央孔加入未稀释的抗原，每组周围 6 孔加入倍比稀释的抗体；置于 37 oC 温箱孵育 2448hr ，测定抗体效价；另一块板中央孔加入未稀释的抗原，每组周围6孔加入倍比稀释的抗体。置于37 oC 温箱孵育2448hr ，测定抗原效价。3结果3 1 火箭电泳法表：抗原浓度对应的电泳峰值（cm）Ag(x)10.50.250.1250.061250.030625峰值（cm)1.751.551.41.3510.873 2 微量电泳法 实验结果表明， 1/16 抗原孔出现沉淀弧，说明了抗原在此浓度下与抗体反应最为敏感。3 2双向免疫扩散法实验结果表明靠阴性抗原处出现沉淀弧，表明

6、了阴性抗原与抗体反应最为敏感。遇到失意伤心事，多想有一个懂你的人来指点迷津，因他懂你，会以我心，换你心，站在你的位置上思虑，为你排优解难。一个人，来这世间，必须懂得一些人情事理，才能不断成长。就像躬耕于陇亩的农人，必须懂得土地与种子的情怀，才能有所收获。一个女子，一生所求，莫过于找到一个懂她的人，执手白头，相伴终老。即使芦花暖鞋，菊花枕头，也觉温暖；即使粗食布衣，陋室简静，也觉舒适，一句“懂你 ”,叫人无怨无悔，愿以自己的一生来交付。懂得是彼此的欣赏，是灵魂的轻唤，是惺惺相惜，是爱，是暖，是彼此的融化；是走一段很远的路，蓦然回首却发现，我依然在你的视线里；是回眸相视一笑的无言；是一条偏僻幽静的小路，不显山，不露水，路边长满你喜爱的花草，静默无语却馨香盈怀，而路的尽头，便是通达你心灵的小屋瑟瑟严冬，窗外雪飘，絮絮自语说了这多，你可懂我了吗？若你知晓，无需说话，只报一声心灵的轻