高效液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量

1、高效液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量【摘要】目的：建立牛黄清火丸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：TherDS-2HYPERSIL184.6250，5，流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液45：55，V/V，流速：1.0lin-1，检测波长：312n，柱温：30。结果：黄芩苷在0.010.06gl-1范围内线性关系良好r=0.9996；平均加样回收率为99.06%，RSD=0.8%n=9。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于牛黄清火丸的质量控制。【关键词】高效液相色谱法牛黄清火丸黄芩苷含量测定DeterinatinfBaialininNiuhuangqinghupill

2、sbyHPL【Abstratbjetive】TsetupaethdfrqualityntrlfNiuhuangqinghuans.ETHDHPLethdasdevelpedtquantitativedeterinatin.LUN18-TherDS-2HYPERSIN(4.6250,5).Thebiliphaseasethanl-0.4%phsphriaidslutin(45:55V/V).Thelunteperatureas30,theavelengthfrdetetinas312n,flrateas1.0lin-1.RESULTSTheBaialinaveragefreveryrateas9

3、9.06%,andRSDas0.8%(n=9).NLUSINTheethdissiple,aurateandsuitablefritsassaying.【Keyrds】HPL；Niuhuangqinghupills；Baialin；deterinatin牛黄清火丸为?卫生部药品标准?第七册中药成方制剂收载的品种，由黄芩、桔梗、牛黄、山药、丁香等9味中药组成，具有清热、散风、解毒之成效。临床用于肝胃肺蕴热引起的头晕目眩，口鼻生疮，风火牙痛，咽喉肿痛，痄腮红肿，耳鸣肿痛1，疗效良好。处方中黄芩为君药，黄芩苷为其主要有效成分，原标准中只有显微鉴别和薄层色谱。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效

4、液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。1仪器与试药L2022A高效液相色谱仪，LASSVP色谱工作站；黄芩苷对照品批号：110715-200212，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；牛黄清火丸为市售样品哈药集团世一堂制药厂，规格3g/丸，批号：0604158，0604272，0605126。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：TherDS-2HYPERSIN18(4.6250，5)；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液45：55，V/V；检测波长：312n；流速：1.0li

5、n-1；柱温：30。理论板数按黄芩苷峰计应不低于5000。2.2溶液制备2.2.1对照品溶液的制备精细称取经五氧化二磷减压枯燥12小时以上的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成0.1gl-1的对照品贮备液；再精细量取对照品贮备液适量，加甲醇制成30gl-1的对照品溶液，即得。2.2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的牛黄清火丸，剪碎，混匀，取约1g，精细称定，加70%乙醇30l，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50l量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，精细量取2l，置10l量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤，滤液作为供试品

6、溶液2。2.2.3阴性对照溶液的制备取除黄芩以外的处方中其余药材的非常之一量，按法制成大蜜丸，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。2.3专属性试验分别精细汲取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10l注入液相色谱仪，记录色谱图图1。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一样保存时间黄芩苷11.850in的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。2.4线性关系考察精细汲取黄芩苷对照品贮备液浓度：0.1gl-1各适量，分别置于10l量瓶中，加甲醇定容，配成浓度分别为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06gl-1的溶液6份，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤。精细

7、汲取续滤液各10l，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积A为纵坐标，其浓度为横坐标，得黄芩苷的回归方程为：A=28905511.434455.07，r=0.9996n=6。结果说明，黄芩苷在0.010.06gl-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。2.5精细度和稳定性试验精细汲取黄芩苷对照品溶液0.03gl-110l，在上述色谱条件下重复进样5次，求得黄芩苷溶液峰面积的相对标准偏向RSD为0.8%，说明精细度较好。取同一对照品溶液，在0、4、8、12、24h分别进展测定，结果说明黄芩苷对照品溶液的峰面积在24h内稳定，RSD为0.7%n=5。转贴于论文联盟.ll.2.6重复性试验取供试品批号

8、0604158，共5份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进展测定，求得黄芩苷含量的RSD为0.9%n=5，说明重复性良好。2.7加样回收率试验精细称取含量的样品批号0604158，黄芩苷含量9.03gg-1，平均丸重2.901g丸-1适量，共9份，分别精细参加低、中、高3种不同浓度的黄芩苷对照品适量，照“2.2.2供试品溶液的制备方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。2.8样品含量测定分别精细汲取供试品溶液与对照品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定三批样品中黄芩苷峰面积，按外标法计算其含量n=5，结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每丸牛黄清火丸的黄芩苷含量质控定量限为25g。表1黄芩苷加样回收率试验3讨论3.1通过对3批样品中黄芩苷的测定，结果说明最高含量为27.10g丸-1，最低为26.09g丸-1，综合考虑确定限量每丸含黄芩苷不得低于25g。3.2流动相