知柏地黄丸质量标准研究

1、知柏地黄丸质量标准研究【摘要】目的建立知柏地黄丸的质量标准。方法采用TL法对知柏地黄丸中的山茱萸、牡丹皮、黄柏、知母进展定性鉴别；HPL法测定知柏地黄丸中山茱萸中马钱苷的含量。结果薄层色谱鉴别专属性强。马钱苷线性关系良好,平均回收率符合规定。结论方法简便快速、结果准确，可有效控制知柏地黄丸的质量。【关键词】知柏地黄丸；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准知柏地黄丸(浓缩丸)是由山茱萸、黄柏、知母、牡丹皮等8味中药组成的中药成方制剂，具有滋阴降火之成效，临床用于治疗阴虚火旺，潮热盗汗，口干咽痛，耳鸣遗精，小便短赤之症1。知柏地黄丸(浓缩丸)收载于卫生部药品标准，原标准项下除了收载的显微鉴别项和常

2、规检查外，无其他检测工程1。方中山茱萸具有补益肝肾、涩精固脱等作用，其有效成分马钱苷测定的方法有高效液相色谱法23，胶束电动毛细管色谱法4。为了进一步完善该品种质量标准，本实验建立了高效液相色谱法测定知柏地黄丸中(浓缩丸)的马钱苷的含量测定方法，获得了较为满意的结果。现报道如下。1仪器与试药1.1试剂与药材薄层色谱用硅胶G、硅胶H、羧甲基纤维素钠大连海洋化工厂；丹皮酚对照品批号：0708-9704，熊果酸对照品批号：110742-202216，盐酸小檗碱对照品批号：0713-9906,菝契皂苷元对照品批号：11074-202201，马钱苷对照品批号：11640-202202均由中国药品生物制品

3、检定所提供,阴性样品由厂家提供。甲醇、乙腈色谱纯；知柏地黄丸(河南宛西制药股份，批号050501,050502,050503)；其它试剂均为AR级。1.2仪器岛津L-2022高效液相色谱系统日本岛津公司；包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器，Slutin色谱工作站日本岛津公司；FA2104电子天平上海精细仪器科学。2方法与结果2.1薄层色谱鉴别2.1.1牡丹皮取本品粉末15g，参加乙醚20l，超声处理10in，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮2l使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每毫升含1g的对照品溶液。照薄层色谱法5试验,汲取上述两种溶液10l，点于同

4、一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲苯-醋酸乙酯-盐酸(16820.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的斑点。2.1.2黄柏取本品粉末1g，参加甲醇10l，超声处理15in，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5g的对照品溶液。照薄层色谱法5试验,汲取上述两种溶液1l，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10611)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365n下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的荧

5、光斑点。2.1.3山茱萸取本品粉末5g，参加醋酸乙酯20l，超声处理15in，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2l使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每毫升含1g的对照品溶液。照薄层色谱法5试验,汲取上述两种溶液5l，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(20580.1)为展开剂，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的斑点。2.1.4知母取本品粉末30g，参加乙醚30l，超声处理10in，滤过，弃去乙醚液，残渣挥尽乙醚后，加乙醇60l，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至20l，加盐

6、酸2l，加热回流1h后浓缩至约5l，加水10l，加石油醚6090振摇提取2次，20l/次，合并石油醚液，用1氢氧化钠溶液洗涤2次，20l/次，再用水洗涤2次，20l/次，分取石油醚液，蒸干，残渣加石油醚60901l使溶解，作为供试品溶液。另取菝契皂苷元对照品，加石油醚6090制成每毫升含1g的对照品溶液。照薄层色谱法5试验,汲取上述两种溶液10l，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(91)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液710的混合溶液(0.5:5)，在100加热至斑点显色明晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的荧光斑点。2.2含量测定2.2

7、.1对照品溶液的制备精细称取马钱苷对照品,加80%甲醇制成每毫升含马钱苷30g的溶液,即得。转贴于论文联盟.ll.2.2.2供试品溶液的制备取本品粉末约1g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加80%甲醇25l，称定重量，超声处理功率250，频率40kHz20in，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.2.3阴性对照溶液的制备取缺山茱萸的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法制备，即得。2.2.4色谱条件与系统适应性试验色谱柱：Diansil184.6250，5，DS预柱；四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05磷酸溶液16489为流动相；检测波长236n；流速1.0

8、l/in；柱温40；理论塔板数按马钱苷峰计算不低于4500。2.2.5专属性试验照上述色谱条件，分别精细汲取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液20l，分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一样保存时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保存时间无干扰，证明本法可行。结果见图13。2.2.6标准曲线与线性范围精细称取常温减压枯燥24h的马钱苷对照品10.13g，置25l量瓶中，用80%甲醇溶解并稀释至刻度，即得含马钱苷0.4052g/l的马钱苷对照品母液，并稀释成不同浓度的马钱苷对照品子液。结果说明马钱苷在0.040524.052g范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为

9、Y=2E+06x+5664.1(r=1.0000)。2.2.7进样重复性分别精细汲取对照品溶液20l，连续进样6次，测得峰面积的RSD1.5。2.2.8精细度实验中间精细度：分别取供试品溶液在0，1，2，4，6，10，12h，分别进样20l，测得峰面积的RSD1.5，说明供试品溶液较稳定。重复性实验：取同一批供试样品，按样品测定项下方法，连续测定6次，测得含量结果的RSD1.5。说明样品重现性良好。2.2.9加样回收率实验精细称取含量的样品约0.25g，分别定量参加对照品，照供试品溶液制备方法和样品项下的方法测定。结果见表1。2.2.10样品测定结果精细称取3批样品，制成供试品溶液，分别汲取对

10、照品溶液、供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，依法测定，计算马钱苷含量，结果分别为0.7742，0.7795，0.7764g/g(n=3)。表1加样回收率实验结果略3讨论有关山茱萸含量测定方法的研究颇多，主要是以熊果酸、齐墩果酸和马钱苷等为含量检测指标。山茱萸中熊果酸含量测定的文献报道虽比拟多，但熊果酸存在于许多药材如山楂、马鞭草、车前草、紫珠、女贞子、怀牛膝等，非山茱萸的特有成分，并且熊果酸与齐墩果酸这两种成分在天然植物中又是共生共存的。熊果酸与齐墩果酸均属三萜酸，在化学构造上是差向异构体，两者极性几乎无差异。有实验说明，在薄层板上应用?中国药典?条件无法别分开，应用?中国药典?条件测得的熊

11、果酸含量，实际为按熊果酸计算熊果酸与齐墩果酸含量的总和。马钱苷为山茱萸主要有效成分，测定其含量，可为山茱萸及其制剂提供质量控制的有效手段。实验过程中曾采用甲醇水、乙腈水、四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05磷酸溶液等流动相系统。结果以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05磷酸溶液16489作为流动相可以将马钱苷峰与杂质峰较好的别离。在提取方法的选择上，以马钱苷含量作为考察指标，对提取溶剂进展考察：取样品1g3份，精细称定，分别精细参加甲醇，80%甲醇，50%甲醇25l，超声30in。结果说明：用80甲醇提取的含量较高，所以选用80%甲醇作为提取溶剂。对提取方式及时间进展考察：取样品1g6份，精细称定，精细参加80%甲醇25l，3份回流，提取时间分别为20，30，40in；另3份超声，提取时间分别为20，30，40in。结果说明，回流和超声两种提取方式对含量结果影响不大，因超声操作较为简便，且20in能将马钱苷提取完全，应选择超声处理(功率250，频率49kHz)20in。【参考文献】1中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准中药成方制剂，第7册S.1993：93.2水彩红，曹红.HPL法测定山茱萸药材及六味地黄胶囊中马钱