青丝线草多糖的含量测定

1、青丝线草多糖的含量测定【摘要】目的建立青丝线草中多糖的含量测定方法。方法采用苯酚硫酸比色法。结果测得含量为13.74%，精细度及重复性良好，回收率为99.35%,RSD为1.3%。结论此方法操作简便，准确性好，为青丝线草的质量控制提供了一个定量方法和参考根据。【关键词】青丝线草；多糖Abstrat：bjetiveTestablishanUVethdfrthedeterinatinfplysaaridesinPurplehypestes.ethdsPhenl-Vitrilethd.ResultsThententfplysaharideas13.74%,anditsreveryrateas99.3

2、5%,RSDas1.3%.nlusinTheethdissipleandaurate.ItillprvideanexellentquantitativeethdandreferenefrqualityntrlfPurplehypestesherb.Keyrds：PurpleHypestesherb;Plysaharide青丝线草为爵床科Aanthaea枪刀药属植物枪刀药Hypestespurple(L.)Sland的全草1。枪刀药属植物中国产3种，均可药用，分布于中国台湾、广东、广西。味甘淡，性微寒。功能清热解毒，消炎，消肿散淤，凉血止血，健脾，止咳，生津止渴。用于治疗支气管炎、肺结核咳血、咳

3、嗽、消渴、糖尿并刀伤出血、跌打肿痛。据文献报道，青丝线草中主要含有氨基酸、生物碱、酚类、糖类等2，3。现代药理研究证明，多糖物质及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤、抗放射方面均有显著的药理作用与疗效。多糖类中药常作为有效的免疫调节剂，能明显调节T，B，TL，NK和等细胞功能；促进Ig类抗体含量进步，促进IL-2产生和IL-2L的表达，诱导IL-6和TNF的产生4，5。笔者测定了青丝线草中多糖的含量，作为评价该草药质量的指标之一。1仪器与材料1.1仪器FH-207B三用紫外分析仪上海精科实业；SB-5200超声波提取器上海新芝生物技术研究所；AB204-N电

4、子分析天平梅特勒-托利多仪器；TDA-8002型恒温水浴箱余姚工业仪器二厂。1.2试剂无水葡萄糖批号：0403251，广州新成化工厂，AR级，其余化学试剂均为国产AR级。1.3样品青丝线草产自广东江门地区，经广州中医药大学中药鉴定教研室周诚教授鉴定为爵床科枪刀药属植物枪刀药Hypestespurpurea(L.)Sland的全草。2方法与结果2.1青丝线草多糖的提取与精制称取青丝线草粗粉50g，置圆底烧瓶中，加石油醚6090400l，浸泡2h，回流提取1h，滤过，滤渣挥干溶媒，以80%乙醇400l回流提取2次，1h/次，滤过，滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水600l浸泡1h后回流提取1h，滤过，再加

5、蒸馏水400l回流提取1h，滤过，滤液合并，浓缩至200l，Sevage法除蛋白后加95%乙醇使含醇80%，静置过夜，抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮依次洗涤屡次，得精制多糖，60烘干备用。2.2苯酚试液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，蒸馏，搜集182馏分。称取5g，加水溶解，定容于100l棕色容量瓶临用前新配。2.3测定波长的选择精细汲取0.02l/l葡萄糖溶液2.0l，置15l具塞试管中，加苯酚试剂1.0l混匀，加浓硫酸5.0l，混匀，放置15in，置40水浴中加热10in，取出放置15in，以蒸馏水同法操作为空白，在460510n测定吸收度，确定最大吸收波长为488n

6、。2.4标准曲线的制备精细称取经105枯燥至恒重的无水葡萄糖505.6g，置50l量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准液贮备液。取此贮备液分别稀释为0.005056，0.010112，0.020224，0.040448，0.050560g/l的5个不同浓度的对照品溶液。精细汲取溶液各2.0l置10l具塞试管中，加苯酚试剂1.0l混匀，再迅速参加浓硫酸5.0l混匀，放置15in后置40水浴中加热10in，取出放置15in，以相应试剂为空白，照分光光度法在488n处测定吸收度。求得标准曲线回归方程：A=12.975+0.012,r=0.9998n=5。样品在0.0050.05g/l的范围内线性

7、良好。2.5换算因素的测定取60枯燥至恒重的精制青丝线草多糖约10g，精细称定，置50l容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精细汲取该溶液2.0l，照标准曲线制备项下方法，自“加苯酚试剂1.0l起，依法测定吸收度，按下式计算换算因素：f=s/(s为多糖液浓度，为多糖液中葡萄糖浓度)。计算得f=3.93。2.6稳定性实验取样品溶液、标准品溶液及精制多糖溶液各2.0l，照标准曲线制备项下方法，自“加苯酚试剂1.0l起，依法测定吸收度，并分别于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60in测定，结果说明样品液至少在1h内稳定性良好。2.7精细度实验取样品约0.2g，精细称定，按样

8、品测定项下操作，测吸收度，结果RSD=0.82%n=6。2.8重复性实验取药材粉末6份，精细称定，按样品测定项下操作，测吸收度，计算得RSD=0.75%n=6。结果说明该方法具有较好的重复性。2.9回收率实验取药材粉末6份，每份约0.1g，精细称定，精细参加精制多糖约13g，按样品测定项下操作，测吸收度。结果见表1。表1回收率实验结果略回收率%=(测得量-样品中多糖含量)/多糖参加量100%2.10样品测定取样品粉末约0.2g，精细称定，加80%乙醇100l，超声振荡提取20in，过滤，药渣用热80%乙醇洗涤，挥干乙醇后加蒸馏水100l超声振荡提取20in，过滤，滤渣再加80l蒸馏水超声振荡提

9、取20in，过滤，残渣用热水洗涤，洗液并入提取液，待冷后转移于250l容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，精细汲取2.0l，置10l具塞试管中，按“标准曲线项下方法自“加苯酚试剂1.0l起，依法操作，测得吸收度，计算样品中多糖含量。结果见表2。表2青丝线草多糖含量测定结果略3讨论本文利用苯酚硫酸法测定了青丝线草的主要活性成分多糖，作为评价该草药质量的指标之一。此项实验研究为首次报道，本文对青丝线草的主要化学成分的研究结果为开拓新药源提供了新的科学用药根据。多糖含量的测定有多种方法，本文选用苯酚硫酸法，生成橙黄色溶液，在488n处有特征吸收。此方法方便简单，最为常用，但需严格控制水解条件，否那么误差较大。本实验方法操作简单，所用仪器简单，消耗本钱低，在缺乏先进检测仪器的基层单位，实为一种可靠、简单的检测方法。【参考文献】1广州空军.常用中草药手册.北京：人民卫生出版社,2022：50.2严永清,余传隆,黄泰康,等.中药辞海,第2卷.北京：中国医药科技出版社,1993：546.3南京中医药大学.中药大辞典,上册,第2版.上海：上海科学技术出版社，2022：1820.4季宇彬.中药多糖的化学与药理.北京：人民卫生出版社，2