硫化氢对大鼠肺缺血再灌注氧化损伤的影响

1、硫化氢对大鼠肺缺血再灌注氧化损伤的影响【关键词】肺缺血再灌注损伤；硫化氢；硫氢化钠；氧自由基；氧化损伤ipatfhydrgensulfidenxidativedaageinlungfratsaftersurgery,zhngdahspital，sutheastuniversity,nanjing210009,hina)keyrds:lungisheiareperfusininjury;hydrgensulfide;sdiuhydrsulfide;xygenfreeradial;xidativedaage肺缺血再灌注损伤lungisheiareperfusininjury,liri通常发生于肺移

2、植、肺血栓栓子切除术后、肺栓塞溶栓治疗及各种体外循环心脏直视术后，是术后早期导致呼吸功能障碍及死亡的重要原因。如何减轻缺血再灌注损伤一直是医学界研究的重点和难点。liri发活力制非常复杂，尚未完全说明，目前研究认为,可能与氧自由基引起的氧化损伤、钙超载及中性粒细胞(pn)引起的过度炎症反响等亲密相关1，其中机体产生大量的超过机体去除才能的氧自由基(fr)在肺缺血再灌注损伤的病程开展中起了主要作用2。硫化氢(hydrgensulfide,h2s)是近些年来继一氧化氮(n)和一氧化碳()之后人们发现的一种新的内源性小气体信号分子。研究已证实,h2s能减轻心、肝、脑和肠等脏器的缺血再灌注损伤，但有关

3、h2s在liri中的作用的研究报道尚少见。本实验以硫化氢(h2s)供体硫氢化钠(sdiuhydrsulfide,nahs)作为预适应药物，建立大鼠在体liri模型，观察其对肺缺血再灌注氧化损伤的影响，初步讨论其作用机制。1材料和方法1.1材料1.2方法1.2.1实验分组及模型建立50只大鼠随机分成以下5组，假手术组、肺缺血再灌注组及nahs组，后者进一步分为10、20、30lkg-13个剂量组；每组10只。nahs组实验前5d始每天按体重分别腹腔注射不同剂量的nahs，实验前15in再次给药；假手术组和缺血再灌注组同时同方法给与生理盐水1lkg-1。各组大鼠用1戊巴比妥钠40gkg-1腹腔注射

4、麻醉，手术过程中可适量追加戊巴比妥钠，每次5g。颈部气管切开，插管接小动物呼吸机调节呼吸频率7080次in-1，潮气量10lkg-1。经胸骨右缘第35肋间开胸，撑开器暴露右肺组织，大鼠尾静脉注射肝素1000ukg-1，离断右肺下韧带，用手术刀柄轻轻翻开右肺，暴露并游离右肺门；假手术组不阻断右肺门，持续灌注165in，其余各组在吸气末用无创伤血管夹阻断右肺门45in后去除血管夹，右肺组织通气再灌注120in3。实验完毕后左房放血处死大鼠。1.2.2肺组织湿/干重(/d)值测定取右肺中叶局部组织，滤纸吸尽外表液体，电子天平称取湿重，后置入80的烤箱中，48h后称取干重，两者之比为肺湿/干重值。1.

5、3统计学处理采用spss16.0统计学软件进展统计学分析，实验数据以x-s表示，对实验数据行方差分析和t检验，p0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肺组织病理学改变见图1光镜下见：假手术组肺组织肺泡间隔未见增厚，无炎细胞浸润，肺泡腔内无渗出物图1a；肺缺血再灌注组肺组织构造不清，肺泡腔内充满大量渗出物，局部有红细胞漏出及坏死脱落的上皮细胞，肺泡间隔破坏，伴有少量单核细胞浸润图1b；nahs10lkg-1组与肺缺血再灌注组相比，肺组织损伤减轻，肺泡腔渗出物根本消失，局部构造根本恢复正常，局灶性肺泡间隔略有增厚图1；nahs20lkg-1组与肺缺血再灌注组相比，主要表现为肺泡腔渗出物根本消失，

6、病变以局灶性肺不张为主图1d；nahs30lkg-1组与肺缺血再灌注组相比，肺组织损伤亦减轻，肺泡腔渗出物根本消失，可见局灶性肺不张及肺泡间隔增厚图1e。2.2肺组织湿/干重/d值见表1。表1各组大鼠肺组织/d值比拟与假手术组比拟，*p0.05,*p0.01；与肺缺血再灌注组较，p0.05肺缺血再灌注组肺组织/d值较假手术组显著升高p0.01，nahs各剂量组/d值虽较假手术组有所升高p0.05，但均明显低于肺缺血再灌注组p0.05；在3种nahs剂量组间肺组织/d值的差异无统计学意义。2.3缺血再灌注肺组织内da、p含量的测定见表2。表2各组大鼠肺组织匀浆中da、p含量的比拟与假手术组比拟，

7、*p0.05,*p0.01；与肺缺血再灌注组比拟，p0.05与假手术组相比，肺缺血再灌注组肺组织匀浆中da、p含量均显著升高p0.01；各nahs干预组肺组织匀浆中da、p含量虽高于假手术组p0.05，但明显低于肺缺血再灌注组p0.05；而在3种nahs剂量组间da、p含量差异无统计学意义。3讨论liri可导致明显的生理、生化及组织学改变，包括肺血管阻力增加、氧合减弱、肺顺应性降低及肺毛细血管通透性增加等。肺组织/d值是评价肺水含量及肺微血管损伤的常用指标。我们在实验中观察到，缺血再灌注后肺组织/d值大大升高，nahs干预后/d值较肺缺血再灌注组明显降低(p0.05)；同时，肺组织病理切片结果

8、说明,nahs组肺组织水肿及炎症变化程度均较肺缺血再灌注组明显减轻。这些均提示h2s可降低缺血再灌注后肺组织血管通透性，对肺缺血再灌注损伤有一定的保护作用。目前认为，氧自由基(fr)是引起器官缺血再灌注损伤的主要发病因素，主要包括超氧阴离子(-2)、羟自由基(h)及其活性衍生物如过氧化氢(h22)、单线态氧(12)等8。在正常情况下，fr引发的组织损伤可被内源性抗氧化物质所抑制。但在缺血再灌注条件下，组织fr产生过多，而抗氧化系统受到破坏，氧化/抗氧化系统失衡，机体积聚的大量fr可攻击细胞膜脂质中多不饱和脂肪酸、蛋白质及dna等，使得脂质过氧化、蛋白质功能受损及dna链破坏，最终导致了组织损伤

9、和细胞死亡。肺缺血再灌注时fr主要由中性粒细胞“呼吸爆发产生9。肺组织细胞膜上含有大量多不饱和脂肪酸，在缺血再灌注时极易受到fr攻击。da是最具代表性的脂质过氧化代谢终产物之一10。因此，其在肺组织中含量的上下是反映氧化损伤程度的重要标志。本实验结果显示，肺缺血再灌注组肺组织da含量较假手术组明显升高，说明liri时，体内fr的产生与去除失衡，肺组织内fr增加，导致细胞及细胞器膜构造与功能破坏，最终引起了肺水肿、出血等损害。而应用nahs预处理后，da含量虽较假手术组升高，但其幅度明显低于肺缺血再灌注组。提示h2s具有抗氧化损伤才能，能减轻fr所引起的膜脂质过氧化，保护生物膜构造与功能。在li

10、ri发生与开展过程中，中性粒细胞的聚集、激活起重要作用。中性粒细胞氧化应激后可产生特异性酶p，其活性的上下可反映中性粒细胞的浸润程度，zanard等11的研究结果说明，急性炎症时，内源性h2s具有下调致炎性细胞因子及细胞间黏附分子表达的作用，减轻白细胞的黏附与聚集。本实验中观察到，肺缺血再灌注组肺组织p活性较假手术组显著升高，各nahs预处理组p活性虽然高于假手术组，但均明显低于肺缺血再灌注组。提示提早腹腔注射h2s供体nahs可减轻缺血再灌注损伤肺组织中中性粒细胞的聚集与激活。综上所述，内源性小气体信号分子h2s具有进步大鼠机体抗肺缺血再灌注氧化损伤的才能，可能主要是通过直接或间接去除机体局部fr和增加机体内多种内源