苯安莎类抗生素的一种早期鉴别方法

1、苯安莎类抗生素的一种早期区分要领刘爱明武临专王以光张会图赫卫清李永海张侃【关键词】苯安莎类抗生素；酰胺键；颜色反响；区分安莎类抗生素具有紧张的生物学活性，比方，利福霉素是如今临床上最紧张的抗结核病药物之一；格尔德霉素(geldanayin)具有抗肿瘤和抗病毒活性等。安莎类抗生素还具有抗细菌(革兰阳性菌)、抗霉、抗酵母和抗原虫等活性。因此，安莎类抗生平日益受到人们的器重。安莎类抗生素为一个脂肪链(称为安莎桥)毗连于芳香环的两个不相邻原子间的一类化合物，此中的芳香环有苯环和萘环两种，以是安莎类抗生素可以分为苯安莎类抗生素(比方格尔德霉素)和萘安莎类抗生素(比方利福霉素)两种。在的安莎类抗生素中，无

2、论是苯安莎类抗生素照旧萘安莎类抗生素，其安莎桥的一端均通过酰胺键与芳香环相连(迄今唯有萘安莎类抗生素红迪菌素破例，其酰胺键上的羰基被进一步复原)。本文作者地点实行室按照安莎类抗生素的生物合成原理，创立了一种专门针对安莎类抗生素产生菌的分子挑选模子。从泥土分散的约1900株未知放线菌中挑选得到了一批具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌7，这些菌株的发酵产物绝大多数具有抗菌、抗病毒或抗肿瘤活性。怎样从这些阳性菌株的发酵产物中快速、正确地区分安莎类抗生素，显得特殊紧张和急迫。多数安莎类抗生素具有颜色(多为黄色)，安莎桥中含有三烯键的安莎类抗生素具有特性性的紫外汲取峰(268、278和290n)；这些性子

3、对付区分安莎类抗生素有必然帮助，但不克不及够作为比力可靠的、早期区分安莎类抗生素的要领。安莎类抗生素的分子布局中，安莎桥的一端通过酰胺键与芳香环相连。Shnur等8使用甲醇钠(一种强碱)使格尔德霉素的酰胺键开裂，产生了紫色化合物(图1)。我们推测NaH同样具有开裂格尔德霉素的芳香环与安莎桥之间形成的酰胺键作用。杨红玲等9在除莠霉素A(herbiyinA)布局雷同物的分散断定中提及用碱处置惩罚除莠霉素A及其衍生物可以产生紫色化合物。格尔德霉素和除莠霉素A均属于苯安莎类抗生素。通过碱性处置惩罚使苯安莎类抗生素中芳香环与安莎桥之间形成的酰胺键开裂、产生紫色化合物，有大概成为早期区分苯安莎类抗生素的一

4、个特异性颜色反响要领。本文表白该颜色反响可用于具有产生安莎类抗生图1H3Na翻开格尔德霉素的芳香环与安莎桥之间形成的酰胺键素潜能的放线菌发酵液粗提物的阐发，并在苯安莎类抗生素(格尔德霉素)的生物合成基因阻断变株发酵产物的早期区分中，也发挥了明显作用。1质料与要领1.1质料(2)试剂甲醇钠(sdiuethxide，anhydruspder)为ARSRGANIS公司试剂。NaH为国产阐发纯化学试剂。格尔德霉素比较品，本实行室自备。利福霉素SV尺度品购自中国药品生物成品检定所。硅胶板为青岛海洋化工场分厂GF254产物和德国erk公司SiliaGel60F254产物。1.2要领取必然量格尔德霉素比较品

5、或待测菌株发酵上清液的乙酸乙酯提取物，溶于无水甲醇中，点样于硅胶板上，在乙酸乙酯二氯甲烷正己烷甲醇(9661)溶媒体系中展层。展层竣事后，用少量NaH(2.0l/L)溶液举行喷涂，不雅察TL平板上的颜色变革，照相记载。取必然量格尔德霉素比较品或待测菌株发酵上清液的乙酸乙酯提取物，溶于无水甲醇中，于玻璃试管或eppendrf管中直接参加约等质量的NaH(浓度为2.0l/L)或甲醇钠(固体粉末，大概其甲醇溶液)，不雅察颜色变革，接纳上述溶媒体系举行硅胶板展层阐发。2结果与讨论2.1格尔德霉素的显色反响格尔德霉素比较品差异量(4、8、16、32g)在硅胶板上用NaH(2.0l/L)喷涂后的显色。可以

6、看出，格尔德霉素用碱处置惩罚后的显色反响检测敏捷度(4g)高于其自己具有的颜色。2.2三株链霉菌发酵上清液乙酸乙酯提取物中苯安莎类抗生素的早期区分3讨论对付NaH作用于苯安莎类抗生素后的显色反响机制，本文作者曾以格尔德霉素为例举行了开端探究。格尔德霉素别离与甲醇钠(溶于甲醇)和NaH(溶于水)于Eppendrf管中作用后，在乙酸乙酯二氯甲烷正己烷甲醇(9661)溶媒体系(必要滴加数滴冰乙酸，可将Na转换为H)中展层后的紫色化合物Rf值(约0.30)根本雷同(明显小于格尔德霉素自己的Rf值0.63)。在乙酸乙酯二氯甲烷正己烷甲醇(9661)溶媒体系中假设不滴加冰乙酸举行展层，那么NaH作用于格尔

7、德霉素后的部门(乃至全部)产物在硅胶板点样原点上保持不动的区分(NaH喷涂后)(形成羧酸钠盐的缘故)。这些征象说明NaH也是将格尔德霉素芳香环上的氨基与安莎桥上的羧基所形成的酰胺键开裂、产生紫色化合物(图1)。甲醇钠开裂酰胺键的反响机制是碱催化醇解，NaH开裂酰胺键的反响机制是碱性条件下水解，二者作用于格尔德霉素后产生的紫色化合物是有渺小布局差异的，但尚不至于造成硅胶板上Rf值明显差异。NaH用作硅胶板喷涂显色的结果显着好于甲醇钠，加上NaH自制、易得，因此接纳NaH溶液喷涂硅胶板显色越发经济、便利和有用。格尔德霉素和除莠霉素A具有本文先容的显色反响，这两个化合物均属于苯(醌型)安莎类抗生素。

8、双氢除莠霉素A属于苯(酚型)安莎类抗生素，杨红玲等提及该化合物也具有遇碱表现紫色的反响9。本文作者推测，含有三烯键的苯(醌型)安莎类抗生素如安莎三烯(ansatrienin)11，也大概具有本文先容的紫色反响。某些苯安莎类抗生素如部门柄型菌素(ansaitin)类化合物，其芳香环与安莎桥之间的酰胺键被进一步修饰与代替，这类苯安莎类抗生素是否具有本文先容的显色反响，尚不明晰。由于微生物次级代谢产物化学布局的庞大性和多样性，本文先容的颜色反响大概仅实用于具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌所产生的次级代谢产物中苯安莎类抗生素的早期、开端区分和定位，假设用于从大量的放线菌次级代谢产物中早期创造苯安莎类抗生素，有大概会产生很多假阳性结果，由于遇碱变紫色的化合物并不必然都是苯安莎类抗生素；羟基醌类化合物在碱性溶液中也产生颜色改变，使颜色加深，多呈橙、红、紫赤色及蓝色，羟基蒽醌类化合物遇碱表现红紫赤色(Brntrgers反响)12。本文作者曾经用甲醇钠和NaH别离作用于