工作菌液储存期限验证

1、 1目的： 确认工作菌液在2-8条件下的贮存时间。 2范围：适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、 白色念珠菌和黑曲霉的工作菌液贮存。 3环境条件要求所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区域 隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。 4验证方法的依据中国药典2010年版二部。 5验证前准备： 5.1验证用菌种 金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26003 铜绿假单胞菌CMCC(B) 10104 大肠埃希菌CMCC(B) 44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501 生孢梭菌CMCC(B) 64941 白色念

2、珠菌CMCC(F) 98001 黑曲霉CMCC(F) 98003 5.2培养基的制备： 营养肉汤培养基批号： 硫乙醇酸盐流体培养基批号： 营养琼脂培养基批号： 改良马丁琼脂培养基批号： 改良马丁培养基批号： 玫瑰红钠琼脂培养基批号： 以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行 灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。 5.3稀释液的制备： 0.9无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解至1000ml，121灭菌20min。 0.05聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温l，加0.9无菌氯化钠溶液至1000ml 121灭菌20min。 5.4菌原液制备： （1种

3、至营养肉汤培养基中，经30-35培养18-24小时。 1 工作菌液贮存时间验证方案 （2将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中经30-35培养18-24 （3）将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经23-28培养24-48小时。 实验人/日期： （4）接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，2328培5天， 加入35ml含0.05（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后， 采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，备用。实验人/日期： 6.验证内容： 6.1菌种的确认 代数编号接种日期代数编号接种日期 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌

4、 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 6.2仪器设备： 实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过170180干热灭菌至少60分钟。 隔水式恒温培养箱：GRP9050 型北京桑翌科技发展有限公司 生化培养箱：SHP-250型上海森信实验仪器有限公司 立式压力蒸汽灭菌器：LDZM75 上海申安医疗器械厂 天平：DT系列电子天平中国江苏常熟长青仪器仪表厂 电热鼓风干燥箱：101-3AB型天津泰斯特仪器有限公司 家用冰箱 6.3 验证过程 6.3.1新制备原菌液计数 （1珠 菌的菌原液，用稀释液0.9无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数： 2 铜绿假单胞菌 大肠

5、埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期 稀释度稀释日期计数（cfu/ml稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期 （2）取黑曲霉孢子悬液，用稀释液0.05聚山梨酯80 制备菌液，平皿法计数： 菌液名称 黑曲霉 6.3.2保存条件的确认： 将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后，置冰箱（2-8 一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。 6.3.3结果 金黄色葡萄球菌： 稀释度稀释日期计数（稀释度稀释日期计数（cfu/ml） 1 2 3 4 5 6 7 备注： 贮存天数 1 稀释度稀释日期计数（cfu/ml） 3 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 备注： 贮存天数 1 2 3 4 5 6 7 备注： 稀释度稀释日期计数（cfu/ml） 稀释度稀释日期计数（cfu/ml） 4 生孢梭菌： 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 黑曲霉菌： 3 6 9 12 15 备注