磷酸羟基哌喹对血液系统辐射损伤保护作用的实验研究

1、磷酸羟基哌喹对血液系统辐射损伤保护作用的实验研究【摘要】目的研究磷酸羟基哌喹对辐射损伤小鼠血液系统的保护作用。方法40只昆明小鼠，随机分为5组(HPQP低、中、高剂量组,空白对照组和正常组)，除正常组外，其余各组给予4.5Gy60-射线全身照射，以外周血白细胞、血小板计数观察辐射后小鼠的血液系统变化，初步观察药物对血液系统的影响，并挑选出药物的适宜剂量;另取24只小鼠，随机分为3组(用药组、对照组、正常组)，以此前确定的磷酸羟基哌喹最适剂量于照射前灌胃给药，予9.0Gy60-射线全身照射，照射后第9天处死小鼠，以脾结节法、骨髓有核细胞计数法、骨髓病理观察药物对小鼠造血功能的影响。结果磷酸羟基哌

2、喹可促进辐射后小鼠白细胞恢复(P0.01)，降低死亡率(P0.01)，使脾结节(FU-S)数、骨髓有核细胞数明显增加(P0.01)。结论磷酸羟基哌喹对辐射损伤小鼠血液系统有保护作用。【关键词】磷酸羟基哌喹;辐射损伤;血液系统;骨髓;小鼠Abstrst:bjetiveTinvestigatetheprtetineffetfhydrxypiperquinphsphate(HPQP)nheatlgialsysteinjuryinduedbyradiatindaageinie.ethds40aleKuningieererandlydividedintfivegrups(l/iddle/highdseg

3、rups,blankntrlgrupandnralgrup).Allexeptthenralgrupunderenthle-bdy-rayirradiatinat4.5Gy.Theperipheralleukyteandplateletuntseredeterinedfrthepriaryeffetnheatlgialsystetsreenutthestsuitabledsefthedrug.eanhile,anther24ieererandizedint3grups(drugtreatentgrup,ntrlgrupandnralgrup),hihunderentgastrgavageatt

4、hepreviuslydeterinedptialdsefHPQPprirtirradiatinat9.0Gy-rayexeptthenralgrup.Alltheieeresarified9daysafterradiatin,andtheeffetsfthedrugntheheatpietifuntinereevaluatedbyspleenlnyethd,bnearrnuleatedelluntsandbservatinfthebnearrpathlgy.ResultsHydrxypiperquinphsphateanprtethepst-radiativerestratinfperiph

5、eralleukytestanrallevel(P0.01)inie,dereasedrtality(P0.01),andarkedlyinreasedlny-fringunit-spleen(FU-S)andbnearrnuleatedellunts(P0.01).nlusinHydrxypiperquinphsphatehasprtetiveeffetntheradiatin-indueddaageinie;ieKeyrds:hydrxypiperquinphsphate;radiatindaage;heatlgialsyste;bnearr;ie磷酸羟基哌喹是一种人工合成的4-氨基喹啉类

6、衍生物。最早应用于抗疟疾和驱虫，近年有人发现它可以预防和治疗尘肺。王梅等1发现该药可以防治放射性肺损伤，减轻照射引起的肺部病理变化，延缓放射性肺纤维化的进程。近年来该药的新作用不断被人们发现，但它对血液系统的放射防护作用，经检索国内外文献，目前尚未见有关报道。本实验研究磷酸羟基哌喹对小鼠血液系统辐射损伤是否具有保护作用。1材料和方法1.1材料磷酸羟基哌喹：125g/粒，第二军医大学523研究室科研产品。取1粒磷酸羟基哌喹用生理盐水溶解配成10g/L、20g/L，40g/L的混悬液，备用;安康昆明小鼠，雄性，体重2125g，1012周龄，由徐州医学院实验动物中心提供;DE培养液购自Gib公司，小

7、鼠淋巴细胞别离液购自天津灏洋生物制品;血细胞自动分析仪、钴机由徐州医学院肿瘤研究所提供，离心机购自深圳尚能科技。1.2方法1.2.1分组及处理40只昆明小鼠随机分为5组(每组n=8)，磷酸羟基哌喹按人体有效剂量换算为小鼠剂量为65g/kg，分低、中、高(50g/kg，100g/kg，200g/kg)3个剂量组、空白对照组和正常组。除正常组外，所有小鼠给予4.5Gy60-射线全身照射，每次1.5Gy，每天1次，剂量率0.26Gy/in，源皮距75。照射前2天开场，用药组分别灌服不同剂量的磷酸羟基哌喹，每周2次，灌服量0.1l/20g，同时空白组灌服等体积生理盐水，正常组正常进食饮水;照射后1周、

8、2周分别尾静脉采血，行外周血白细胞、血小板计数。并观察其行为、体重等生活状态，初步观察对血液系统的影响，并确定磷酸羟基哌喹的最适剂量。另取24只昆明小鼠，随机分成3组(给药组、对照组、正常组，每组n=8)。以此前确定的最适剂量于照射前2天开场灌胃给药，每周2次;对照组给予等体积的生理盐水，安康组正常进食饮水。小鼠给予9Gy60-射线全身照射，每日1次，每次3Gy，连续3天;照射后第9天处死小鼠。1.2.2脾结节计数(FU-S)方法参照文献2，取脾固定于Buin液，24h后计数脾脏外表结节数，1个脾结节代表1个造血干细胞集落。1.2.4有核细胞计数取另侧股骨及双胫骨，以注射器抽取DE培养液冲出全

9、部骨髓，分散成单细胞悬液，沿管壁小心平铺在淋巴细胞别离液面上，离心、洗涤细胞，以DE重悬，混匀，台朌蓝染色，计数活有核细胞数并计算每根股骨中的有核细胞数。1.3统计学处理所有数据以s表示，采用单因素方差分析，用SPSS13.0软件进展统计分析。2结果2.1小鼠体重等变化照射前小鼠体重各组间差异无显著性。所有小鼠行动敏捷，毛色光滑，照射后对照组体重下降幅度大，上升缓慢，瘦弱，精神较差，行动缓慢，毛色不光滑;照射后2周各组小鼠体重均有上升，精神好转、活动增多，所有小鼠无一只死亡。2.2外周血白细胞、血小板计数见表1。2.3脾结节和有核细胞计数见表2。表1磷酸羟基哌喹对4.5Gy辐射小鼠1周、2周后

10、外周血白细胞、血小板计数的影响与对照组比拟：P0.01，P0.05;与正常组比拟：P0.01，P0.05表2磷酸羟基哌喹对9Gy60-射线辐射后d9小鼠脾结节、有核细胞计数的影响与对照组比拟：P0.01;与正常组比拟：P0.01A.对照组;B.磷酸羟基哌喹组;.正常组3讨论辐射可以导致机体各系统的损伤，骨髓是辐射高度敏感组织，电离辐射后常引起造血功能低下甚或衰竭，造血严重抑制;白细胞、红细胞和血小板数明显减少，从而诱发感染、贫血、出血等并发症。实验发现：小鼠承受-射线全身照射后，照射组小鼠外周血白细胞、血小板明显降低，预防给予磷酸羟基哌喹，可促进辐射损伤小鼠外周血白细胞、血小板的恢复，降低死亡

11、率。脾结节计数是最早、最经典的造血干细胞的测试手段。它能代表动物经照射后体内存活的造血干细胞的程度。因此，脾结节计数可间接反映残存造血干细胞的增殖分化才能，提示骨髓辐射损伤的重建恢复才能。所以脾结节计数是观察抗辐射药物疗效的可靠方法。而骨髓有核细胞计数是反映骨髓损伤的敏感指标。在照射第9天时，造血功能开场恢复3，因此，本实验观察了第9天的各项指标。实验结果显示:9Gy照射后小鼠脾结节数和有核细胞数均以磷酸羟基哌喹组最高，该组有核细胞数甚至超过正常组，进一步证明磷酸羟基哌喹可以促进髓外造血，促进白细胞增生。提示该药对外周血象的保护作用一方面可能是通过促进骨髓造血干细胞的分化、增殖而实现的。通过骨髓病理组织学观察，发现用药后骨髓造血细胞增生活泼，由此推测该药保护血液系统的作用可能是通过促进骨髓造血实现的。对骨髓的作用可能是通过与抗疟不同的机理实现，有待进一步研究证实。本实验结果说明：磷酸羟基哌喹可有效刺激受照后小鼠骨髓粒系造血，防止感染，在放射治疗前使用，可以有效地防治放射性血液系统损伤，保护造血系统。磷酸羟基哌喹是一种人工合成的4-氨基喹啉类衍生物，临床用于抗疟疾，预防和治疗尘肺等4，有人发现该药可以通过保护肺巨噬细胞和型肺泡上皮及血管内皮细胞而减轻炎症反响，从而对放射性肺纤维化有一定防治作用，可以延缓放射性肺炎的进程1。近年来辐射防护药物研究已获得瞩目的成绩，但是仍然存在很多问