实验一双向琼脂扩散试验

1、关于实验一双向琼脂扩散试验第1页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第2页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第3页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第4页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第5页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三实验目的：了解双向琼脂扩散的原理和用途。掌握抗体效价的测定方法。观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。第6页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电

2、解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。实验原理第7页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第8页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散， 当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。双向琼脂扩散试验第9页，共23页

3、，2022年，5月20日，22点7分，星期三一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。第10页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三 免疫学及免疫学检验 A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B ： Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag Ab ；C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag Ab ；D： 扩散率近似，浓度Ag Ab ；E：浓度Ag Ab，扩散率Ag Ab ；F：浓度Ag Ab，扩散率Ag Ab沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系第11页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期

4、三 免疫学及免疫学检验 (1) 沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。(2) 沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。(3) 沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。(4) 沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。A1：待检抗原；A2：标准抗原第12页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三抗体效价滴定 用梅花型孔，中间放抗原，周围孔放下不同稀释度的相应抗体，以出现沉淀线的最高稀释倍数为该抗体的效价。 免疫学及免疫学检验第13页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三材料与试剂1琼脂粉2平

5、皿3打孔器4生理盐水或其他缓冲液5. 抗原、抗体第14页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第15页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三操作方法1称取一定量的琼脂粉，按1.5%的比例加入生理盐水或缓冲液，煮沸融化。2将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm3mm。自然冷却。3根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径35mm）打成梅花形孔图。第16页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第17页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三4挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。5在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔

6、化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。6吸取样品加入孔内(约15ul)，以加满为度。7加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，37自由扩散24h48h。第18页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第19页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三第20页，共23页，2022年，5月20日，22点7分，星期三结果判定用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合，证明为同种抗原；若二者有部分相连，表明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉，说明二者抗原完全不同。第21页，共23页，2022年，5月20日，2