实验1、无菌操作技术实践课件_第1页
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文档简介

1、10级生物技术大实验实验一 无菌操作技术实践1、掌握无菌操作的整个过程（超净工作台的消毒、操作人员的消毒、无菌接种等)及有关注意事项；2、了解植物组织培养技术基本原理；一、实验目的1、无菌操作：是指用于防止微生物进入无菌范围的操作技术。在多种生物实验中,为了防止微生物生长和繁殖影响实验的进行,要在无菌的环境下进行。2、无菌操作技术主要应用于植物组织培养技术、微生物培养中 二、实验原理 胚胎培养 器官培养 组织培养细胞培养 原生质体培养微生物培养大肠杆菌的接种感受态细胞的制备重组DNA转化大肠杆菌 重组质粒DNA小量提取植物组织培养1、植物材料：微型月季无菌苗2、仪器试剂：超净工作台，定时器，酒

2、精灯，灭菌培养皿，人工气候箱，培养基，灭菌废液缸。三、材料仪器 培养基成分（以本实验中的MS培养基为例）成分成分大量元素硝酸钾KNO3铁盐乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA硝酸铵NH4NO3硫酸亚铁FeSO24.7H2O磷酸二氢钾KH2PO4硫酸镁MgSO4.7H2O有机成分肌醇氯化钙CaCl2.2H2O甘氨酸盐酸硫胺素VB1微量元素碘化钾KI盐酸吡哆醇VB6硼酸H3BO3烟酸VB5或VPP硫酸锰MnSO4.4H2O硫酸锌ZnSO4.7 H2O蔗糖30g/L钼酸钠Na2MoO4.2 H2O琼脂7 g/L硫酸铜CuSO4.5 H2O活性炭0.6 g/L氯化钴CoCl2.62植物激素TDZ1、植物

3、材料选取和培养基的准备2、超净工作台的清洁和灭菌 打开紫外灯，30 min后关闭紫外灯。3、操作人员无菌操作前的准备4、外植体接种四、实验步骤4.1、外植体接种具体步骤： 点燃酒精灯，仔细灼烧刀和镊，晾凉； 取一只培养皿，在酒精灯火焰上旋转燃烧数秒，至于双臂之间的无菌区，晾凉； 旋开培养有微型月季的培养瓶瓶盖，扣放在酒精灯边； 用无菌镊子取一株无菌苗放置在培养皿中； 将无菌苗切取为若干个1.5 cm左右单芽茎段，以无菌镊子斜向下45，形态学下端向下接种于培养基中，每瓶均匀接种4个；1、培养基及培养皿需在实验前经过高压灭菌；2、在进行无菌操作时，无菌物与非无菌物应分别放置，手、臂均不可丛无菌区上经过；3、严禁用手直接拿无菌物品，如无菌苗，而必须用无菌镊子夹取；4、无菌苗不可暴露在空气中过久，取出后则不可再放回到原培养瓶内，需以镊子夹取丢至废液缸中；5、接种后需以酒精灯分别灼烧瓶、瓶盖，再拧紧瓶盖；6、在操作时，严禁喧哗

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