液相色谱仪操作规程

1、一、 流动相及样品的准备：1、流动相的选择：有机溶剂必须是色谱级，水必须是超纯水或二次蒸馏。2、流动相的配制：用乙腈 70: 水 30 的比例（例如：配制 500ml 流动相：即用350ml 乙腈，加 150ml水，混匀后放在滤器真空泵上用 0.22m 的滤膜过滤。过滤完成后装在流动相专用瓶子内，放在超声波清洗器上超声脱气 1520 分钟。3. 超声脱气操作：将超声波清洗器上的三个旋钮调到最大，按下电源开关，然后按左边第一个按钮上的按键，机器开始工作。超声器使用前按（以下超声器的使用要求操作）规定超声结束后取出放冷至室温。注意：A根据待检测样品的需要更换合适的流动相时在电脑上关掉泵开关。B 要

2、求样品溶液制备好后也用 0.22m 的微孔滤膜过滤或在进样器上安装过芋滤头后才能进样。二、 开机：1、开机顺序：接通电源，开启稳压电源、再在仪器上依次打开 RID-20A检测器CTO-20A泵) 按键，待自检结束（即以上三个仪器上的设定面板黄色灯灭）后，打开仪器 LC-20AT输液泵上的排液阀（仪器显示器屏幕上的两行数字和字母变成一行时将排液阀逆时针旋转180 Purge键，就可排出相应流路中的气泡，使新鲜的流动相在流路中得以置换，整个过程需要大概 3 分钟后，顺时针将排液阀旋转 180 度关闭。 Lc-solution 图标，工作站开始联机，连上后能听到两次嘀” 的声音。证明泵、自动进样器、

3、柱温箱、检测器全部已连接上。三、LC-solution 操作界面的进入及系统的开启1、双击电脑桌面左侧从上至下第四个图标 Lc-solution，弹出窗口后显示输入用户名 ID 确定仪器进入实时分析界面。桌面上部显黄色表2“仪器参数进入仪器参数设置界面，出现坐表，设置采样时 0.20.40.60.8 慢慢往上加，加至（第一次调整 0.2 50。每次在完成后点击下载”自动冲洗开关（RID 检测器）等待 20 分钟。3、 分析方法的保存：选择文件另存方法文件为选择保存路径取名保存文 件。该方法即作为当前运行的方法。称取葡萄糖标样或标准品 0.025g0.125g0.25g稀释在 25ml 容量瓶中

4、，相当于（0.5 1.0 ,2.0 ,5.0 ,10.0 1.0、3.0 、5.0 、8.0 、10.0 ）于 25ml 容量瓶内。注；浓度以容量瓶容度线摇匀待用。先将 50ml 容量瓶用超纯水冲洗外部擦干后，将容量瓶放于电子天平上称重去皮，将所要测试的麦芽糖浆用玻棒或勺子将样品滴入容量瓶内一滴即可记下称重注 称样过程中注意样品不能滴到瓶外壁上或电子天平上以防称样不准15 分钟取出放至室温备用。1000ml 的烧杯内加入一定量的蒸馏水超声器开关进行超声 15 分钟取出放置室温备注：一般为节省超声时间曲线标样与样品同时超声完成。2 每新配一次流动相均需作曲线。3 未换流动相时，可以直接只做样品代

5、入以前计算方法计算结果。四、进样操作：进样：将制备好的样品用 2.5ml 的进样器（带上滤头）针头将样品吸入、排出 3入进样孔，将进样阀即仪器正面中间黑色手柄逆时针旋转 45后推入进样器活塞。待进样口旁小瓶内开始不断有液体流出 3-5滴时证明样已进满，停止进样。立即将进样手柄顺时针向下旋转 45概 12 分钟左右，此时电脑界面逐渐出现坐标方框显峰。等待过程中可用进样器针头12.5min时左侧单次分析图标显示点亮，证明第一个样品分析结束。先点击左侧单次分析图标，在界面方框修改文件夹名称，自动递增依次显示数值5-6个分析结束。五、曲线计算：1、数据处理：点（桌面左下方）界面出现上下两个标图，点击界

6、面左侧文件夹下框选择所做曲线编号其中任意一个图标双击打开，再点击左侧向导图标，方框（化合物表向导1/51.2.3.编号后框内打，排除 2 和 3 选项框内打，点击下一步，修改方框右上角浓度/ml5 个，点下一步，出现 4/5 向导，再点下一步，修改方框内化合物名。如：1 2 3 麦芽三塘等，在对应的浓度栏内输入称重时的浓度。2，浓度的计算：用所称糖样的克数【麦芽糖或葡萄糖容量瓶容积100浓度】如：麦芽糖容量瓶体积 25 ml10000.496 ml。依次按编号输入对应的麦芽糖和葡20150620 做无含量 3 择方法参数】点击确定，界面又出现上下一小一大两个长条框，在界面左侧主项目下 5个标准

7、品图谱，先点选择其中第一个，点击按住键盘左下角 ctri鼠标一次点完所有 5 个曲线编号，将鼠标移到最上面的数值5 项修改样品类型第一个为标准初始化校准曲线，点击确定。修改第二个样品类型为标准，添加校准点，点确定，点击第二个样品类型方框为黑框后，右击鼠标，选择向下填充，修改方法文件，点击第一个打开出现【选择方法文件】框，找到新建的计算方法，双击直接打开，点击变黑框，右击向下填充，确定，使数据文件第一个显黑确定，以次顺序移入。修改级别号，以次递减，再点击界面左侧【批处理在解析】图标，出现批处理文件夹另存为例如：20150620 无麦芽糖含量 3 据点击“是”出现黄色表框【在解析】点界面右上角关闭

8、。3、验证曲线效果：点主项目下端【校准曲线】图标，界面出现“校准曲线视图”在文件夹中找到刚新建的曲线 3 号计算方法，双击打开显示红点线性。4，样品的计算：在数据处理栏边框文件夹下找到样品编号，双击，点向导，点下一步，选择【化合物表向导】2/5 方框内选择所需要的峰的保留时间框内打“”第一个为乙腈和水的峰值，点下一步，改浓度/ ml，校准曲线的最大级别数改为1,点下一步，再点下一步，修改化合物名称，葡萄糖，麦芽糖，麦芽三糖，输入浓度，点完成。点【应用载方法】打开找到标准曲线计算方法，单击打开，点确定，界面方框出现浓度结果值计算。例如：葡萄糖0.540 /ml3.486 15.49，麦芽糖1.3

9、89 /ml3.486浓度39.85保存。六、 数据文件中报告预览和打印1、报告模板的制作：点击Top 再解析数据分析数据报告” 进入报告界面。2、 调入报告格式文件，用鼠标将报告格式文件拖拽到右侧报告栏内即可3、“样品信息方法信息”“LC/PDA 谱图”“LC/PDA 校正曲线”“LC/PDA 峰表” “LC/PDA 结果等内容 、图标，拖拽鼠标到报告中确定位置，即可依次加入相应的统计信息。4、报告模板保存：文件另存报告格式文件Lc-solution 路径文件名保存。5、数据的打印：在文件收索器中选择欲打印的数据文件，拖拽至报告模板中，然后点击助手栏中的打印按钮即可。七、实验结束1、实验结束，用甲醇冲洗泵 30min 。2仪器开/关 0.5Mpa 以下，按关机顺序关闭仪器电源 。3、溶液滤头至少每3个月清洗一次。不锈钢滤头应先浸在异丙醇或甲醇中超声10分钟，再用超纯水冲洗干