海南胆木药材指纹图谱研究

1、海南胆木药材指纹图谱研究【摘要】目的采用高效液相色谱法建立海南胆木药材的指纹图谱,为海南胆木药材的消费提供质量控制方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为DiansilT182504.6，5；检测波长为227n；流动相为甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脱。结果海南胆木药材指纹图谱中，共有峰相对保存时间与相对峰面积的精细度、重复性和稳定性的RSD均小于3%，符合有关规定。结论所建立指纹图谱可用于海南胆木药材的质量控制。【关键词】海南胆木；高效液相色谱法；指纹图谱；质量控制Abstrat：bjetiveTestablishtheFingerprinthratgraphyfHainanNaule

2、affiinalisbyHPLandprvidetheethdfrqualityntrlfHainanNauleaffiinalis.ethdsAnHPLethdiththeDiansilT18lun(2504.6，5)andaixturefethanl-0.10%phsphriaidslutin(dualgradientelutin)asthebilephaseasused.Thedetetinavelengthassetat227n.ResultsHPLfingerprinthratgraphyf10bathesfsaplesasestablished.Theresultsshedthat

3、thisethdhadagdrepeatabilityandthe8npeakshadanexlusiveprperties.nlusinThefingerprintestablishedanbeusedfrqualityntrlfHainanNauleaeffiinalis.Keyrds：HainanNauleaeffiinalis;HPL;Fingerprint;Qualityntrl胆木为茜草科乌檀属乔木乌檀NaudeaftinalisPierrexPitard枯燥的茎和根,具有清热解毒，消肿止痛等成效。在我国已用胆木制成注射液及胆木浸膏片，治疗钩端螺旋体和上呼吸道感染1。文献报道2，3

4、海南胆木中有效成分为生物碱类,其中异长春花苷内酰胺(isvinsidelatne)含量较高。为确保海南胆木药材消费的质量可控，笔者采用高效液相色谱法，建立了海南胆木药材生物碱类成分的检测方法，通过对海南五指山地区不同栽培地区海南胆木药材的研究，建立其稳定可行的指纹图谱。1仪器与试药aters515高效液相色谱仪；国家药典委员会2022年A版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统。色谱纯甲醇，试验用水为纯洁水，其他试剂均为分析纯。异长春花苷内酰胺对照品中国药品生物制品检定所，110831-202202；胆木药材共10批，采自海南五指山地区栽培地不同区域，经中国医科院兴隆分所陈伟平教授鉴定。2方法与结果

5、2.1色谱条件色谱柱为DiansilT182504.6，5；检测波长为227n；柱温为30；流动相为甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脱，洗脱时间为70in，流速为1.0l/in；进样量为20l，所有组分在70in内出峰完毕。梯度洗脱条件见表1。2.2溶液制备2.2.1对照品溶液制备精细称取异长春花苷内酰胺对照品适量，置于10l容量瓶中，加甲醇溶液适量溶解，并定容至刻度，配制成质量浓度大约为160g/l的对照品溶液。表1梯度洗脱条件略2.2.2供试品溶液制备取胆木药材0.5g，精细称定，置100l具塞锥形瓶中，参加70%乙醇50l，称重，于沸水浴中加热回流40in，放冷，称重，用70%乙醇

6、补足减失的质量，滤过，取续滤液适量，以0.45微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1精细度实验取同一份供试品溶液，连续进样6次，记录其图谱。计算各色谱峰的相对保存时间和相对峰面积比值的RSD。结果说明，RSD分别为0.09%0.21%和0.19%2.55%,均小于3.0%，符合指纹图谱的要求。2.3.2稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于制备后0,2,4,8,16,24h进样，记录其图谱。计算各色谱峰的相对保存时间和相对峰面积比值的RSD。结果说明，RSD分别为0.06%0.23%和0.212.68%，均小于3.0%,符合指纹图谱的要求。2.3.3重复性实验取同一批次的胆木6

7、份,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别进样,记录其图谱。计算各色谱峰的相对保存时间和相对峰面积比值的RSD。结果说明,RSD分别为0.08%0.22%和0.21%2.94%,均小于3.0%,符合指纹图谱的要求。转贴于论文联盟.ll.2.4指纹图谱的建立、分析与评价2.4.1指纹图谱的建立按照供试品溶液制备方法将10批药材制备成供试品溶液，分别进样检测，测定所有供试品溶液的HPL色谱图。根据10批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和相对保存时间等相关参数,进展分析、比拟，制定优化的指纹图谱。见图1。2.4.2共有峰确定根据10批胆木供试品的检测结果，比拟色谱图。选择胆木供试液图谱

8、中峰面积较大、峰形较好的色谱峰作为共有峰，共8个(见图2)，其中7号峰为异长春花苷内酰胺为胆木药材主要成分，其峰面积约占总峰面积70%，峰形稳定，可将该峰作为参照峰。2.4.3共有峰相关信息根据10批胆木样品的色谱图结果，以7号峰作为参照峰，计算各共有峰相对保存时间，结果RSD2.0%见表2。8个共有峰其峰面积总和占总峰面积平均百分比为93%。以参照峰峰面积为基准，计算各共有峰峰面积与参照峰峰面积的比值，共有峰面积比值根本固定。结果见表3。均符合指纹图谱的要求。表2共有峰相对保存时间略表3共有峰的峰面积与参照峰面积比值略2.4.4指纹图谱相似度评价本实验记录了10批海南五指山地区不同区域胆木药

9、材的指纹图谱(见图3)。将测试数据导入国家药典委员会2022年A版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统进展数据处理。得到胆木药材指纹峰共有形式R(见图3)；与共有形式比拟，10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指纹图谱相似度分别为0.994，0.995，0.996，0.995，0.994，0.982，0.990，0.989，0.996，0.998。3讨论3.1提取溶剂的选择取同样量的海南胆木药材分别采用纯乙醇，70%乙醇，50%乙醇，70%甲醇，50%甲醇进展加热回流提取，并将提取液进展HPL分析。结果说明，以70%乙醇提取液的色谱峰强度最大，应选择70%乙醇为提取溶液。3.2检测波长确实定在对供

10、试品溶液进展HPL分析的同时，对紫外检测波长进展了挑选，发如今227n处胆木药材各色谱峰别离度较好，且主要活性成分异长春花苷内酰胺有较强的吸收，应选择227n作为指纹图谱的检测波长。3.3梯度洗脱条件确实定在对供试品溶液进展HPL分析时，分别以甲醇-0.1%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，同时对这两种流动相进展二元等度和梯度洗脱两种方式的挑选，结果按表1的条件可得到别离度较好的胆木药材图谱。3.4相似度分析结果说明，海南五指山地区不同栽培区域的海南胆木药材的相似度很好，品质根本一致。本实验对海南胆木药材指纹图谱的构建进展的初步探究，可以为海南胆木药材的品质评价、质量控制提供检测方法。【参考文献】1符建，邝少铁，曾