关于山药组织培养褐化反应的研究

1、关于山药构造造就褐化反响的研究论文关键词:山药构造造就外植体褐化抗氧化剂造就基质论文摘要:笔者从山药差异外植体(叶、茎段、零余子)、造就基中添加抗氧化剂和差异造就基质3个方面举行试验研究。结果表白,山药差异外植体的褐化程度也不一样,茎段褐化程度最轻;S造就基中添加150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)能有用按捺外植体的褐化;在山药组培苗的快繁阶段接纳液体基质造就方法能明显低落褐化程度,进步山药组培苗成活率。山药(hineseya)具有较高的药用代价及营养代价，重要食用器官为地下块茎，为普通化的滋补食品，通过构造造就技能不但可举行快速生殖，并且能使精良品种种性得以保存连续1,2。但山药在构造造就历

2、程中存在着严峻的褐化发应，常常创造山药组培苗或外植体枯死及其基部造就基颜色黑褐化，这种褐化征象又称为酚污染，严峻影响外植体的脱分化和造就物的再分化3。因此，为了山药构造造就工场化育苗的顺遂举行，笔者就山药构造造就历程中的褐化征象及有用操纵等方面举行了研究探究。1质料与要领1.1质料供试质料为寸金薯叶片、茎段、零余子等常用组培外植体为质料2，山药品种寸金薯来自福建龙岩大池镇。1.2要领2结果与阐发2.1差异外植体的褐化反响由此次试验结果可知，使用山药差异外植体举行构造造就时，其褐化的程度也差异。当外植体为含节间的茎段时，其褐化程度最轻，当外植体为切成小方块的零余子时，褐化征象最严峻，叶片的褐化程

3、度居中。表1为此次试验不雅察统计，由表中的原始数据可看出，零余子褐化程度极其严峻，在试验不雅察历程中创造接纳零余子小块为外植体的造就基均大面积出现黑褐色征象，乃至创造有外植体枯死。大概是由于自己零余子内所含酚类物质较多，再加上举行接种前切成小块质料，损伤面较大，损伤面细胞中的酚类物质，与氧气聚合产生氧化反响，形成较多的有毒醌类物质，扩散到造就基中，从而按捺别的酶的活性，迫害整个外植体构造7,8。2.2差异外源物质对褐化的按捺作用按照试验不雅察结果，参加3种外源物质在早期均能有用按捺外植体的褐化，但随着造就时间的延伸，3种外源物质按捺褐化作用开始分化，处置惩罚S+0.1%活性炭最早创造外植体褐化

4、，并且随着造就时间的再次延伸，褐化征象越来越重，外植体基部造就基褐化块直径最大到达4；S+80g/L半胱氨酸组合在褐化按捺作用上较好于处置惩罚，此次试验表示出最正确按捺结果的是A组合，即：S+150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，其在造就早期创造只有2个样本有略微褐化征象，并且随着造就时间的渐渐增长，褐化程度表示也并不十明白显，仅仅在造就35d摆布时，在外植体基部造就基出现了少量的褐化征象，并且褐化块的直径仅为0.8摆布，遍地理褐化按捺作用趋势见图1所示，组合B与组合的产生褐化均匀瓶数在同一造就时间段均高于组合A，同时组合A在造就20d至40d时间段出现褐化样本数增幅不大，以是图1组合A的按捺

5、作用趋势图也较组合B与组合安稳，因此组合A对样本褐化的按捺起到了较好的作用。2.3差异造就基质对外植体褐化的影响外植体褐化征象在固体基质造就与液体基质造就两种方法表示差异十明白显，按照试验结果，外植体的褐化程度在加了0.7%琼脂的固体造就基中表示显着大于液体造就基，在造就时间到达15d摆布时，外植体基部的固体造就基均出现较显着的褐化征象，以外植体基部为中央，造就基褐化均匀直径为1.5；造就时间渐渐延伸至30d，组培苗基部造就基褐化直径到达了4摆布，部门组培苗出现轻度枯化征象。液体造就方法在造就时间到达30d时，未创造组培苗有显着的褐化征象，外植体生长状态精良，但造就时间达40d后，有少量外植体

6、出现枯化征象，缘故原由大概是因酚类物质氧化反响产生的有毒醌类物质在液体中轻易被稀释，在短时间内无法在液体造就基中形成一个有用作用浓度点，以是外植体生长状态在一按时间内正常。外植体褐化率与造就时间在固体造就与液体造就之间的区别如图2所示，液体造就的外植体褐化率在30d后仅为3%摆布，而固体造就褐化率在此时间段到达了50%，两种处置惩罚在图2表示出的走势有明显区别，液体造就方法比固体造就方法更相宜山药组培苗的快繁。3讨论褐化是指植物构造造就历程中，由于外植体构造被切割和接种快繁时，损伤切面细胞中酚类物质底物在酚氧化酶的作用下与氧气聚合而产生氧化反响，形成有毒的醌类物质，外植体切面敏捷酿成棕褐色或暗

7、褐色，并渐渐扩散至造就基中，按捺别的酶的活性，导致构造代谢紊乱，生长受按捺，终极致使外植体殒命5,9,10。构造造就中按捺褐变要领如今已有大量的研究，如选择相宜的外植体、造就温度、PH值，造就时对外植体举行屡次转移，在造就基中添加防褐剂抗氧化剂，如抗坏血酸(V)、亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等4,6,11。但在山药构造造就中还鲜见相干按捺外植体褐化报道。研究表白，山药构造造就中差异外植体褐化程度也差异，山药植株后期结出的零余子褐化程度最严峻，而其幼嫩节间部褐化程度最轻。在造就基中添加抗氧化剂均在一按时间内能有用按捺外植体的褐化，但山药外植体愈伤构造分化的时间约莫为25d摆布2，以是，只有

8、S+150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为最相宜配方。因山药组培苗快繁周期约莫30d摆布2，而液体基质造就方法正幸亏这一段时间内能使有毒醌类物质无法形成一个有用作用浓度点，因此，在山药组培苗的快繁阶段接纳未加琼脂的液体造就基能有用防范其褐化，进步成活率。褐化是植物构造造就中较为普及的征象，要从根底上办理这种褐化题目，需对褐化产生的缘故原由、生理生化、遗传因素及植物品种等方面举行更深化的研究。参考文献1颜昌敬.植物构造造就手册.上海:上海科学技能出书社,1990.2蔡建荣,曾军,等.怀山药茎段构造造就及增殖的研究J.福建农业科技,2002,(2):14-15.3agerA,Harel.PlyphenlxidasesinplantsJ.Phytheistry,1979,18:193-215.5鲁旭东.植物构造造就中褐变的产生与防范J.农业与技能,1999,19(4):9.