实验3+简单染色法课件

1、实验三 细菌的简单染色目的要求学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。初步认识细菌的形态特征。熟悉无菌操作技术，学习显微镜（油镜）的使用方法。简单染色：利用单一染料对菌体进行染色。染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征，后者使染料能形成盐。简单染色常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类：美兰、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、孔雀绿和蕃红等都属于碱性染料；伊红、刚果红、藻红、苦味酸和酸性复红等属于酸性染料。常用染料细菌的等电点较低，pH值大约在25之间，所以在中性、碱性或弱酸性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷；而碱性染料电离时染料

2、离子带正电荷。因此，带负电荷的细菌常和带正电荷的碱性染料进行结合。所以，在细菌学上常用碱性染料进行染色。细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸），所带正电荷增加，可采用酸性染料染色。微生物染色原理涂片干燥固定染色水洗镜检简单染色方法干燥作业实验报告（结果部分：绘图说明金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的形态特征，注明观察时使用的物镜及放大倍数，排列方式等， ）下一个实验：革兰氏染色法2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。3、固定将已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过23次。原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片

3、上。注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。6、干燥自然干燥：平放于室温，自然干燥；吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。显微镜的基本结构（P41）1. 物镜转换器 2. 物镜 3.标本夹 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光圈 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调

4、螺旋（粗调节器） 12. 微调螺旋（细调节器）13. 镜臂14.镜筒 15.目镜 16.玻片夹推进器显微镜使用操作步骤1、观察前的准备2、显微镜观察3、显微镜使用完毕后的处理1、观察前的准备仔细阅读显微镜使用说明书取镜（一手握镜臂，一手托底座）显微镜的放置（平放，距边缘约10cm）熟悉显微镜，检查显微镜调节光源（光线均匀，亮度适宜）调节双筒显微镜的目镜调节聚光器数值孔径检查显微镜物镜、目镜、聚光器2、显微观察观察程序如下：放置观察标本低倍镜观察高倍镜观察油镜观察将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处于物镜的正下方。放置观察标本上升载物台，从侧面注视调节，使

5、其接近标本。双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。慢慢移动玻片夹推动器，寻找要观察的部位，置于视野中心，观察、记录结果，并准备换高倍镜观察。低倍镜观察下降载物台，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。从侧面注视，慢慢转动粗调螺旋，小心上升载物台，使油镜浸入油中，并几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。调节聚光器及照明后，眼看目镜，微微转动粗调螺旋，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。油镜观察油镜的工作原理（P42）1、增加照明亮度2、增加显微镜的分辨率一些物质的折射率： 水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.5152、增加显微镜的分辨率分辨率（分辨力）是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。 式中 =光波波长数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：其中香柏油的折射率大于空气和水，因此，它作介质时，数值孔径值提高。数值孔径值越大，显微镜最小可分辨距离越小，即分辨率越高。 观察完毕，下降载物台，取下标本片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。用绸布擦净显微