兔肝脱氧核糖核酸提取

1、关于兔肝脱氧核糖核酸的提取第1页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四实验目的掌握从动物组织中提取DNA的原理和方法。第2页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四基本原理第3页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四步骤：(一)脱氧核糖核蛋白的制备10ml刻度离心管取8ml兔肝匀浆，3000转10分钟；（取试管标号，加试剂）弃上清后，沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠8ml ，搅匀后3000转10分钟。弃上清所得即脱氧核糖核蛋白。（加DNA标准液和蒸馏水，二苯胺试剂，加二苯胺试剂的试管不能放在试管架上）第4页，共13页，2022年

2、，5月20日，9点52分，星期四（二）DNA粗制品的提取沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠（终体积为4ml）； 搅匀后 ，逐滴 + 0.5ml 15SDS，搅拌3-5min ，溶液粘稠略带透明。（DNA与蛋白分离） + 1.0ml5M NaCl（终浓度1M），轻搅3-5min； + 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min， 3000转10分钟； （实验二的试管放沸水浴）第5页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min，3500转15分钟；（取出实验二的试管

3、室温放冷并595nm比色，注意添水到水浴锅中）吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 两倍体积的95的乙醇抽提；DNA析出，弃乙醇后则得到白色DNA粗制品。*进行实验二的第二步第6页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四二苯胺显色法测定DNA含量第7页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四熟悉751型分光光度计的使用。掌握DNA纯度测定的原理和方法实验目的第8页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四基本原理DNA在的-脱氧核糖在酸性条件下转变成-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。每ml含2040ug

4、范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙醛，可提高反应的灵敏度。第9页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四步骤一、 DNA标准曲线的制定 0号管调0，以A为纵坐标，DNA含量（ug/ml)为横坐标，绘制标准曲线。二、样品含量测定 沸水浴10min，冷却后595nm比色，并从标准曲线上读数。 U B所提DNA 1ml + 1ml NaOH H2O 2ml 二苯胺4ml二苯胺4ml第10页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四DNA纯度的测定原理：核酸在220-320nm处呈特征性吸收，260nm处有最大吸收，测260/280可得知核酸的大致纯度。 260/280 1.6 1.8 表示纯 1.8 含RNA 1.6 蛋白含量高第11页，共13页，2022年，5月20日，9点52分，星期四岛津UV-120有两个光源：紫外和可见光使用石英杯比色。第12页，共13页