多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226上清液抑制成骨细胞早期分化

1、多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226上清液按捺成骨细胞早期分化【摘要】目的:探究多发性骨髓瘤细胞上清液在体外按捺成骨祖细胞早期分化的征象。要领:以多发性骨髓瘤细胞株RPI8226上清参加到成骨祖细胞3T3-E1rBP2诱导分化体系中造就6d后，计数碱性磷酸酶染色结节并以RT-PR要领测定碱性磷酸酶和骨钙素RNA程度。效果:3T3-E1诱导组和30%的骨髓瘤上清干预组的染色结节计数别离为20.335.16/低倍视野和13.662.80/低倍视野P0.05。别的，30%上清干预组的碱性磷酸酶RNA程度低于诱导组P0.05，而骨钙素RNA程度差异无明显性P0.05)。结论:多发性骨髓瘤细胞RPI822

2、6上清液可以或许按捺rBP2诱导的成骨祖细胞3T3-E1早期分化历程。【关键词】多发性骨髓瘤成骨祖细胞成骨分化Abstrat:bjetive:TinvestigatetheeffetfsupernatantfrutipleyelaellsRPI8226ntheearlystagefsteblastdifferentiatininvitr.ethds:ThesupernatantfrutipleyelaellsRPI8226asaddedintthesystefthesteblastdifferentiatinhihinduedbyrBP2.After6days,steblastaslleted

3、tidentifyALPstainingnduleuntingandRNAfALPandithRT-PR.Results:TheALPstainingnduleuntingas13.662.80/L-visualisinsupernatantinterventingrupanditas,20.335.16/L-visualisinntrlgrup.ThelevelfALPRNAaslerinsupernatantinterventingrupthanthatfntrlgrupP0.05.ButthelevelfRNAinbthgrupasindisriinatinP0.05).nlusin:T

4、hesupernatantfrutipleyelaellsRPI8226inhibitsthetheearlystagefsteblast3T3-E1differentiatinhihinduedbyrBP2.Keyrds:utipleyela;steblast;steblastdifferentiatin多发性骨髓瘤是一种常见血液体系肿瘤多发性疾病，重要病理改变是由于浆细胞克隆性恶性增生，并大量排泄卵白和小分子因子，粉碎了破骨细胞和成骨细胞在正常构造中形成的平衡状态，从而引起骨质粉碎1，2。75%多发性骨髓瘤患者伴有骨痛、骨质疏松、骨质粉碎、病理性骨折或高钙血症等3。如今国表里对多发性骨髓瘤

5、的分子机制研究会合于破骨细胞的激活机制，而成骨细胞按捺的机制不明。我们接纳多发性骨髓瘤细胞株RPI8226上清液与成骨祖细胞株3T3-E1彼此作用造就后，以碱性磷酸酶结节染色和RT-PR法检测碱性磷酸酶和骨钙素RNA程度来展如今体外骨髓瘤细胞上清液对成骨细胞分化成熟历程的影响。1质料和要领1.1质料人多发性骨髓瘤细胞株RPI8226，浙江大学医学院血液研究所金洁传授惠赠AT编号:L-155。鼠胚成骨祖细胞3T3-E1购于武汉大学细胞收藏中央(T编号:RL-2593)。DE-低糖造就液购于GIB公司。碱性磷酸酶染色试剂盒购于上海虹桥医用试剂公司。Trizl购于Invitrgen。RTkit、PR

6、ix购于Ferantas公司。PR引物合成于上海生工。rBP2购于RD公司。1.2要领1.3统计学处置惩罚要领实行数据均以均数尺度差s)表现，以SPSS11.5为统计软件，两两比力接纳单因素方差阐发。2效果2.1细胞形态学，碱性磷酸酶染色效果成骨祖细胞株3T3-E1造就6d后，根本铺满底部，呈梭形，长条带状，并形成集落。诱导组细胞的形态及生长和空缺组无显着差异，上清干预组细胞形态变粗短，细胞内颗粒增多，偶见空泡，生长显着迟钝。碱性磷酸酶染色效果如图1：空缺比较组细胞根本无结节染色，诱导组出现很多紫赤色结节，呈阳性反响，而干预组中细胞紫赤色染色结节淘汰，细胞数目淘汰，30%上清干预组比20%上清

7、干预组更为显着。2.2碱性磷酸酶染色结节计数和骨钙素)、碱性磷酸酶ALP)RT-PR效果30%RPI8226细胞株上清干预组与诱导组比力，碱性磷酸酶染色结节计数P0.05，差异有明显性。而20%上清干预组与诱导组比力P=0.66，差异无明显性。将四组中目的条带与GAPDH基因的比值别离作单因素方差阐发，效果：/GAPDH，空缺比较组与诱导组比力P0.05，诱导组与两个干预组比力，差异均无明显性。而ALP/GAPDH，诱导组别离与空缺比较组、20%上清干预组和30%上清干预组比力，P均小于0.05，差异均有明显性，详见表1，图23。3讨论75%多发性骨髓瘤患者伴有骨痛、骨质疏松、骨质粉碎、病理性

8、骨折或高钙血症等，骨质粉碎成为重要的死因3。如今，国表里有关多发性骨髓瘤的骨质损害的机制研究中，对破骨细胞激活机制研究比力多。研究创造，多发性骨髓瘤细胞能大量排泄某些小分子物质或卵白质，刺激一种被称为破骨细胞生长因子(ReeptrAtivatrfNulearFatr-BLigand，简称RANKL)的化学物质，使破骨细胞过分激活4-5。但是，有研究表白，单用具有阻断骨质重汲取成效的焦二磷酸盐并不克不及使骨质损害的病情彻底改进6，成骨按捺机制在骨损害中亦发挥作用。如今国表里涉及多发性骨髓瘤按捺成骨细胞的活性的研究很少，有研究创造，DKK-1、IL-3、SFRP对成骨历程起调控作用，但详细机制仍不

9、明7-9。成骨细胞体外造就模子的不雅察表现，成骨祖细胞分化分为三个阶段:细胞增殖阶段、骨基质成熟阶段和骨基质矿化阶段10。在骨基质成熟阶段，ALP基因表达程度达最岑岭。在骨基质矿化阶段，基因表达较前显着增长11。3T3-E1细胞株是鼠胚成骨祖细胞，具有成骨细胞表型特性,它能代表分化早期阶段的成骨细胞，表达低浓度的ALP8,10。BP2是存在于骨基质中的酸性卵白质，外源性的BP2在鼠成骨历程中可以刺激I型胶原和ALP等RNA的表达，从而刺激骨形成12-13。在本实行中，我们以BP2诱导成骨祖细胞3T3-E1，可以或许显着增长ALP和RNA和ALP染色结节程度，BP2可以诱导成骨祖细胞向成骨细胞分

10、化。其次，高浓度组30%的骨髓瘤细胞上清与成骨祖细胞作用6d，该条件下成骨祖细胞碱性磷酸酶的RNA及染色结节等均出现明显落落，说明多发性骨髓瘤细胞排泄的人鼠同源的可溶性小分子因子可以通过间接的作用按捺成骨分化中骨基质成熟的早期历程。而代表骨质矿化指标的骨钙素RNA在此条件下并无改变，与以往外洋报道的资料同等，但骨质矿化必要912d以上时间11，延伸干预时间大概会出现别的的效果。我们的实行同时说明，骨髓瘤细胞的上清液中含有骨髓瘤细胞排泄的种种小分子物质或卵白质，可以或许影响成骨分化的作用，这种按捺作用并不依靠于骨髓瘤细胞与成骨细胞的互相打仗。再次，低浓度组20%的骨髓瘤细胞上清与成骨祖细胞作用6

11、d干预诱导成骨历程，碱性磷酸酶染色结节并无淘汰，但是这种浓度下碱性磷酸酶的RNA已有明显性落落，我们阐发是由于该条件下RNA合成落落但卵白程度还未表现出显着的差异，由此我们可以推测，骨髓瘤上清按捺成骨的程度大概与上清液中可溶性物质的浓度有关。本实行阐发，多发性骨髓瘤细胞RPI8226上清液可以或许按捺rBP2诱导的成骨祖细胞3T3-E1早期分化历程，并且本实行创立了多发性骨髓瘤细胞按捺早期成骨分化的细胞模子，为进一步研究骨髓瘤按捺成骨的基因机制奠基了基矗【参考文献】1邓家栋,杨崇礼,杨天楹,等.邓家栋临床血液学.上海:科学技能出书社,2001:1085-1086.2Rux,RavaudP,be

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13、1(6):2094-2098.5TheleyreS,uillaud,DunstanD,etal.RelevanefaninvitrstelastgenesissystetstudyreeptrativatrfNF-BligandandsteprtegerinbilgialativitiesJ.ExperientalellResearh,2022,293(2):292-301.6DjulbegviB,heatleyK,RssJ,etal.BisphsphnatesinutipleyelaJ.hraneDatabaseSystRev,2002,3:D003188.7TianE,zhanFH,alk

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